全 文 ：基金项目:国家自然科学基金项目(编号:81173065)
通讯作者:赖永继 Tel:(027)82201722 E-mail:
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laiyongji1024@ 163． com
的超速离心法，操作简便、耗时短、分离效果好、比较
适合脂溶性药物的包封率测定。
本文建立了 VEC-5 含量检测的 HPLC 方法，对
VEC-5 脂质体中主药的含量检测方法进行了系统的
研究，并采用超速离心法分离并通过 HPLC 法测定
了脂质体的包封率。上述方法的建立对于 VEC-5
脂质体制剂的质量评价和控制具有重要意义。
参 考 文 献
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(2015-06-11 收稿 2015-07-13 修回)
针毛蕨治疗慢性非细菌性前列腺炎的活性部位研究
韩盼1 赖永继1 阮金兰2 邓艾平1 王奕1 (1．武汉市中心医院药学部 武汉 430014;2．华中科技大学同济医学院
药学院 武汉 430030)
摘 要 目的:探讨针毛蕨甲醇提取物对慢性非细菌性前列腺炎(CNP)模型大鼠的治疗效果，初步确定其活性部位。方法:
粉碎的针毛蕨根茎用甲醇提取，所得浸膏依次用氯仿和乙酸乙酯萃取后得到氯仿部位、乙酸乙酯部位和水部位;建立角叉菜
胶诱导的 CNP模型，将实验大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对照组、甲醇提取物组、乙酸乙酯组、氯仿组和水部位组，
测定各组的前列腺指数，利用 ELISA试剂盒测定各组大鼠血清中白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-
2(COX-2)和前列腺素 E2(PGE2)的含量，前列腺组织 HE染色后进行病理学观察。结果:与模型组相比较，黄酮含量较高的
乙酸乙酯组和甲醇提取物组大鼠的前列腺指数明显减小(P ＜ 0． 01) ，前列腺组织病理学改善显著，细胞因子 IL-10、TNF-α、
COX-2 和 PGE2 的含量显著降低(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01) ，尤其是乙酸乙酯组。结论:针毛蕨对 CNP具有较好的治疗效果，初步
确定乙酸乙酯部位为其活性部位。
关键词 慢性非细菌性前列腺炎;针毛蕨;甲醇提取物;乙酸乙酯部位;前列腺指数;细胞因子
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)10-1645-04
Study on Active Fractions of Macrothelypteris Oligophlebia for Chronic Non-bacterial Prostatitis in Rats
Han Pan1，Lai Yongji1，Ruan Jinlan2，Deng Aiping1，Wang Yi1(1． Department of Pharmacy，Central Hospital of Wuhan，Wuhan
430014，China;2． School of Pharmacy，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology)
ABSTRACT Objective:To explore the effect of the methanol extract of Macrothelypteris oligophlebia on chronic non-bacterial prosta-
titis (CNP)in rats to confirm the active fractions． Methods:The powdered rhizomes of M． oligophlebia were soaked in methanol． The
methanol extract was suspended in water and then extracted successively with chloroform and ethyl acetate to obtain chloroform fraction，
ethyl acetate fraction and water fraction． Carrageenan-induced CNP in rats was established． The rats were randomly divided into the
sham-operated control group，model group，positive control group，methanol extract group，ethyl acetate fraction group，chloroform
fraction group and water fraction group． The anti-prostatitis effect was evaluated by the prostate index，and the pathological examination
