全 文 ：白簕叶总黄酮提取工艺和含量测定研究
蔡凌云 1, 2 ,黎云祥1＊ ,权秋梅 1
(1.西华师范大学生命科学学院 /四川省高校环境科学与生物多样性保护重点实验室 ,四川南充 637002;
2.贵州凯里学院化学系 ,贵州凯里 556003)
　　摘要　目的:确定白簕叶总黄酮提取工艺和含量测定方法。方法:采用微波辅助法提取白簕叶中的黄酮类化
合物 , 通过正交实验确定最佳提取工艺;分别以芦丁和金丝桃苷为指标 , 采用紫外分光光度法在 260 nm处测定白
簕叶中的总黄酮。结果:最佳工艺条件:微波辐射 50 s, 固液比 1∶20, 微波功率 480W, 乙醇浓度 30%, 间歇提取 2
次 , 按最佳工艺条件提取总黄酮含量为 50.04 mg/g;芦丁回归方程为:Y=33.21C+0.0106,相关系数 r=0.9998,平
均加样回收率为 99%, RSD=2.43%(n=6);金丝桃苷回归方程为:Y=46.269C+0.0064, 相关系数 r=1.000,平均
加样回收率为 103%, RSD=0.434%(n=6)。结论:该提取工艺合理 , 紫外分光光度法易操作 ,重复性好 , 为测定白
簕叶中总黄酮的一种切实可行的方法。
关键词　白簕叶;总黄酮;微波辅助提取;紫外分光光度法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)10-1575-03
基金项目:四川省教育厅重点项目(2006A078);四川省重点学科项目(SZD0420)作者简介:蔡凌云(1972-),女,高级实验师 ,主要从事天然产物提取 、分离和结构鉴定研究。＊通讯作者:黎云祥 , E-mail:yx li@263.net。
　　白簕(Acanthopanantrifoliatus(L.)Mer.)又称
鹅掌簕 、三加皮 、刺三加等 ,为五加科五加属攀援状
灌木。白簕味苦 ,性辛 、凉 ,气微香 ,具有疏风 、消肿 、
止痒等功效 ,常用于治疗肋间神经痛 、风湿性关节肿
痛 、腰腿疼痛 、跌打损伤 、胃痛 、胆囊炎 、咯血 、肠炎腹
泻 、感冒 、疮疡痈肿 、疥疮 、青竹蛇咬伤 、异物入肉等 ,
此外还具有多种食疗功效 〔1, 2〕。本课题组的前期研
究表明白簕叶中含黄酮 、皂苷 、强心苷 、多糖 、香豆素
等药用成分 ,且黄酮含量较高 。目前国外学者对白
簕三萜皂苷的研究较多〔3-5〕 ,但对白簕黄酮成分的研
究少见报道 ,而现代药理研究表明黄酮具有多种生
物活性 〔6, 7〕 ,主要表现在护肝 、抗炎 、抗菌抗病毒 、免
疫激活 、抗氧化 、抑制肿瘤细胞 、防治糖尿病及其并
发症和对心血管系统的显著疗效等方面。因此本文
探讨白簕叶中总黄酮的提取工艺和含量测定方法 ,
为进一步提取分离 、鉴定白簕黄酮成分 、探讨其药理
作用提供理论基础 ,进而为白簕的综合利用和开发
提供依据。
1 　材料与仪器
1.1 　材料　白簕 2007年 8月采集于贵州省天柱
县渡马乡 ,经西华师范大学生命科学学院秦自生教
授鉴定为五加科五加属植物白簕(Acanthopanantri-
foliatus(L.)Mer.),标本保存于西华师范大学生命
科学学院标本室 。
1.2 　仪器与试剂　瑞士 BUCHIR-200旋转蒸发
仪 ,德国 EppendorfResearch移液器 , 752型紫外可
见分光光度计 , G8023CSL-K3格兰仕微波炉 ,上海
亚荣 SHZ-Ⅲ循环水真空泵 ,北京赛多利斯 BT124S
型电子天平 ,芦丁标准品 (中药固体制剂制造技术
国家工程研究中心 ,批号:1097-060918),金丝桃苷
标准品 (中国药品生物制品检定所 ,批号:111521-
200303),无水乙醇为分析纯 ,水为双蒸水 。
2　方法
2.1　样品溶液制备
2.1.1 　供试品溶液的制备:称取自然干燥的白簕
叶粉末 50 g,过 100目筛 ,置索氏提取器中 ,用石油
