全 文 :何可群,李相兴. 民族药地桃花根皮及叶总三萜含量测定[J]. 江苏农业科学,2014,42(01):258 - 259.
民族药地桃花根皮及叶总三萜含量测定
何可群1,李相兴2
(1.贵州民族大学化学与环境科学学院,贵州贵阳 550025;2.贵州民族大学民族学与社会学学院,贵州贵阳 550025)
摘要:以齐墩果酸为对照品,用超声辅助提取法、紫外分光光度法测定了地桃花根皮及叶的总三萜含量,结果表
明:地桃花根皮、叶中总三萜的相对百分含量分别为 3. 682%、9. 297%,精密度试验 RSD 分别为 1. 79%、2. 08%;齐墩
果酸对照品在 0 ~ 100 μg /mL范围有良好的线性关系,回归方程为 y = 0. 011 3x - 0. 017 7,相关系数 r2 = 0. 999 1。该
方法操作简便、结果可靠,能为地桃花药用价值的开发及扩大资源利用提供科学的依据。
关键词:地桃花;总三萜;含量;测定
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1002 - 1302(2014)03 - 0258 - 02
收稿日期:2013 - 07 - 05
基金项目:国家社会科学基金(编号:12XMZ033)。
作者简介:何可群(1971—),女,云南云龙人,硕士,副教授,主要从事
药用植物学、分析化学研究。E - mail:hekequn2004@ 163. com。
地桃花(Urena lobata L.)是锦葵科梵天花属多年生亚灌
木状草本植物,别称肖梵天花、野桃花、野棉花、土黄芪、大迷
马桩棵等[1 - 4],分布于我国长江以南各省区[4]。地桃花根或
全株均可入药,具有清热解毒、祛风利湿、益气补虚、活血消肿
的功效,主治感冒、风湿痹痛、肾炎水肿、带下、淋病、疟疾、痢
疾、乳腺炎、外伤出血等,是我国西南地区少数民族习用草
药[1 - 5]。目前的研究表明:地桃花的化学成分主要为氨基酸
和蛋白质、糖类、黄酮类、甾醇、鞣质、酚类、有机酸、皂苷
等[4 - 7]。陈勇等的研究表明地桃花水提液在体外对金黄色葡
萄球菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和普通变形
杆菌均有一定的抑菌活性[8]。国内外还未见有关地桃花总
三萜测定的研究报道,本试验对地桃花根皮及叶的总三萜含
量进行研究,以便为该民族药的进一步开发和扩大资源利用
提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
1. 1. 1 材料 地桃花样品,采自云南省云龙县,标本保存于
贵州民族大学化学与环境科学学院药学教研室。
1. 1. 2 仪器 756PC紫外 -可见分光光度计(上海舜宇恒平
科学仪器有限公司),METTLERAE240 电子分析天平(上海天
平仪器厂),BGZ - 30 电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公
司医疗设备厂),SG3200HE 超声清洗仪(上海冠特超声仪器
有限公司),数显恒温水浴锅(常州博远试验分析仪器有限
公司)。
1. 1. 3 试剂 无水乙醇、冰醋酸、高氯酸、香草醛均为分析
纯,齐墩果酸对照品购自贵州迪大科技有限责任公司(纯
度≥98%,批号:84650 - 60 - 2)。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 地桃花总三萜的提取方法 将晒干的地桃花根皮及
叶在电热鼓风干燥箱中于(60 ± 1)℃烘干 5 h,分别精确称取
干燥、粉碎(过 40 目筛)的地桃花根皮、叶粉末各 2. 000 g,按
1 g ∶ 20 mL 的固液比用无水乙醇浸泡、超声提取 2 次。提取
条件:时间 60 min,超声频率 40 kHz,功率 150 W。提取结束
后,合并提取液,过滤,冷却,用无水乙醇定容至 100 mL,摇匀
备用[9 - 11]。
1. 2. 2 标准溶液的制备及测定波长的选择[12 - 13] (1)标准
溶液的制备。精确称取 65 ℃ 干燥至恒重的齐墩果酸
20. 00 mg,置 100 mL容量瓶中,加无水乙醇适量使其溶解以
无水乙醇定容、摇匀,每 1 mL 溶液含齐墩果酸 200 μg。(2)
测定波长的选择。分别精确吸取齐墩果酸标准溶液
(200 μg /mL)、地桃花根皮、叶提取液各 1. 00 mL,分别置于 3
支 10 mL比色管中,于 85 ℃挥发干溶剂,冷却,分别精确加入
5%香草醛 -冰醋酸 0. 500 mL,再分别加入高氯酸 1. 00 mL,
摇匀,于 70 ℃水浴中反应 20 min,取出,在冰水浴中冷却,用
冰醋酸稀释至刻度,摇匀,静置 5 min。以试剂空白建立基线,
在 400 ~ 700 nm波长范围进行波长扫描,得到齐墩果酸和地
桃花根皮、叶提取液显色后的吸收光谱,以确定最大吸收
波长。
1. 2. 3 齐墩果酸标准曲线的绘制 精确吸取质量浓度
200 μg /mL 的齐墩果酸标准溶液 0、1. 00、2. 00、3. 00、4. 00、
5. 00 mL 分别置于 6 支 10 mL 比色管中,测定波长的选择操
作同“1. 2. 2”节,以试剂空白为参比,于 540 nm 波长下测定
吸光度 D540 nm,以吸光度为纵坐标、显色液中齐墩果酸的质量
浓度 C(μg /mL)为横坐标,绘制标准曲线[12 - 13]。
1. 2. 4 样品测定 精确量取“1. 2. 1”节操作后所得地桃花
