全 文 ：工 艺 技 术
2014年第8期
Vol . 35 , No . 08 , 2014
白簕叶黄酮的提取纯化及其
抗炎作用初探
杨慧文，张旭红，梁嘉君，潘育方*
（广东药学院药科学院，广东广州 510008）
摘 要：研究了白簕叶黄酮的提取纯化及抗炎效果。实验采用正交设计法优化了超声辅助提取法提取白簕叶黄酮，并
考察了大孔树脂的纯化效果。采用50只SD大鼠，分为阴性对照组、地塞米松阳性对照组、白簕叶黄酮低、中、高剂量
组，灌胃给药7d，末次给药后1h，分别测定大鼠足肿胀度，考察各组用药对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响。结果显
示，采用最优方案提取白簕叶黄酮并进行纯化，所得提取液中总黄酮含量为37.01mg/g，纯化后黄酮纯度达到24.36%。
将SD大鼠连续给药7d后，白簕黄酮提取物10、20、40mg/（kg·d）均能有效抑制角叉菜胶致大鼠足趾肿胀程度。研究结果
表明，白簕叶黄酮具有抗炎效果，进一步开发了白簕的药用价值。
关键词：白簕，总黄酮，超声辅助提取法，大孔树脂纯化，抗炎
Research of extraction，purification and anti-inflammatory effect of
total flavonoids from Acanthopanax Trifoliatus（Linn.） Merr. leaves
YANG Hui-wen，ZHANG Xu-hong，LIANG Jia-jun，PAN Yu-fang*
（Guangdong Pharmaceutical University，College of Pharmacy，Guangzhou 510008，China）
Abstract：To study the extraction，purification and anti-inflammatory effect of total flavonoids from Acanthopananx
Trifoliatus（L.） Merr. leaves，the orthogonal test was carried out to optimize the ultrasonic-assisted extraction
method. 50 rats were divided into normal group，negative control group，positive control group，flavonoid low-
dose group，flavonoid mid-dose group and flavonoid high-dose group. 7d after dosing by intra-peritoneal
injection，carrageenan-induced hind paw edema in rats were conducted to investigate the anti-inflammatory
effect. The content of total flavonoids in extraction with the optimized protocol was 37.01mg/g，and purity was
up to 24.36% after purification. Total flavonoids at dose of 10，20，40mg/（kg·d） could inhibite swelling induced
by carrageenan. Results showed that total flavonoids from Acanthopanax trifoliatus （Linn.） Merr. leaves had
anti-inflammatory effect，which further develop the medicinal value of Acanthopanax Trifoliatus（Linn.） Merr.
Key words：Acanthopanax trifoliatus （Linn.） Merr.；total flavonoids；ultrasonic-assisted extraction；macroporous
adsorption resins；anti-inflammatory effect