of prostate was performed using HE staining． The levels of interleukin-10 (IL-10) ，tumor necrosis factor alpha (TNF-α) ，cyclooxyge-
nase-2 (COX-2)and prostaglandin E2(PGE2)were analyzed using ELISA kits． Results:The ethyl acetate fraction group and metha-
nol extract group with high flavonoid content could significantly decrease prostate index (P ＜ 0． 01)and the levels of IL-10，TNF-α，
COX-2 and PGE2(P ＜ 0． 05 or P ＜ 0． 01) ，and improve the prostate morphology when compared with the model group，especially with
the ethyl acetate fraction group． Conclusion:The rhizomes of M． oligophlebia show promising therapeutic effect on CNP，and the ethyl
acetate fraction is the active fraction．
KEY WORDS Chronic non-bacterial prostatitis;Macrothelypteris oligophlebia;Methanol extract;Ethyl acetate fraction;Prostate in-
dex;cytokines
慢性非细菌性前列腺炎(chronic non-bacterial prostatitis，CNP)是泌尿外科的常见疾病，多发于成
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中国药师 2015 年第 18 卷第 10 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 10
年男性。近年来，越来越多的国内外学者专注于
CNP的治疗研究［1］，但因发病机制不明确且病因学
复杂，目前尚无确切的治疗方法。主要的治疗药物
有植物制剂、非甾体抗炎药、抗菌药物等，其中不良
反应较小的植物制剂普遍受到患者的认可［2］。针
毛蕨(Macrothelypteris oligophlebia)为蕨类植物门金
星蕨科针毛蕨属植物，其根茎部分有止血杀虫、利水
消肿、清热解毒的功效，常常用于疮肿、烫伤、水肿等
疾病的治疗［3］。已有的化学成分研究表明该植株
根茎含有丰富的黄酮类化合物，如原芹菜素、芹菜
素、槲皮素、山奈酚、柚皮素等，且显示出抗肿瘤和抗
氧化等活性［4］。本实验以此为基础，探讨针毛蕨对
实验性 CNP 大鼠的治疗效果，并从前列腺指数、病
理学检查和细胞因子水平等方面筛选其有效的活性
部位。
1 材料与方法
1． 1 主要仪器与试剂
UV-756 紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器厂) ;TG16-WS型高速离心机(长沙湘智离心机仪
器有限公司) ;AL1O4 型分析天平(上海梅特勒-托
利多仪器有限公司)。
普适泰片(舍尼通，南京美瑞制药有限公司，批
号:12082700) ;芦丁对照品(中国食品药品检定研
究院，批号:080-9303，含量为92． 5%) ;白细胞介素-
10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素 E2
(PGE2)酶联免疫吸附实验测定(ELISA)试剂盒均
购于美国 R＆D公司;环氧合酶-2(COX-2)ELISA 试
剂盒(武汉博士德生物有限公司) ;甲醇、乙酸乙酯、
氯仿等试剂均为分析纯。
1． 2 实验药材
针毛蕨根茎于 2009 年采于江西省九江市，经九
江森林植物标本馆的馆长谭策铭先生鉴定为金星蕨
科植物针毛蕨(Macrothelypteris oligophlebia)的根茎，
植物标本(编号:MTF0812)在华中科技大学同济医
学院药学院中药学教研室存放。
1． 3 实验动物
58 只雄性 SD 大鼠，体质量 180 ～ 220 g，购于
华中科技大学同济医学院实验动物中心［生产许可
证号:SCXK(鄂)2004-0007］。置于室温(24 ±
2)℃，相对湿度(55 ± 10)%，维持 12 h光照 ～ 12 h
黑暗循环交替，每日给予标准的饮食和饮水。实验
前适应性饲养 1 周。有关动物的操作按照相关标准
执行。
1． 4 针毛蕨甲醇提取物及各萃取部位的制备
针毛蕨根茎(1． 2 kg)粉碎后，用 100%甲醇在
70℃下冷凝回流提取 3 次，每次 2 h，收集滤液。滤