根皮、叶乙醇提取液各 1. 00 mL,分别置于 10 mL 比色管中,
测定波长的选择操作同“1. 2. 2”节,于 540 nm 波长下测得地
桃花根皮、叶提取液的吸光度 D540 nm,代入回归方程得地桃花
根皮、叶的总三萜类化合物以齐墩果酸计算的质量浓度 C
(μg /mL),换算为干燥药材中总三萜酸的含量[12 - 13]。
1. 2. 5 重复性试验 精确称取地桃花根皮、叶样品各 5 份,
按含量测定方法进行测定,计算平均含量及 RSD值。
1. 2. 6 加标回收试验 精确量取地桃花根皮乙醇提取液
1. 00 mL 5 份,再分别精确加入齐墩果酸标准溶液(浓度为
200 μg /mL)1. 00mL,按样品含量测定方法进行测定,计算加
标回收率及 RSD值。
—852— 江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 3 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2014.03.117
2 结果与分析
2. 1 测定波长的选择
由“1. 2. 2”节的试验结果可知齐墩果酸、地桃花根皮、叶
提取液显色后在 540 nm 处均有最大吸收,故以 540 nm 作为
总三萜的测定波长。
2. 2 标准曲线
于 540 nm波长下测定齐墩果酸标准溶液系列的吸光度
D540 nm,以吸光度为纵坐标、显色液中齐墩果酸的质量浓度 C
(μg /mL)为横坐标,绘制标准曲线(图 1),经回归处理得方
程:y = 0. 011 3x - 0. 017 7,相关系数:r2 = 0. 999 1,齐墩果酸
浓度在 0 ~ 100 g /mL 范围内吸光度与质量浓度线性关系
良好。
2. 3 样品总三萜含量的测定
由表 1 可知,地桃花根皮、叶样品中总三萜的平均含量分
别为 3. 682%、9. 297%,重复性试验 RSD 分别为 1. 79%和
2. 08%,精密度高。
2. 4 加标回收率
由表 2 可知,加标回收率在 96. 29% ~ 98. 39%,RSD 为
0. 880%,说明本试验所采用的方法适用于地桃花样品中总三
萜含量的测定。
表 1 地桃花根皮、叶总三萜测定及精密度试验结果
测定序号
根皮总三萜含量
(%)
叶总三萜含量
(%)
1 3. 596 9. 027
2 3. 632 9. 175
3 3. 706 9. 356
4 3. 725 9. 432
5 3. 753 9. 496
平均值 3. 682 9. 297
RSD 1. 79 2. 08
表 2 地桃花根皮乙醇提取液加标回收试验结果
序号
样品提取液体积
(mL)
样品三萜含量
(μg)
加标量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
1 1. 00 736. 4 200 901. 7 96. 29
2 1. 00 736. 4 200 908. 3 97. 00
3 1. 00 736. 4 200 915. 8 97. 80
4 1. 00 736. 4 200 918. 5 98. 09
5 1. 00 736. 4 200 921. 3 98. 39
平均 97. 51 0. 80
3 结论
地桃花是我国西南地区白族、纳西族、侗族等多个少数民
族民间草药,目前其资源还未得到有效的开发利用。本试验
首次对地桃花根皮、叶的总三萜含量进行研究,结果表明地桃
花干燥根皮、叶总三萜含量分别为 3. 682%、9. 297%,为该民
族药的药用价值开发及扩大资源利用提供了一定的科学
依据。
参考文献:
[1]云南省卫生厅. 云南中草药[M]. 昆明:云南人民出版社,1971:
700 - 701.
[2]大理白族自治州人民政府. 大理中药资源志[M]. 昆明:云南民
族出版社,1991:222.
[3]刘 毅,陈羲之. 云南常用中草药单验方荟萃[M]. 昆明:云南
科技出版社,2010:87.
[4]左经会. 六盘水药用植物[M]. 北京:科学出版社,2013:
138 - 139.
[5]云南药物研究所. 云南天然药物图鉴[M]. 昆明:云南科技出版
社,2004:162.
[6]贾 陆,毕跃峰,敬林林,等. 地桃花化学成分研究[J]. 中国药
学杂志,2010,45(14):1054 - 1056.
[7]谢 臻,陈 勇,唐春丽,等. 地桃花化学成分研究进展[J]. 广
西中医学院学报,2011,14(1):70 - 71.
[8]陈 勇,谢 臻,韦 韬,等. 地桃花水提物的体外抗菌试验研究
[J]. 亚太传统医药,2011,7(10):29 - 30.
[9]刘玉明,柴逸峰,娄子洋,等. 分光光度法测定蓝桉果实总三萜酸
[J]. 中国医院药学杂志,2005,25(1):4 - 6.
[10]袁 媛,杨 毅,开桂青,等. 灵芝三萜提取工艺研究[J]. 安徽
化工,2007,33(4):27 - 29.
[11]张雁冰,王克让,刘宏民. 马桑叶中总三萜酸的含量测定[J].
时珍国医国药,2006,17(4):529 - 530.
[12]蔡亚玲,阮金兰,苏 群,等. 紫背鼠尾草中总三萜酸的含量测
定[J]. 中药材,2008,31(5):692 - 693.
[13]易中宏,郑一敏,胥秀英,等. 分光光度法测定茯苓中总三萜类
成分的含量[J]. 时珍国医国药,2005,16(9):847 - 848.
—952—江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 3 期