全 文 ：牡丹江师范学院学报自然科学版 19 9 5. 2
长柱金丝桃培养玻璃化过程中可溶性蛋白质含量的变化
曲春香
摘要 本文对长柱金丝桃的愈伤组织在不同培养基中形成正常苗和玻璃苗时可溶性蛋白质含量的变化
进行了研究 。 结果表明 : 形成玻璃苗时 , 可溶性蛋白质的含量低 ; 而形成正常苗时 , 可溶性蛋白质的含量高 。
许多研究表明 , 很多植物在利用组织培养的方法快速繁殖时 , 都出现了试管苗的玻璃化现象 。 形成的玻
璃苗由于在移栽时不能成活 ,故研究试管苗的玻璃化现象的成因及防止方法已迫在眉 睫 。 在研究了多种因素
对玻璃苗形成的影响 〔 , )的基础上 , 本文又对长柱金丝桃培养玻璃化过程中可溶性蛋白质含量的变化进行了
测定 , 以期研究玻璃苗形成的原因 。
1 材料与方法
实验所用长柱金丝桃 ( H yP er icu m as cy or n) 的愈伤组织按前文 〔 2〕的方法获得 。 将材料继代扩大培养 . 然
后把愈伤组织转接于下面四种培养基中 。 ( 1) N A A .O 01 m g / L (单位下同 ) ; ( 2) N A A .O .0l + B A I, 琼脂含
量为 1. 1% ; ( 3) N A A o . ol + BA I , 附加 1% 的活性碳 ; ( 4) N A A O . 0 1 。 实验中所用基本培养基均为 M S ,
蔗糖含量为 3 % , 若不加特殊说明琼脂的含量为 。 . 6 % , p H 调至 5 . 8 , 培养温度为 23 亡 ~ 27 C , 每日光照 12
小时 , 光照强度 l z o o xx 。
从培养的第 2天开始 ,每隔 3 天取一次样 , 称取培养物 1g ,用 4m IT ir s 一H cl 缓冲液申H )S 冰浴研磨 , 于 lG -
2 0 全 自动高速冷冻离心机中离心 , 以 8 0 0 0 pr m 离心 30 .分钟 。 取上清液用于测定 。 可溶性蛋白质含量的测 定
采用李琳的考马斯亮蓝 G 二 2 50 方法 〔 3〕进行 ,含量用 阳 / g · F w 表示 。 每个样品测定三次 , 各实验重复三次 。
2 结果与讨论
实验结果如图 。
由前文 〔 , 〕的实验结果可知 : 在培养基 ( 1) 中
生长出大量玻璃苗 ; 在培养基 ( 2) 中生长出的玻
璃苗较少 , 大部分是正常苗 ; 在培养基 ( 3) 和
( 4) 中形成的全部为正常苗 。 由图可见 , 可溶性蛋
白质含量的变化基本上反应出培养物在四种培养
基中生长的状况 。 四条曲线在 14 天处均有一峰
值 ,这时在实验中可以看到 ,在四种培养基中愈伤
组织上分化的芽开始迅速生长 , 并在芽的基部又
形成新的不定芽 。
料|淤J |以ǐ 13oF |树
企产.全ùù闻l二午注百
全各界 天七图 日q和卜t六养 毕, l’ l六榨物 ljT冶州 扎自质 污话变 比
但形成玻璃苗及正常苗的培养物中可溶性蛋白质的含量变化又有差异 。 表现在 : 第一 , 曲线 ( 1) 在 8
天时出现一高峰 , 而其他曲线无此峰 。 此时可见在培养基 (1 ) 中的愈伤组织开始迅速生长 , 并分化出芽 。 培
养基 (2 ) 中的愈伤组织虽然也开始了生长 , 但生长速度较慢 。 培养基 ( 3) 和 ( 4) 中的愈伤组织未见生长 。
这说明此峰的出现与培养基 (l ) 中愈伤组织的生长及芽的分化有关 。 第二 , 曲线 ( l) 除 8 天和 20 天之外 ,