中图分类号：TS201.1 文献标识码：B 文 章 编 号：1002-0306（2014）08-0295-04
doi：10.13386/j.issn1002-0306.2014.08.058
收稿日期：2013－06－17 * 通讯联系人
作者简介：杨慧文（1983-），女，硕士研究生，实验师，主要从事药学及
新药开发方面的研究。
白簕（Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr.）为五加
科五加属的植物，又名鹅掌簕、禾掌簕、三加皮、三叶
五加等，在我国大陆多分布于中南部各省。白簕的
根、根皮、茎、叶均可作为药材使用，具有清热解毒、
祛风除湿、散瘀止痛、止咳平喘等功效[1-2]。据研究，白
簕含有皂苷、三萜羧酸、黄酮、糖苷等，化学成分丰
富[3-6]，其植物黄酮经过大量国内外研究证明具有良
好的抗氧化抗菌作用[7-8]，而对其抗炎作用却鲜有研
究。炎症是指具有血管系统的活体组织对损伤因子
所发生的防御反应。炎症与许多疾病的发生、发展和
治愈的过程密切相关。自从百余年前，水杨酸钠被应
用于临床发挥抗炎作用以来，非甾体抗炎药得到了
不断地改进发展，但对胃肠道的损伤始终是其最常
见且最严重的不良反应之一[9]。植物药物常具有高活
性、低毒性的特点，因此，寻找临床有效的植物抗炎
药物具有重要意义。本实验研究白簕叶黄酮的抗炎
作用，有利于白簕的进一步开发利用。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
白簕叶（经广东药学院中药学院中药资源系刘
基柱副教授鉴定为五加属植物白簕，标本保存于广
东药学院中药学院标本室） 购自恩平响山簕菜茶
厂；HPD-600大孔树脂 沧州宝恩吸附材料科技有
限公司；芦丁标准品 中山优诺生物科技发展有限
公司，批号11040302；角叉菜胶 广东药学院药科学
院谭毓治教授馈赠；地塞米松 天津天药药业股份
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有限公司，国药准字H12020686；硫酸、无水乙醇、无
水乙醚、丙酮、苯酚、正丁醇、甲醛等 均为分析纯；
SD大鼠，体重180~200g，雌雄各半 广州中医药大学
实验动物中心提供，实验动物合格证：SCXK（粤）
2008-0020，粤监证字 2008A003。
YLS-7B大鼠足趾容积测量仪 上海软隆科技发
展有限公司；HH-2恒温水浴锅 常州澳华仪器有限
公司；RE-52AA旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；
LD4-2A离心机 北京医用离心机厂；DL-360A超声
仪 上海之信仪器有限公司；UV-1200紫外可见光
分光光度计 上海美谱达仪器有限公司；注射器
广东康尔美医疗器械有限公司，规格：1mL；烘箱
Shanghai Boxun；BL -220H电子天平 Shimadzu
Corporatzon Japan；FA2104A万分之一天平 上海精
天电子仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 白簕叶的预处理 将烘干的白簕鲜叶粉碎过
60目筛，称取约200g白簕叶细粉于1000mL锥形瓶中，
并加入500mL石油醚，于30℃恒温搅拌，待上层提取
液颜色较深时进行抽滤；更新溶剂，如此反复少量多
次浸提至提取液几近无色；把溶剂倾去，样品置于通
风处自然挥干溶剂至无醚味，得到脱色素后的白簕
叶粉末，备用。
1.2.2 白簕叶黄酮的提取正交优化 称取9份白簕
叶粉末，每份各2.0g，采用超声辅助提取法（超声功率
250W）提取白簕叶总黄酮，以芦丁为对照品做含量
测定指标。以总黄酮含量为测定指标，优化提取工
艺。根据白簕叶黄酮的性质，选择乙醇浓度、超声时
间、固液比和超声次数作为四个考察因素 [10]，每个因
素设定三个水平，按L9（34）表做正交实验，正交实验
因素水平表见表1。
1.2.3 芦丁标准曲线及回归方程的建立
1.2.3.1 芦丁标准品溶液的制备 精密称取105℃干
燥至恒重的芦丁标准品10mg于10mL容量瓶中，加适
量70%乙醇，超声波振荡使溶解，再加70%乙醇定容
到10mL，充分摇匀，即得1.00mg/mL的芦丁标准溶液。
1.2.3.2 最大吸收波长的确定 取1.2.3.1项下芦丁
标准溶液于1cm比色皿中，以70%乙醇作为空白对
照，在200~400nm间进行全波长扫描。