醚(b.p.30 ～ 60℃)连续回流脱脂 、脱色 20 h,样品
置于通风处干燥备用。精确称取此备用白簕叶粉
1.000 g,置 50 ml锥形瓶中 ,按料液比 1∶20加 40%
乙醇 ,微波功率 480W间歇提取 2次 ,每次 30 s,合
并提取液 ,减压蒸干 ,用 50%乙醇溶解 ,定容至 100
ml,待用。
2.1.2 　对照品溶液的配制:精确称取 5.0 mg芦丁
标准品(120℃减压干燥至恒重)和 5.0 mg金丝桃
苷标准品 ,各用 50%乙醇溶解后 , 分别定容至 50
ml,即得芦丁对照品液和金丝桃苷对照品液(0.1
mg/ml)。
2.2　测定波长选择　240 ～ 370 nm内测定吸收值 ,
选择芦丁 、金丝桃苷和样品均有的最大或较大吸收
波长作为紫外分光光度法的测量波长。
2.3　方法学考察
2.3.1 　分别吸取一定量的对照品溶液 ,加 50%乙
醇稀释成浓度 0、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025、
0.030、0.035 mg/ml的溶液 ,按 “ 2.2”项下操作 ,以
·1575·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.10.041
吸光度 A为纵坐标 ,芦丁(或金丝桃苷)浓度 C为横
坐标绘制标准曲线。
2.3.2　精密度试验:分别精密吸取芦丁 、金丝桃苷
对照品溶液 1 ml,按 “ 2.2”项下处理 ,重复测定 6
次 ,计算 RSD。
2.3.3　稳定性试验:精密吸取 “ 2.1.1”项下制备
的提取溶液和上述两标准液各 0.5 ml,按 “ 2.2”项
下分别处理 ,每 5 min测定 1次吸光度 , 考察 40
min,计算 RSD。
2.3.4　加样回收率试验:精密吸取 “ 2.1.1”项下
制备的提取液 6份 ,分别置 10 ml容量瓶中 ,加入一
定量芦丁或金丝桃苷对照品 ,按 “ 2.2”项下处理 ,计
算平均回收率和 RSD。
2.4 　正交实验　选取固液比 、乙醇浓度 、辐射时
间 、微波功率进行 4因素 3水平正交实验 ,因素水平
见表 1。
3 　结果与分析
3.1 　波长确定和标准曲线绘制
3.1.1　波长确定:经测定 ,在波长 260 nm处芦丁
和金丝桃苷均有最大吸收 ,样品也有较大吸收 ,故确
定测定波长为 260 nm。
3.1.2　标准曲线绘制:经计算得到芦丁的标准曲
线回归方程为 Y=33.21C+0.0106,相关系数 r=
0.9998,在 0.005 ～ 0.035 mg/ml范围内呈良好的线
性关系 。金丝桃苷的标准曲线回归方程为 Y=
46.269C+0.0064,相关系数 r=1.000 ,在 0.005 ～
0.035 mg/ml范围内呈良好的线性关系 。
　表 1 　正交实验因素及水平
水平
因素
A固液比 B乙醇浓度(%) C辐射时间(s) D微波功率(W)
1 1∶10 30 30 160
2 1∶15 40 40 320
3 1∶20 50 50 480
3.2　精密度 、稳定性 、回收率试验结果　以芦丁为
标准品时 , 精密度和稳定性试验的 RSD分别为
1.146%、 0.229%, 平均回收率为 99%, RSD为
2.43%(见表 2)。以金丝桃苷为标准品时 ,精密度
和稳定性试验的 RSD分别为 0.322%、0.395%,平
均回收率为 103%, RSD为 0.434%(见表 2)。样品
的稳定性实验的 RSD为 0.0763%。以上结果表明
两种测定方法的精密度 、稳定性良好 ,经回收率试验
证明都具有良好的准确度和重现性 ,适用于白簕总
黄酮的测定。
　　表 2 　加样回收率试验结果
样品
总黄酮含量(mg)
芦丁 金丝桃苷
加标量(mg)
芦丁 金丝桃苷
加标后总黄酮含量(mg)
芦丁 金丝桃苷
回收率(%)