其余时间内上升幅度均低于其它曲线 ,说明形成玻璃苗的培养物中可溶性蛋白质的含量较少 。 从图还可以看
到 , 曲线 ( 2) 、 ( 3) 的变化趋势不同于曲线 (1 ) , 而与曲线 ( 4) 相似 。 其中曲线 ( 2) 、 ( 3) 的变化趋势更
相似 , 但曲线 ( 2) 的上升幅度始终低于 (3 ) 。 这可能与培养基 (2 ) 中能形成部分玻璃苗有关 。
以上结果说明 : 不同激素组成的培养基中 , 可溶性蛋白质的变化是不同的 (曲线 ( l ) 、 (4 ) ) ; 即使相同
激素组成 (曲线 ( 1 ) 、 (2 ) 、 ( 3) ) , 但由于增加了琼脂的含量或附加活性碳 , 它们的变化趋势也不同 , 增加
了琼脂含量或添加活性碳的培养基中的变化趋势更接近于有不同激素组成的培养基 ( 4) 中的变化趋势 。 这
似乎说明了培养基 (2 ) 、 (3 ) 、 ( 4) 对培养物有相同的作用效果 。 前文 〔1、我们根据实验结果推论 , 琼脂和活
性碳能克服玻璃化现象 , 可能是由于两者吸附了培养基中激素的缘故 , 即琼脂 、 活性碳等因素对玻璃苗形成
的影响很可能是通过影响了培养基中可利用的激素而达到的 。 本文实验结果基本上支持上述观点 。
参考文献
〔1 〕 曲春香 . 植物激素和琼脂对长柱金丝桃玻璃苗形成的影 响 . 牡丹江师范学院学 报 , 1 9 9 2 , ( 2 ) : 1一 2
DOI : 10. 13815 /j . cnki . jmtc ( ns ) . 1995. 02. 001
牡丹江师范学院学报自然科学版 19 9 5 . 2
〔 2〕 曲春香等 . 长柱金丝桃的组织培养及快速繁殖. 植物生理学通讯 , 1 9 9。 , (2 ) : 40 ~ 4 5
〔3〕 李琳等 . 应用蛋白质染色剂考马斯蓝 G 一 2 50 . 测定蛋白质的方法 . 植物生理学通讯 ,
作者单位 : 牡丹江师范学院生物系
19 8 0
,
( 6 )
编辑 :
:
5 2~ 5 5
司徒琳莉
小鼠大脑皮质体积和表面积的体视学研究
杨春文
小鼠是生物学 、 医学教学科研工作中常采用的实验动物 , 其生物学特征和解剖学特点 , 人们已经了解了
很多 。 然而 , 由于受到研究方法的限制 , 有关小鼠大脑皮质的定量研究却一直是个空白 。 六十年代以来 , 随
着体视学 〔 `〕的兴起与发展及在生物学 、 医学研究中的逐步应用 , 使这一研究成为可能 。 本文应用体视学中最
新提出的垂直截面法 〔 2〕 , 对小鼠大脑皮质体积 、 表面积及其性别方面的异同进行了定量研究 , 现报道如下 :
1 材料与方法
实验所用小鼠为牡丹江医学院实验动物中心提供的标准实验动物— 昆明小白鼠 , 一月龄 , 体重 18 ~
2 克 , 7早 , 7 愈, 全部健康 、 发育正常 。
用颈椎脱臼法处死小鼠 , 迅速精心取脑 , 4%中性甲醛固定 24 小时 。 从脑干上方分离出脑干和小脑 , 沿
大脑半球间的矢状裂切割 。 利用排水法测量各大脑半球的体积 。 按杨正伟介绍的方法 〔 3〕进行无偏估计 : 将大
脑半球内侧面朝下 ,在每侧大脑半球内尽可能中心处任意确定一从上至下的中轴 ,并沿此轴等距随机地切割
大脑半球 , 得到 8个同轴的垂直截面 。 大脑组织块按 eL m ae vi en 氏染色法染色 〔们 , 近距摄影 , 放大投影与摆
