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八角枫对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及毒性



全 文 : 第35卷 第6期
 2012年6月
合肥 工 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 )
JOURNAL OF HEFEI UNIVERSITY OF TECHNOLOGY
Vol.35No.6 
Jun.2012 
  
收稿日期:2011-11-17;修回日期:2012-01-10
基金项目:安徽高校省级自然科学研究重点资助项目(2009AJZR0602);国家大学生创新试验计划资助项目(101035926)
作者简介:张 威(1988-),男,安徽宿州人,合肥工业大学硕士生;
丁运生(1966-),男,安徽肥东人,博士,合肥工业大学教授,硕士生导师.
Doi:10.3969/j.issn.1003-5060.2012.06.027
八角枫对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及毒性
张 威1, 徐红梅1,2, 任 娜1, 丁运生2, 田 芳1, 刘 辉1
(1.合肥工业大学 医学工程学院,安徽 合肥 230009;2.合肥工业大学 化学工程学院,安徽 合肥 230009)
摘 要:文章通过考察八角枫醇提物、八角枫总碱对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及毒性,研究八角枫
治疗关节炎的有效部位;分别采用足容积法和5级评分法测定大鼠足肿胀度及关节炎指数(AI),采用 HE染
色法观察大鼠关节和肝脏组织的形态学变化,并作血清常规检测。结果表明,八角枫醇提物、八角枫总碱可
明显减轻AA大鼠的足肿胀度,降低其关节炎指数,改善关节的病理学变化。实验证明了八角枫醇提物对
AA大鼠的治疗作用较好,且对肝脏无明显毒性。
关键词:八角枫;佐剂性关节炎;足肿胀度;关节炎指数
中图分类号:R285.5   文献标识码:A   文章编号:1003-5060(2012)06-0832-05
Therapeutic effect of Alangium chinense(Lour.)Harms
on adjuvant arthritis rats and its toxicity
ZHANG Wei 1, XU Hong-mei 1,2, REN Na1,
 DING Yun-sheng2, TIAN Fang1, LIU Hui 1
(1.School of Medical Engineering,Hefei University of Technology,Hefei 230009,China;2.School of Chemical Engineering,Hefei Uni-
versity of Technology,Hefei 230009,China)
Abstract:The effective parts of Alangium chinense(Lour.)Harms on rheumatoid arthritis were studied
via the investigation of the therapeutic effects and the toxicity of ethanol extract of Alangium chinense
(Lour.)Harms(EA)and total alkali of Alangium chinense(Lour.)Harms(TA)on adjuvant arthritis
(AA)in rats.Foot volume method was adopted to measure hind paw sweling of rats and five grading e-
valuation was used to evaluate arthritis index(AI)of rats respectively.Morphological changes of joints
and hepatic lesions of rats were observed by haematoxylin eosin(HE)staining method and the serum bio-
chemical indexes were tested.The results show that the EA and TA significantly diminish the paw swel-
ing and polyarthritis symptoms of AA rats,lower their arthritis index and improve the pathological chan-
ges of their joints.It is proved that the EA has good therapeutic effects on AA rats and has no obvious
toxicity to the rats’liver.
Key words:Alangium chinense(Lour.)Harms;adjuvant arthritis(AA);paw sweling;arthritis index(AI)
0 引  言
八角枫为八角枫科八角枫属植物(Alangium
Chinense(lour.)Harms),其味辛、温,具有祛风
除湿、舒筋通络及散瘀止痛等功效[1-2],临床常用
于治疗关节炎和跌打损伤等,具有良好的疗效。
一直以来,对八角枫的研究多集中于其化学成分
的分离与分析[3-4],而关于其治疗类风湿性关节
炎(Rheumatoid Arthritis,简称RA)的有效成分
的研究则很少。
本文研究了八角枫醇提物(Ethanol Extract
of Alangium Chinense (lour.)Harms,简 称
EA)、八角枫总碱(Total Alkolid of Alangium
Chinense(lour.)Harms,简称TA)对佐剂性关
节炎(Adjuvant Arthritis,简称 AA)大鼠的治疗
作用及其肝毒性,以期为临床合理用药提供
依据。
1 实验材料
1.1 药品
八角枫药材,购自亳州药材公司;八角枫醇提
