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表 2　不同产地虎耳草药材含量测定结果(n=3)
药材产地 没食子酸含量/% 原儿茶酸含量/ % 虎耳草素含量/ %
安徽凤娇 0.025 0.011 0.404
安徽亳州华荣堂 0.033 0.021 0.207
湖北三义公司 0.055 0.059 0.347
湖北何平 0.049 0.032 0.495
江苏南通 0.038 0.013 0.394
3　讨论
3.1　检测波长的选择　查阅文献得知 ,没食子酸 、原
儿茶酸 、虎耳草素均在 270 nm 附近有最大吸收 ,故
选择 270 nm 为 3个成分的检测波长 。
3.2　流动相的选择　按照文献所述 ,用甲醇-1 g ·L-1
磷酸(65∶35)在 270 nm 进行检测 ,虎耳草素和其他
杂质峰未得到较好的分离 ,后改用梯度洗脱 ,最终选
用甲醇-1 g ·L-1磷酸(15∶85)为流动相进行梯度洗
脱 ,达到较好的分离效果 ,而后加大甲醇的比例 ,将药
材中极性较小的物质全部洗脱出来 ,避免再次进样的
干扰 ,兼顾了分离度和较好的出峰时间 。
3.3　供试品提取条件的考察　取供试品适量 ,分别
用水 ,乙醇 ,体积分数 30%, 50%和 70%乙醇 ,采用冷
浸 、温浸和热回流提取 ,结果表明 ,热回流提取效率最
高 ,水提取杂质较多 、虎耳草素含量较低 ,乙醇提取色
素较多 ,故选用体积分数 70%乙醇热回流提取 。
3.4　含量比较　采自湖北何平的虎耳草样品中没食
子酸 、原儿茶酸和虎耳草素含量均较高 ,同时湖北产
地的药材没食子酸和原儿茶酸含量均高于安徽产地 ,
虎耳草素含量也相对较高 。
参考文献:
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(收稿日期:2010-11-23)
糙叶五加不同部位 6 , 7-二甲氧基
香豆素的RP-HPLC法测定
戴秀珍1 ,刘向前1 , 2＊ ,冯　胜1 ,邹亲朋1(1.中南大学化
学化工学院 , 湖南 长沙 410083;2.湖南中医药大学药学院 ,
湖南 长沙 410208)
摘要:目的　建立糙叶五加不同部位中的 6 , 7-二甲氧基香豆
素的含量测定方法。方法　采用 RP-HPLC 法。色谱柱:
ODS C18柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-磷酸水溶
液(pH=3.0)-乙腈-四氢呋喃(15∶77∶6∶2);检测波长:340
nm;柱温:25 ℃;流速:0.8 m L· min -1 , 进样量:10 μL。结果
糙叶五加根、茎、叶中6 ,7-二甲氧基香豆素的含量分别为 0.039 ,
0.002 和 0.466 mg · g -1 。结论　该方法准确 , 重复性好 , 可
作为糙叶五加中 6 , 7-二甲氧基香豆素的定量分析方法。
关键词:6 , 7-二甲氧基香豆素;糙叶五加;HPLC
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.02.007
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)02-0090-03
作者简介:戴秀珍 , 女 ,在读硕士研究生
＊通信作者:刘向前 ,男 , 教授 ,硕士生导师
　　糙叶五加(Acanthopanax henry .(Oliv.)Harms),
又名亨利五加 ,是五加科五加属植物 ,是中国特有植
物[ 1] ;味辛 ,性温;具有祛风利湿 、活血舒筋 、理气止痛
功效;主治风湿痹痛 ,拘挛麻木 ,筋骨痞软 ,水肿 ,跌打
损伤 ,疝气腹痛[ 2] 。迄今未见对糙叶五加不同药用部
位 6 ,7-二甲氧基香豆素进行系统分析的报道。我们
首次采用 RP-HPLC 法对糙叶五加不同药用部位中
6 ,7-二甲氧基香豆素含量进行测定 ,以期为其开发利
用提供参考 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　LC-10AT 型高效液相色谱仪(日本岛津