液经减压蒸馏和真空干燥，得到 212 g甲醇提取物。
留取 60 g甲醇提取物，其余的甲醇提取物加适
量的蒸馏水混悬后，用氯仿和乙酸乙酯依次萃取。
萃取液经减压蒸馏和真空干燥得到萃取物氯仿部位
(46 g)、乙酸乙酯部位(38 g)和水部位(58 g)。
1． 5 针毛蕨各部位提取物总黄酮的含量测定
参考文献资料中的实验步骤［5］，制备对照品溶
液，绘制标准曲线，并测定各个样品溶液中的总黄酮
含量。
1． 6 针毛蕨各部位提取物对 CNP的治疗作用研究
1． 6． 1 药物准备 取适量甲醇提取物和各部位萃
取物分别混悬到蒸馏水中得到的混悬液作为药物给
药，各组给药剂量均为 300 mg·kg －1［6］。普适泰片
作为阳性对照，给药剂量为 148 mg·kg －1［7］。
1． 6． 2 建立慢性非细菌性前列腺炎模型 将 58 只
SD雄性大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对
照组和给药组(甲醇提取物组、乙酸乙酯组、氯仿
组、水部位组) ，每组 8，10，8，8，8，8，8 只。手术前适
应性饲养 7 d后，对模型组、阳性对照组和给药组大
鼠分别手术。手术步骤如文献中描述［8］，将手术大
鼠麻醉后，在无菌条件下将 0． 1 ml的 1%角叉菜胶
注射液(溶于生理盐水中)分别注入前列腺左右两
侧叶。按照同样的手术步骤对正常对照组中的大鼠
进行处理，不同之处是将 0． 1 ml生理盐水分别注入
前列腺左右两侧叶。
手术完成后，将分好组的大鼠放回鼠笼，给予标
准饮食饮水，于 7 d 后开始灌胃给药。阳性对照组
给药剂量 148 mg·kg －1·d －1，给药组给药剂量 300
mg·kg －1·d －1，模型组和正常对照组灌胃给予相
同体积的生理盐水。给药 20 d。
1． 6． 3 准备血清和组织样品 末次给药后，所有大
鼠禁食但不禁水过夜。称重后，眼球取血，并迅速用
低温高速离心机以 3 000 r·min －1的速度离心 10
min，取其上清液并按照 IL-10、TNF-α、COX-2 和
PGE2 试剂盒上的说明方法对血清中的 4 种细胞因
子进行含量测定。颈椎处死后，迅速剖腹，层层分离
剥取前列腺组织并观察前列腺组织的病变状态，接
着称取湿重并用该湿重除以该大鼠的体重计算前列
腺指数(prostate index，PI)。剥离干净的前列腺右
侧叶迅速浸润在 10%的福尔马林溶液中固定，然后
进行 HE染色，通过光学显微镜观察前列腺腺腔、腺
泡、炎症细胞等病理学变化。其他的前列腺组织冻
存于 － 80℃冰箱中备用。
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www． zgys． org 研究论文
1． 7 统计学方法
采用 SPSS 17． 0 版统计软件行数据处理，实验
数据以 珋x ± s 表示，进行单因素方差分析。P ＜ 0． 05
为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 针毛蕨各部位提取物中总黄酮的含量
实验测得芦丁线性回归方程为 A = 11． 907C －
0． 013(r = 0． 999 5)。根据标准曲线及供试品溶液
浓度，得到甲醇提取物、乙酸乙酯部位、氯仿部位及
水部位中每 1 g 提取物含有的总黄酮含量分别为
196． 9 mg、223． 6 mg、120． 6 mg和168． 7 mg。
2． 2 前列腺指数的测定结果
如图 1 所示，相对正常对照组，模型组大鼠的
PI值显著升高(P ＜ 0． 01)。相对模型组，阳性对照
组、甲醇提取物组、乙酸乙酯组及氯仿组、水部位组
中大鼠的 PI 值均明显下降，差异有统计学意义(P
＜ 0． 01或 P ＜ 0． 05)。
注:与正常对照组相比，aP ＜ 0． 01;与模型组相比，
bP ＜ 0． 05，cP ＜ 0． 01
图 1 针毛蕨对实验大鼠前列腺指数的影响(珋x ± s)
表 1 针毛蕨对大鼠血清中的 IL-10、TNF-α、COX-2 和 PGE2 的含量水平影响(珋x ± s)
组别 大鼠数 /只 IL-10(pg·ml －1) TNF-α(pg·ml －1) COX-2(pg·ml －1) PGE2(pg·ml －1)
正常对照组 8 2． 98 ± 0． 73 21． 76 ± 2． 87 11． 92 ± 1． 41 21． 56 ± 2． 62
模型组 10 4． 57 ± 1． 00a 32． 40 ± 3． 79a 16． 67 ± 1． 47a 32． 94 ± 2． 82a
阳性对照组 8 3． 39 ± 0． 53c 23． 63 ± 2． 56c 12． 59 ± 1． 88c 23． 31 ± 2． 73c
甲醇提取物组 8 3． 48 ± 1． 02b 24． 39 ± 3． 50c 13． 59 ± 1． 30c 25． 45 ± 2． 66c
乙酸乙酯组 8 3． 43 ± 0． 72b 23． 95 ± 4． 82c 13． 01 ± 1． 25c 24． 58 ± 3． 47c