线测试系统迭加 , 据测点计数和交叉点计数估计表面积 、 体积 〔 2 · 3〕 。
2 结果与讨论
用体视学方法测定结果如附表
附表 体积 ( m m , ) 、 表面积 ( m m Z ) 和厚度 (m m ) 的估计结果 (又士 S )
项 目 早 含
, 左 右 左 右
大脑体积 1 5 4 . 2士 5 . 3 3 14 0士 1 . 2 9 12 5 7 5士 2 . 2 9 1 3 8士 5 . 2 4
皮质体积 9 8 . 28生 7 . 70 8 2 . 4 2生 4 . 2 4 7 5 . 0 2士 3 . 0 3 8 5 . 8 6士 3 . 8 2
皮质总表面积 2 4 0 . 4 1士 13 . 3 8 2 39 . 9 4士 10 . 8 6 18 9 . 6 9士 9 . 7 3 2 0 2 . 2 4士 1 1 . 60
皮质外表面积 1 5 3 . 0 1士 7 . 8 2 14 8 . 3 6士 4 . 3 7 1 2 3 . 4 7士 5 . 6 2 1 2 4 . 6 8士 1 0 . 3 0
皮质厚度 0 . 8 2士 0 . 0 8 0 . 6 9士 0 . 0 5 0 . 8 0士 0 . 0 8 0 . 8 6士 0 . 0 4
由附表可知 : 小鼠雄性 、 雌性大脑体积为 26 4一 29 4m m 3 ;皮质体积为 161 一 18 1m m 3 , 皮质体积占大脑半
球体积的比例为 61 % ~ 62 % ;皮质总表面积为 3 92 ~ 4 8 o m m Z ,皮质外表面积为 2 48 ~ 301 m m 2 ,皮质外表面积
占皮质总表面积的比例均为 63 % 。 再将雌雄性小鼠的测量结果进行统计学分析 : 雌雄性小鼠的大脑体积 、 大
脑皮质总表面积 、 外表面积和厚度等方面有极显著性差异 (P < 0 . 0 1 ) ,雌性大于雄性 ;大脑皮质体积有显著
性差异 (P < 。 . 0 5 ) ,雌性大于雄性 。 以上几方面在小鼠大脑半球的左右侧别上无显著性差异 (P > 0 . 0 5 ) 。
就体视学方法而言 , 本文的方法具有无偏性 仁2 , 3“ , 垂直截面一次切割完成 , 测试简便迅速 , 方法简单有
效 〔 3〕 。 本文研究的是同一生长条件 、 相同发育时间的雌性和雄性小鼠大脑有不同的形态特征 , 大脑体积 、 皮
质体积和表面积等方面都存在着显著性差异 , 雌鼠大脑发育程度高于雄鼠 。 这一点与小鼠的体发育和性发育
是吻合的 。 关于这种发育相吻合的生理意义及不同年龄段小鼠的大脑发育的规律性 , 尚待进一步研究探索 。
参考文献
〔约 杨正伟 , 叶常青 . 医用体视学的发展与展望 . 解剖学杂志 , 19 94 , 17 (l ) ; 79
〔2〕 aB d d e l e y A J e t a l E s t lm a t i o n o f s u r f a e e a r e a f r o m V e r t i e a l s e e t i o 书 . J M : e r o s e 1 98 6 , 14 2 : 2 59
〔3〕 杨正伟 . 一种估计大器官的体积和表面积的体视学方法 . 川北医学院学报 , 1 9 9 1 , 6 ( 4) : 5
(4 〕 于频 , 刘正津 . 解剖学技术 . 北京 : 人民卫生出版社 , 19 85 . 2 97
作者单位 : 肚丹江 师范学院 , 牡丹江林业中心医院 编辑 : 司徒琳 莉
·
2
·