1.2.3.3 标准曲线的制备 精密量取1.2.3.1项下的
标准溶液60、100、150、180、200μL于1~6号10mL容量
瓶中，用70%乙醇定容到10mL，得到0.006、0.01、0.015、
0.018、0.02mg/mL的芦丁对照品溶液，采用紫外分光
光度法在265.5nm处测定吸光度A，以吸光度A为纵
坐标，浓度C（mg/mL）为横坐标，以最小二乘法做线
性回归，即可得芦丁的标准曲线[11]。
1.2.4 白簕叶总黄酮含量测定 用移液管准确吸取
一定体积的总黄酮提取液于容量瓶中，按一定的稀
释倍数进行稀释，在λ=265.5nm处，测定吸光度A，根
据公式（1）求出总黄酮含量[11]。
Y= C×M×V
W
式（1）
式中，Y—提取液总黄酮含量，mg/g；C—根据标
准曲线得出的供试品溶液质量浓度，mg/mL；V—定
容体，mL；M—稀释倍数；W—所用药材质量，g。
1.2.5 白簕叶总黄酮的纯化
1.2.5.1 HPD-600大孔树脂柱的预处理 用95%乙
醇浸泡HPD-600大孔树脂24h以上，进行活化；取经
预处理的HPD-600大孔树脂约20g湿法装柱，上柱前
用去离子水洗去大部分乙醇后，采用去离子水湿法
装柱，装好后去离子水冲洗至无醇味，且树脂床沉降
均匀，无气泡。
1.2.5.2 上样吸附与洗脱 用去离子水配制1.5mg/mL
的上样液，上样速度为1mL/min，收集泄露黄酮，上样
吸附10h；接着，用4倍柱体积的去离子水洗脱至洗脱
液无色；再用4倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集该洗
脱液并测定吸光度，计算洗脱液中总黄酮浓度[12]。
1.2.5.3 白簕叶总黄酮纯化效果考察 取白簕总黄
酮提取液、总黄酮纯化洗脱液各100mL，用70%乙醇
稀释100倍，按照1.2.4方法测定总黄酮含量；将溶液
旋转蒸发仪浓缩，真空干燥，得粗制黄酮粉、纯化黄
酮粉，分别测定烘干后固体粉末的质量，求出黄酮
纯度。
黄酮纯度（%）=（供试品溶液中总黄酮浓度
（mg/mL）×供试品溶液体积（mL））/供试品浓缩烘干
后固体粉末质量（mg）×100 式（2）
1.2.7 对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响 取体重
为180~200g的SD雄性大鼠50只，随机分为5组，每组
10只，分别为阴性对照组、阳性对照组（地塞米松
5mg/（kg·d））、白簕叶黄酮低、中、高剂量组（10、20、
40mg/（kg·d）），每天灌胃给药1次，阴性对照组给予
同体积生理盐水，连续7d，每天观察大鼠的体重、进
食、饮水及活动状态。
实验方法参照文献[13]，实验前，用记号笔在每
只大鼠左后足趾同一部位做清晰标记，并测定大鼠
该标记处的正常足容积。各组末次给药后1h，自左足
趾标记处皮下注射1%角叉菜胶0.1mL。致敏后分别
于1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、12.0h测定大鼠足容
积。按公式（3），计算致炎前后足容积之差即得肿胀
度，比较给药组和对照组的差异情况。按公式（4），计
算抑制率。
肿胀度=致炎后各时间点足容积（mL）/致炎前足
容积（mL） 式（3）
抑制率（%）=（阴性对照组肿胀度（mL）-给药组
肿胀度（mL））/阴性对照组胀度（mL）×100 式（4）
1.2.8 数据处理 各组实验结果以x±s表示，采用
水平
因素
A 乙醇浓度
（%）
B 固液比
（g/mL）
C 超声时间
（min）
D 提取次数
（次）
1 50 1∶20 10 1
2 70 1∶30 20 2
3 80 1∶40 30 3
表1 正交实验因素与水平
Table 1 Factors and levels of orthogonal test
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试样 溶液体积（mL） 总黄酮浓度（mg/mL） 总黄酮质量（mg） 粉末质量（mg） 黄酮质量分数（%）
粗提液 50 1.95 97.5 740 13.18
纯化液 50 1.95 95 390 24.36
表4 HPD-600大孔树脂对白簕总黄酮的纯化富集效果