公司);SPD-10A 紫外检测器(日本岛津公司);CBM-
102自动进样器(日本岛津公司 );LC-10A T 双泵;
AUW120D高精度电子天平(日本 Shimadzu 公司);
AS3120A 超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限
公司)。
1.2　试药　6 , 7-二甲氧基香豆素(上海友思研究所 ,
20061225);甲醇 、乙腈(色谱纯);磷酸 、四氢呋喃(分析
纯 ,天津市科密欧化学试剂有限公司);水为双蒸水。
1.3　样品来源　糙叶五加于 2009年 11月采集于湖
南 ,自然阴干;经韩国庆熙大学陆昌洙教授鉴定为糙
叶五加 Acanthopana x henry i (Oliv.)Harms 的根 、
茎 、叶 ,标本存于中南大学制药工程系标本室(标本
号:ZN20091106)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件[ 3-4] 　色谱柱:ODS C18柱(250 mm×4.6
mm ,5 μm);流动相:甲醇-磷酸水溶液(pH =3.0)-
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乙腈-四氢呋喃(15∶77∶6∶2);检测波长:340 nm;
柱温:25 ℃;流速:0.8 mL·min-1 。
2.2　6 , 7-二甲氧基香豆素对照品溶液的制备 　取
6 ,7-二甲氧基香豆素对照品 1.8 mg ,精密称定 ,甲醇
溶解定容至 50 mL;超声 10 min ,过 0.45 μm 滤膜 ,
即得 0.036 mg ·mL-1的 6 ,7-二甲氧基香豆素对照
品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　取糙叶五加不同药用部
位粉末(40 ℃干燥 3 h ,粉碎过 50目筛)各 1 g ,置于
锥形瓶中 ,加入 5 mL 蒸馏水浸润 ,放置过夜;加入三
氯甲烷 100 mL ,超声提取 30 min , 震荡 30 min ,滤
过 ,滤液挥干;残渣用甲醇溶解 ,过 0.45 μm 微孔滤
膜 ,用甲醇定容于 10 mL 量瓶中 ,即得。
2.4　线性关系考察　分别精密吸取糙叶五加叶对照
品溶液 2 ,4 , 6 ,8和 10 μL ,加甲醇溶解至刻度 ,摇匀;
分别精密吸取上述溶液各 10 μL ,注入液相色谱仪
中 ,记录色谱图 。在上述色谱条件下测定 6 , 7-二甲
氧基香豆素的峰面积 ,以峰面积 Y 为纵坐标 ,对照品
质量浓度 X(μg ·mL-1)为横坐标进行线性回归 ,得
回归方程:
Y =2 858 040X -5 397.25 , r =0.999 8。
结果表明 , 6 ,7-二甲氧基香豆素在 0.072 ～ 0.36
μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系 。
2.5　精密度实验　精密吸取对照品溶液10μL ,在2.1
项色谱条件下 ,重复进样 5次 ,测定峰面积 ,测得相对标
准偏差 RSD为 0.30%,表明本法精密度良好。
2.6　稳定性实验　精密吸取同一供试品溶液 10 μL ,
分别在0 ,3 ,6 ,9 ,12和 24 h测定峰面积 ,测得6 ,7-二甲
氧基香豆素峰面积值的 RSD为 0.77%。说明样品
在 24 h内稳定。
2.7　重复性实验　取同一批糙叶五加叶 5份 ,分别
按样品测定方法操作 ,测定峰面积 ,测得 6 ,7-二甲氧
基香豆素的 RSD为 3.38%,表明本法重复性良好 。
2.8　加样回收率实验　采用加样回收率法 ,取已知
含量的糙叶五加叶粗粉 9 份 ,每份 1.0 g ,精密称定 ,
平均分为 3份 ,分别加入对照品溶液 3 ,6和 9 mL ,按
照 2.3项下供试品溶液制备方法制备 ,在上述色谱条
件下测定峰面积 ,计算回收率 ,得出该方法的 6 ,7-二甲
氧基香豆素平均回收率为 98.17%, RSD为 0.97%。