芦丁 金丝桃苷
平均回收率(%)
芦丁 金丝桃苷
RSD(%)
芦丁 金丝桃苷
1 0.2389 0.1715　 0.05251 0.05178 0.2889 0.2251 95 103 99 103 2.43 0.434
2 0.2389 0.1715 0.05251 0.05178 0.2922 0.2251 102 103
3 0.2389 0.1715 0.05251 0.05178 0.2910 0.2253 99 104
4 0.2389 0.1715 0.05251 0.05178 0.2907 0.2249 99 103
5 0.2389 0.1715 0.05251 0.05178 0.2919 0.2249 101 103
6 0.2389 0.1715 0.05251 0.05178 0.2907 0.2247 99 103
3.3 　不同标准品测定样品总黄酮含量结果比较　
分别以芦丁和金丝桃苷为指标 ,测定药材同一份样
品时按 “2.1.1”项下制备的提取溶液 0.5 ml, ,以芦
丁对照品测定的结果为 23.89 mg/ml,高于以金丝
桃苷为对照品测定的结果 17.24 mg/ml。
3.4 　正交实验结果　见表 3、表 4。从极差和方差
分析可知 ,辐射时间和固液比对白簕叶总黄酮的提
取具有极显著的影响 , 4种因素影响的主次顺序是:
辐射时间 >固液比 >微波功率 >乙醇浓度 。白簕叶
提取总黄酮的最佳工艺为 A3B1C3D3 ,即微波辐射 50
s,固液比采用 1∶20,在 480W时选用 30%乙醇 ,间
歇提取 2次 。
3.5　验证试验　按 A3B1C3D3组合进行 3次平行
实验 ,总黄酮平均含量为 50.04 mg/g,故所选取的
工艺确为最佳工艺 。
4　讨论
4.1　总黄酮含量的测定方法一般有分光光度法和
高效液相色谱法〔8-10〕 ,高效液相色谱法虽然重现性 、
稳定性等指标均较好 ,但仪器设备昂贵 ,操作复杂 ,
费用较高 。分光光度法测定黄酮含量 ,不但操作简
单方便 ,而且结果准确可靠。
4.2　测定药材同一份样品时 ,以芦丁为对照品测
定的结果(23.89 mg/ml)比以金丝桃苷为对照品测
定的结果(17.24 mg/ml)高 。由于双糖苷的分子量
·1576· 中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月
比单糖苷的分子量大 ,当吸收度相同时 ,双糖苷(芦
丁)代表的重量比单糖苷(金丝桃苷)代表的重量
大 ,最终计算得到的样品含量就会高一些 。
　表 3 　L9(34)正交实验结果
序号 A B C D 总黄酮含量(mg/g)提取率(%)
1 1 1 1 1 39.49 3.95
2 1 2 2 2 40.47 4.05
3 1 3 3 3 42.92 4.29
4 2 1 2 3 44.39 4.44
5 2 2 3 1 45.07 4.51
6 2 3 1 2 42.05 4.21
7 3 1 3 2 46.13 4.61
8 3 2 1 3 42.86 4.29
9 3 3 2 1 43.46 4.35
K1 1.506 1.593 1.525 1.569
K2 1.612 1.574 1.573 1.577
K3 1.623 1.574 1.644 1.595
R 0.117 0.019 0.119 0.026
　表 4 　方差分析结果
因素 偏差平方和 自由度 F比 F0.05(2, 2)显著性
A 0.025 2 25.000 19.00 显著
B(误差) 0.001 2 1.000 19.00
C 0.022 2 22.000 19.00 显著
D(误差) 0.001 2 1.000 19.00
4.3 　本文用石油醚除脂除色素 ,以乙醇为提取剂 ,
利用微波法首次提取白簕叶中的黄酮类化合物 。通
过 L9(34)正交实验确定了提取的最佳工艺条件为:
微波辐射 50 s,固液比 1∶20,微波功率 480W, 30%
乙醇 ,间歇提取 2次。该提取工艺具有稳定性好 ,操
作简便 ,生产成本较低的优点 。目前白簕中总黄酮
的提取研究未见报道 ,本研究为开发白簕叶黄酮资
源提供了理论参考。
4.4 　笔者用石油醚(b.p.30 ～ 60℃)除去白簕叶中
叶绿素时 ,无论采用浸泡还是回流 ,时间都较其他文
献的时间长几倍到十几倍 〔11, 12〕 ,浸泡用 8 ～ 10 d,连
续回流要 18 ～ 24 h。这应该是物种的差异引起的 ,
也进一步说明了白簕叶中叶绿素含量丰富(每 100 g
鲜白簕叶中含叶绿素 107 mg)〔2〕。现代医学发现 ,
叶绿素可促进溃疡伤口肉芽新生 ,加速伤口愈合 ,特
别是久治难愈的胃溃疡 ,叶绿素的作用比传统的抗
溃疡胃药还要好。叶绿素还有良好的除臭作用 ,其
作用机理在于叶绿素可抑制代谢过程中产生硫化。
所以在开发白簕药用价值的同时 ,可以考虑提取叶
绿素 ,有效地利用资源 ,为白簕的综合利用再开新途
径。
参 考 文 献
[ 1] 中国科学院植物研究所 .中国高等植物图鉴 .第二
册 .北京:科学出版社 , 1985:1037.
[ 2] 张秋燕 ,张福平.野生保健蔬菜———白簕食品研究与开
发 , 2003, 24(3):66-67.
[ 3] LischewskiM, TyPhD, KutschabskyL, etal.Two24-
nor-triterpenoidcarboxylicacidsfromAcanthopanaxtrifoli
atus.Phytochemistry, 1985, 24(10):2355-2357.
[ 4] TyPhD, LischewskiM, PhietH V, etal.3α, 11α-Di-
hydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oica-cidfromAcantho-
panaxtrifoliatus.Phytochemistry, 1985, 24(4):867-869.
[ 5] YookCS, KimIH, HahnDR, etal.ALupane-Triter-
peneGlycosidefrom leavestwoAcanthopanax.Phytoch
emistry, 1998, 49(3):839-843.
[ 6] 焦晶晶 ,张英 .黄酮类化合物在防治糖尿病及其并发症
方面的最新研究进展 .中国药学杂志 , 2006, 29(5):
119-123.
[ 7] 周新 ,李宏杰 .黄酮类化合物的生物活性及临床应用进
展 .中国新药杂志 , 2007, 16(5):350-355.
[ 8] 严赞开 .紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 .
食品研究与开发 , 2007, 28(9):164-167.
[ 9] 曹建国 , 赵则海 ,李庆勇 , 等.刺五加丁香苷和总黄酮含
量及其季节动态 .植物学通报 , 2006, 23(3):269-274.
[ 10] 吴春霞 , 宋曼殳 ,阿不都拉·阿巴斯.小甘菊不同部位
总黄酮含量测定及其薄层色谱的初步分析 .食品科
学 , 2007, 28(7):430-433.
[ 11] 李筱玲 ,邓寒霜 .刺五加茎叶化学成分分析 .商洛师
范专科学校学报 , 2006, 20(1):103-105.
[ 12] 刘忠英 ,晏国全 , 卜凤泉 , 等 .中药刺五加叶中有效成
分的几种微波辅助提取方法研究 .分析化学 , 2005, 33
(4):531-534.
(2008 -01-28收稿)
《中药材 》杂志为美国 IM/Medline收录期刊 。
·1577·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月