Table 4 The purification effect of HPD-600 macroporous resin on total flavoniods from Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr
表5 白簕黄酮对角叉菜胶致大鼠足趾炎症的影响（x±s，n=10）
Table 5 Effect of total flavoniods from Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr on carrageenan-induced foot edema in rats（x±s，n=10）
组别
V（致炎前足
体积）（mL）
致炎后不同时间的足趾肿胀度（mL）
1h 2h 2.5h 3h 4h 5h 6h 12h
阴性对照组 1.37±0.25 1.03±0.22 0.87±0.15 0.77±0.25 0.71±0.31 0.66±0.28 0.62±0.27 0.63±0.23 0.53±0.23
低剂量 1.32±0.06 0.31±0.12** 0.44±0.16** 0.43±0.07* 0.46±0.09* 0.42±0.08* 0.35±0.10* 0.30±0.12** 0.16±0.07**
中剂量 1.29±0.17 0.18±0.05** 0.34±0.12** 0.34±0.14** 0.33±0.11* 0.26±0.13* 0.23±0.14* 0.22±0.13** 0.073±0.16**
高剂量 1.34±0.14 0.16±0.09** 0.29±0.08** 0.25±0.15** 0.25±0.17* 0.21±0.11* 0.13±0.04** 0.10±0.04** 0.015±0.01**
地塞米松 1.26±0.07 0.08±0.01** 0.08±0.08** 0.14±0.06** 0.07±0.05** 0.04±0.02** 0.05±0.03** 0.04±0.01** 0.007±0.01**
注：与阴性对照组相比*p<0.05，**p<0.01。
SPSS 17.0软件进行t检验，比较组间差异，p＜0.05为
显著性差异，p＜0.01为极显著性差异。
2 结果与分析
2.1 标准曲线绘制
根据1.2.3.2项下方法，全波长扫描结果显示，芦
丁标准溶液在λ=265.5nm处有最大吸收峰，因此白簕
黄酮含量测定波长定为265.5nm。所得标准曲线为A=
37.242C+0.0219，r=0.9997，式中，A—供试品溶液总
黄酮吸光度；C—供试品溶液总黄酮浓度，mg/mL；
r—相关系数。r=0.9997，表明芦丁标准曲线在0.006~
0.020mg/mL浓度范围内线性良好。以芦丁为对照品，
测定白簕叶总黄酮含量。
2.2 白簕叶总黄酮提取正交实验
按照1.2.2项下L9（34）表条件提取白簕叶总黄酮，
以总黄酮含量为指标。根据实验结果进行分析，实验
结果如表2、表3所示。
由表3、表4结果可见，四个考察因素中，固液比
对提取液的总黄酮含量有影响，固液比越大，黄酮含
量越高。影响黄酮含量的主次顺序依次为：固液比＞
提取次数＞乙醇浓度＞超声时间，由于超声时间对总
黄酮含量影响很小，因此根据经济有效的原则，超声
时间选为10min。由此得到各因素的最佳搭配为
B3A2D2C1，即最佳工艺为固液比1∶40，乙醇浓度70%，
间歇超声2次，每次10min。
按照正交结果最优方案，称取5份白簕叶粉末各
10.0g进行提取，计算总黄酮含量，该方法提取总黄酮
含量均值为37.01mg/g，且实验结果稳定，RSD=1.70%，
表明该优化工艺条件稳定。
2.3 白簕叶总黄酮纯化效果
白簕叶总黄酮提取液经大孔树脂纯化后，测定
其总黄酮含量及黄酮质量分数，得结果见表4。
由表4可知，粗提液烘干得到干粉中黄酮质量分
数为13.18%，纯化后质量分数提高为24.36%，表明
HPD-600大孔树脂对于白簕叶总黄酮有较好的纯化
富集效果。
2.4 对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响
2.4.1 一般状况及体重 通过7d的持续观察，实验
发现各组大鼠的体重均正常增加，且活动敏捷，毛色
有光泽。说明给药未对大鼠一般状况产生影响。
2.4.2 肿胀度的测定结果 取体重为180~220g的SD
大鼠灌胃给药7d，于最后一次给药后1h，进行角叉菜
胶致大鼠足趾肿胀实验，结果见表5。
由表5结果可见，白簕黄酮各剂量组均能显著抑