2.9　样品测定　将糙叶五加样品按不同药用部位分
别制备供试品溶液 ,精密吸取对照品和供试品溶液各
10μL ,注入液相色谱仪 ,记录色谱图 ,见图 1 ,测定 ,计
算 ,结果糙叶五加根 、茎 、叶中 6 ,7-二甲氧基香豆素的
含量分别为 0.039 ,0.002和 0.466 mg ·g-1(n =3)。
3　讨论
①波长的选择　HPLC-UV 法测定 6 , 7-二甲氧
基香豆素的含量 , 考察了 6 , 7-二甲氧基香豆素在
380 ,340和 300 nm 波长处的色谱行为 ,对比不同检
测波长下色谱峰的吸收强度 、分离度及干扰情况 ,发
现 6 ,7-二甲氧基香豆素在 340 nm 检测波长下峰形
较好 ,且干扰少 ,故选择 340 nm 作为 6 , 7-二甲氧基
香豆素的检测波长。
图 1　HPLC图
A.6 , 7-二甲氧基香豆素对照品;B.糙叶五加根;
C.糙叶五加茎;D-糙叶五加叶
　　②流动相的选择　流动相有机相采用乙腈 ,在流
动相中添加磷酸能明显改变峰形。笔者考察了甲醇-
磷酸水溶液(pH3.0)-乙腈-四氢呋喃(13∶78∶8∶
1)、甲醇-磷酸水溶液(pH3.0)-乙腈-四氢呋喃(15∶
77∶6∶2)、甲醇-磷酸水溶液(pH3.0)-乙腈-四氢呋
喃(10∶80∶4∶6)、甲醇-磷酸水溶液(pH3.0)-乙腈-
四氢呋喃(20∶70∶6∶4)不同配比的流动相对 6 , 7-
二甲氧基香豆素色谱行为的影响 ,结果表明甲醇-磷酸
水溶液(pH3.0)-乙腈-四氢呋喃(15∶77∶6∶2)作流
动相时 ,能改善 6 ,7-二甲氧基香豆素的保留时间 ,分离
效果好且得到较满意的色谱行为。
③研究结果表明 ,糙叶五加根 、茎 、叶中 6 , 7-二
甲氧基香豆素的含量分别为 0.039 , 0.002和 0.466
mg · g-1 ,叶中含量比较高 。6 ,7-二甲氧基香豆素具
有良好的保肝 、利胆 、控制血管扩张 、消炎 、抗电离辐
射 、镇痛及安神等作用[ 5-6] ,因此 ,根 、茎 、叶合用可能
有较好的开发应用前景。
参考文献:
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(收稿日期:2010-10-18)
荧光光度法测定维药刺山柑种子中
总黄酮含量的研究
张　冉 ,美丽万 ·阿不都热依木＊(新疆医科大学药学
院 ,新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的　根据黄酮类化合物与 Al3+形成稳定的荧光络合
物 ,建立一种测定刺山柑种子中总黄酮的新方法。方法　采
用荧光光度法 ,在激发波长 418 nm ,发射波长 530 nm 的条件
下测定刺山柑种子中总黄酮含量 , 并进行方法学验证。结果
对照品芦丁的标准曲线为Y =0.738X-4.313 , r 2 =0.999 1;
平均回收率为 100.6%, RSD 为 2.0%。结论　该方法简便 ,
快捷 ,精密度高 , 准确性好 , 可作为维药刺山柑种子中总黄酮
的含量测定方法。
关键词:荧光光度法;刺山柑种子;总黄酮
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.02.008
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)02-0092-03
作者简介:张冉 ,女 ,在读硕士研究生
＊通信作者:美丽万·阿不都热依木 , 女 ,教授 , 硕士生导师
　　刺山柑种子为白花菜科(Capparidaceae)山柑属
植物刺山柑(Capparis spinosa L.)的种子[ 1-2] ,维语
名为开派 、菠里科果;喜生于荒漠戈壁 、低山坡石质沙
土处 ,在我国主要分布于新疆 、甘肃 、西藏等省区。黄
酮类化合物是刺山柑种子中的主要有效成分之一[ 3] ,
具有多种生物活性 ,并具有抗氧化 、清除体内过剩自
由基 、提高免疫力等功效 。
近年来 ,有关刺山柑总黄酮含量的测定通常采用
紫外分光光度(UV)法 。UV法的实验原理是根据黄
酮类物质与 Al3+形成稳定的络合物 ,并产生特征吸