氯仿组 8 3． 89 ± 0． 55 28． 92 ± 1． 50b 15． 01 ± 0． 87b 30． 28 ± 1． 70b
水部位组 8 3． 66 ± 1． 14 26． 45 ± 3． 28c 14． 43 ± 1． 04c 29． 45 ± 4． 39
注:与正常对照组相比，aP ＜ 0． 01;与模型组相比，bP ＜ 0． 05，cP ＜ 0． 01。
2． 3 前列腺组织的病理学检查结果
如图 2 所示，正常对照组大鼠前列腺组织的形
态学结构清楚，腺腔规则，腺体排列整齐且较小，间
质内无炎症细胞浸润;相比正常对照组，模型组前列
腺组织病理学变化严重，腺腔不规则，腺体大小不一
排列无序，间质内浸润大量的炎症细胞，血管扩张充
血，结缔组织纤维化;与模型组相比，阳性对照组及
给药组的前列腺组织均有所改善。其中，阳性对照
组、甲醇提取物组和乙酸乙酯组改善显著，腺腔较规
则，腺体结构较清晰，间质内少见炎性细胞，少见血
A．正常对照组 B．模型组 C．阳性对照组 D．甲醇提取物组
E．乙酸乙酯组 F．氯仿组 G．水部位组
图 2 针毛蕨对大鼠前列腺组织的病理学影响
(HE染色，×400)
管扩张充血;相对模型组，氯仿组和水部位组改善不
明显。
2． 4 大鼠血清中 IL-10、TNF-α、COX-2 和 PGE2 的
含量测定结果
表 1 结果显示，模型组血清中 4 种因子含量与
正常对照组相比均显著性升高，差异有统计学意义
(P ＜ 0． 01)。相比模型组，阳性对照组、甲醇提取物
组和乙酸乙酯组中 4 种因子的水平均有不同程度的
降低，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01)。
氯仿组大鼠血清中 TNF-α、COX-2 和 PGE2 的含量
与模型组相比有明显的降低(P ＜ 0． 05) ，IL-10 的含
量降低，但差异无统计学意义。水部位组大鼠血清
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中 TNF-α 和 COX-2 的含量水平明显下降(P ＜
0． 01) ，IL-10 和 PGE2 的含量下降不明显。
3 讨论
实验采用的慢性非细菌性前列腺炎 SD 大鼠模
型诱导方法属于化学制剂直接注射法。它所造成的
化学性无菌性的前列腺炎症，虽与临床表现有较大
差异，但在现有的实验条件下易于操作和实现［9］。
前列腺指数应用于很多实验中，可以很好地解释实
验目的［10］。模型组前列腺指数与正常对照组对比
呈现出显著差异，并且模型组前列腺组织呈现出符
合 CNP病理学特征的症状，说明该实验采用的 CNP
模型是成功的、可以复制的。
前期研究发现，针毛蕨不同极性部位含有不同
种类和数量的黄酮类化合物［4］。参考以往类似的
研究方法［11］，实验选取了针毛蕨甲醇提取物、乙酸
乙酯部位、氯仿部位和水部位 4 个部位进行研究分
析。在总黄酮含量测定实验中发现，4 个部位均含
有一定量的黄酮，其中乙酸乙酯部位总黄酮含量最
高。由于黄酮类化合物具有抗炎性、抗氧化性等活
性，可推断乙酸乙酯部位对 CNP 有较好的治疗作
用，即为针毛蕨治疗 CNP的活性部位。考虑到实验
的安全性和有效性，参考文献资料，设定 4 个部位的
给药剂量均为 300 mg·kg －1［6］，阳性对照组的给药
剂量为 148 mg·kg －1［7］。
HE染色观察前列腺组织病理切片的方法能够
直观的表达炎症反应和特点，是慢性非细菌性前列
腺炎的一个常用研究方法［12］。如图 2 所示，甲醇提
取物组和乙酸乙酯组与模型组的显著差异，尤其是
乙酸乙酯组，说明针毛蕨对 CNP 有一定的治疗作
用，且其活性部位应为乙酸乙酯部位。
为了进一步探讨，实验又从细胞因子水平出发。
细胞因子是一类高活性的小分子多肽，细胞因子的
失衡可影响整个炎症反应的发生和发展过程［13］。
研究已发现许多细胞因子参与慢性非细菌性前列腺
炎的发生、发展过程［14］。比如在慢性非细菌性前列
腺炎患者的体内可常常检测到 IL-10、TNF-α、COX-2
和 PGE2 等因子的含量水平变化
［15，16］。其中，IL-10
和 TNF-α分别为抗炎因子和促炎因子，两者含量的
高低取决于炎症的严重程度。免疫调节因子 COX-2
在炎症反应过程中被激活并大量产生，同时促进调
节因子 PGE2 的大量生物合成
［17］。表 1 结果说明 4
种细胞因子均参与了 CNP 的致病过程。与模型组
相比，给药组中 4 种细胞因子的水平都有不同程度
的下降，说明 4 个部位均对慢性非细菌性前列腺炎
的发病过程有不同程度的抑制和改善，特别是乙酸
乙酯部位，可进一步确定针毛蕨治疗 CNP的活性部
位为乙酸乙酯部位。
慢性非细菌性前列腺炎的发生和发展涉及多方
面的因素，实验从不同的研究水平得出针毛蕨对慢
性非细菌性前列腺炎有着潜在的保护和治疗作用，
初步确定乙酸乙酯部位为治疗 CNP 的活性部位。
由于黄酮类化合物主要富集在乙酸乙酯段，推断治
疗 CNP的活性成分可能是黄酮类化合物。本实验
为深入研究针毛蕨中治疗慢性非细菌性前列腺炎的
活性成分及其作用机制提供了依据。
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