制角叉菜胶所致大鼠的足肿胀度（p＜0.05）；与阴性
对照组相比，白簕黄酮提取物低、中、高剂量组对角
叉菜引起的炎症肿胀均有明显的抑制作用；提取物
实验号 A B C D 总黄酮含量（mg/g）
1 1 1 1 1 19.07
2 1 2 2 2 33.09
3 1 3 3 3 31.59
4 2 1 2 3 28.79
5 2 2 3 1 30.48
6 2 3 1 2 37.49
7 3 1 3 2 26.05
8 3 2 1 3 28.36
9 3 3 2 1 30.83
k1 27.92 24.64 28.31 26.79
k2 32.25 30.64 30.90 32.21
k3 28.41 33.30 29.37 29.58
R 4.34 8.67 2.60 5.42
表2 L9（34）正交实验结果
Table 2 Results of the orthogonal experiments L9（34）
因素 偏差平方和 自由度 F值 p值
A 33.799 2 3.307 0.232
B 118.267 2 11.571 0.079
C 10.211 2 1.000 0.500
D 44.023 2 4.307 0.188
误差 10.22 2
表3 方差分析表
Table 3 Analyze of deviation square
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各浓度间比较可得，该抑制作用具量效关系，剂量越
大，抑制作用越强。
在大鼠炎症模型中，角叉菜胶致炎后1h，阴性对
照组大鼠右后足趾开始出现急性炎症样红、肿等变
化，1h作用最为明显，肿胀度达（1.03±0.22）mL，后
逐渐消肿，持续达12h以上，足体积在12h由正常值
（1.37±0.25）mL增至（1.89±0.07）mL。白簕黄酮各剂量
组于致炎1h后即发挥极显著抗炎功效（p＜0.01）。以
白簕黄酮在致炎作用6h时为例，各组剂量均能显著
抑制大鼠足趾肿胀，白簕黄酮低、中、高剂量组的抑
制率分别为52%、65%、82%。
3 讨论
现代药理学研究显示，植物提取物具有广泛的
药理作用，常具有免疫调节、抑菌消炎、抗癌防癌等
诸多生理活性。据报道白簕具有清热解毒、祛风除
湿、散瘀止痛的效果[14-15]，因此本实验针对白簕的主
要成分之一白簕叶黄酮，展开了抗炎作用的研究。
本实验中，以角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型作
为评价天然产物抗炎作用的炎症模型。研究发现，角
叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀可能与前列腺素（PGE2）
有关[16]。PGE2是抗炎药物在临床上作用靶点中最有
效且最敏感的物质。本研究中，白簕黄酮提取物能显
著抑制角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀，提示抑制肿
胀可能与抑制炎症介质PGE2的释放有关。
目前临床上常用的抗炎药分为甾体和非甾体两
类，疗效虽好，但均具有较多不良反应，其中最常见
的为胃肠道反应和肝肾毒性等[17]。因此寻找更好的
抗炎药势在必行。近年来大量的研究表明，中草药提
取物黄酮类化合物多具有抗炎作用，中草药具有毒
副作用较小的特点，白簕是一种资源丰富、价格低廉
的草药，且本实验结果显示，其黄酮类化合物可降低
角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的程度，因此对白簕黄酮
类化合物的抗炎药理研究具有一定意义，有较好的
开发前景。
4 结论
采用正交设计法优化超声辅助提取法提取白簕
叶黄酮，并考察了大孔树脂的纯化效果。结果显示，
提取最优工艺为固液比1∶40，乙醇浓度70%，间歇超
声2次，每次10min。该方法所得提取液中总黄酮含量
为37.01mg/g，纯化后黄酮纯度达到24.36%。
通过研究了白簕叶黄酮对角叉菜胶致大鼠足趾
肿胀模型的抑制能力得出，连续给药7d后，白簕叶黄
酮提取物10、20、40mg/（kg·d）均能有效抑制角叉菜
胶致大鼠足趾肿胀程度。该结果表明白簕叶黄酮具
有抗炎效果，本实验有助于进一步开发白簕的药理
功效。
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