收光谱而进行测定[ 4] 。由于刺山柑种子中成分复杂 ,
富含多种糖苷类 、酚类 、萜类物质 ,对吸光值产生干
扰 ,影响实验结果的准确性[ 5] 。为了寻求操作简便 、
成本低 、结果准确的检测方法 ,我们根据黄酮类化合
物与 Al3+形成稳定的荧光络合物 ,采用荧光光度法
测定总黄酮含量 。结果表明 ,该方法简便 ,快捷 ,精密
度高 ,准确性好 ,可作为维药刺山柑种子中总黄酮的
含量测定方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器　荧光分光光度计(RF-5301PC ,日本岛津
公司);超声仪(SK8210HP ,上海科导超声仪器有限
公司);电热恒温水浴锅(DK-S22 ,上海精宏实验设备
有限公司);分析天平(B-N 梅特勒 ,上海托利多仪器
有限公司)。
1.2　试药　刺山柑种子采于新疆 10个不同产区 ,粉
碎过 40目筛 ,备用;芦丁对照品(中国药品生物制品
检定所 ,批号 100080-200707 ,质量分数 92.5%);其
他试剂均为分析纯。
2　方法
2.1　样品溶液的制备　取刺山柑种子粉末约 0.5 g ,
精密称定 ,置索氏提取器中 ,加 20 mL 石油醚 ,加热
回流 30 min ,弃去石油醚提取液 ,于温水浴中挥干残
留石油醚;加 50 mL 甲醇回流提取 1 h ,滤过 ,滤液置
于 100 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀;精密量
取样品溶液 2 mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,加 100 g ·L-1
A l(NO3)3 溶液 1 mL ,pH4.5 的醋酸-醋酸钠缓冲溶
液 1 mL ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,放置 20 min。
2.2　芦丁对照品溶液的制备　取芦丁 10 mg , 精密
称定 ,置于 100 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀;精
密量取 0.4 , 0.8 , 1.2 , 1.6 和 2.0 mL 分别置于 10
mL 量瓶中 ,加 100 g ·L-1的 Al(NO 3)3 溶液 1 mL ,
pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液 1 mL , 加甲醇至刻度 ,
摇匀 ,放置 20 min 。照《中国药典》(2010年版)二部
荧光测定法(附录ⅣE)测定荧光强度。
2.3　测定　在激发光谱通带 3 nm 、发射光谱通带 5
nm 、激发波长 418 nm 、发射波长 530 nm 的条件下 ,
测定芦丁对照品溶液的荧光强度 ,以芦丁的质量浓度
为横坐标 ,荧光强度为纵坐标作图 ,绘制工作曲线 ,在
相同的条件下测定样品中总黄酮的荧光强度 ,再用回
归方程计算含量 。
3　结果
3.1　荧光化合物的激发及发射光谱　先用紫外分光
光度仪对芦丁对照品溶液在 200 ～ 800 nm 处扫描 ,得
最大波长。将最大波长做波长扫描最大发射波长 ,反
复扫描得荧光激发波长 418 nm ,发射波长 530 nm 。
3.2　提取方法的考察
3.2.1　提取方法的考察　取刺山柑种子粉末约 0.5
g ,9份 ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,加 20 mL 石油醚 ,
加热回流 30 min ,弃去石油醚提取液 ,于温水浴中挥干
残留石油醚。然后加 50 mL 甲醇;3份加热回流提取
(65 ℃,1 h);3份超声提取(功率 600 W ,频率 60 kHz ,
1 h);3 份冷浸(12 h);滤过 ,滤液置于 100 mL 量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀;精密量取样品溶液 2
92 西北药学杂志　2011 年 4 月　第 26 卷　第 2 期