物(EA)、八角枫总碱(TA),均为棕色粉末,由合
肥工业大学高分子材料研究所提供;完全弗氏佐
剂(Complete Freund’s Adjuvant,简称 CFA),
Sigma公司 (批号 019k8719);雷公藤多甙片
(Glucosides of Tripterygium Wifordi, 简 称
GTW),上 海 复 旦 复 华 药 业 有 限 公 司 (批 号
090819)。EA、TA和GTW 实验前分别用0.5%
的羧甲基纤维素钠配制成所需浓度。
生化检测试剂盒:丙氨酸氨基转移酶(ALT,
批号107252G)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST,批
号105301E)、总胆红素(TBIL,批号107291F)、
碱性磷酸酶(ALP,批号106181E)均购自北京利
德曼生化股份有限公司;血清白蛋白(ALB,批号
110804)购自浙江夸克生物科技有限公司。
1.2 动物分组及给药方法
Sprague-Dawley(SD)大鼠42只,雄性,质量
为(180±20)g,安徽医科大学实验动物中心提
供(皖医实动准字第01号)。随机均分为7组:正
常组,AA模型组,EA大、中、小剂量组,TA组和
GTW 对照组。
除正常组外,其余各组大鼠均于左后足跖皮
内注射0.1mL CFA致炎[5]。在大鼠致炎后第
14~21天连续灌胃给药,EA组大、中、小剂量分
别为52、26、13mg/kg;TA 组剂量为3mg/kg;
GTW 组剂量为30mg/kg;正常组和模型组灌胃
等容量的空白溶剂。每日1次,连续8d。
1.3 试验仪器
采用的仪器如下:YLS-7B足趾容积测量仪;
SHZ-D(Ⅲ)循环水真空泵;RE-52AA 旋转蒸发
仪;OlympusAH-2生物显微镜;RM2135轮转式
组织切片机;AE200电子分析天平;BMJ-1组织
包埋机;HC-3018R 高速冷冻离心机;OLYM-
PUS-AU640全自动生化检测仪。
2 试验方法
2.1 八角枫提取物的制备
八角枫总碱(TA)的制备方法为:八角枫细
根,经适当粉碎,用75%的酸性乙醇(含1%酒石
酸)回流加热2次,每次2h,滤液减压浓缩至一定
体积(1g原药材浓缩至0.8mL),用30%的
NaOH溶液调节pH 值至10,再用氯仿分次萃
取,合并氯仿液,挥去溶剂、真空干燥,得TA棕色
粉末。
每克粉末相当于原药材952.38g。经酸碱滴
定法测定[6],每克提取物含总碱量为61.5%。同
理,采用80%的乙醇回流提取EA,滤液减压浓
缩、干燥,得到每克 EA 粉末相当于原药材
23.15g,生物碱的质量分数为10.8%。
2.2 足肿胀度的检测
在致炎前及致炎后第7、10、14、17、21天,分
别用足容积测量仪测定大鼠继发侧足爪容积,并
求出肿胀度,以观察药物对 AA 大鼠继发炎症
的影响。
2.3 关节炎指数的测定
参照文献[7]所述的5级评分法,对大鼠进行
关节指数(Arthritic Index,简称 AI)评分:0分,
即无红肿;1分,即关节红不肿;2分,即关节轻度
红肿;3分,即关节中度红肿;4分,即关节重度红
肿伴功能性障碍。未注射CFA的3个足爪的AI
之和代表每只大鼠的AI。
2.4 血清生化指标检测
各组动物禁食12h,末次给药1h后,腹腔注射
水合氯醛麻醉,腹主动脉取血。以3 000r/min离心
10min,取血清,按试剂盒说明书检测,分别检测大鼠
血清中ALT、AST、ALP、ALB和TBIL值。
2.5 病理学指标检测
各组大鼠分别在致炎后21d处死,立即分离
后肢病变关节和肝脏组织,10%甲醛溶液固定,乙
二胺四乙酸脱钙(关节),乙醇逐级脱水,常规石蜡
包埋,冷冻切片,苏木素-伊红(Haematoxylin-eo-
sin,简称 HE)染色,光镜下进行病理组织学检查。
2.6 数据处理与统计
数据用SPSS17.0统计软件处理,以(均值±
标准差)(珚x±s)表示,组间差异比较采用t检验。
3 试验结果
3.1 八角枫对AA大鼠继发侧关节肿胀度的影响
与正常组比较,模型组大鼠在致炎后10、14、
338 第6期 张 威,等:八角枫对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及毒性
17、21d继发侧足肿胀度明显增加;EA组3种剂
量给药治疗后(21d),均可明显减小 AA大鼠的
足肿胀度,TA组和GTW 组也有相似的效果,见
表1所列。
表1 EA和 TA对AA大鼠继发侧关节肿胀度的影响(珚x±s,n=6) mL
组别
剂量/
(mg·kg-1)
7d 10d 14d 17d 21d
正常 0.08±0.03  0.09±0.02  0.11±0.03  0.13±0.05  0.15±0.04
AA  0.12±0.02  0.14±0.04  0.39±0.08▲▲ 0.62±0.07▲▲ 0.83±0.18▲▲
52  0.14±0.05  0.19±0.05  0.38±0.10  0.51±0.08* 0.56±0.09**
EA  26  0.13±0.03  0.15±0.03  0.39±0.11  0.54±0.04* 0.62±0.06*
13  0.14±0.06  0.18±0.04  0.43±0.08  0.55±0.06  0.64±0.05*
TA  3  0.16±0.07  0.19±0.07  0.44±0.06  0.57±0.04  0.67±0.02*
GTW  30  0.17±0.04  0.17±0.06  0.47±0.10  0.53±0.03* 0.64±0.03*
  注:与正常组相比,▲表示在P<0.05水平差异显著,▲▲表示在P<0.01水平差异显著;与模型组相比,*表示在P<0.05水平
差异显著,* *表示在P<0.01水平差异显著;表2、表3同此。
3.2 八角枫对AA大鼠关节炎指数的影响
八角枫对AA大鼠关节炎指数的影响见表2
所列。
由表2可见,AA模型组大鼠在致炎后,其继
发侧关节出现不同程度的红肿或肿胀,AI评分显
著增加。EA(52、26、13mg/kg)、TA(3mg/kg)
给药治疗后(21d),AA大鼠的关节红肿或肿胀
有明显改善,其关节AI值降低。
表2 EA和 TA对AA大鼠关节炎指数的影响(珚x±s,n=6)
组别
剂量/
(mg·kg-1)
7d 10d 14d 17d 21d
AA  2.89±0.67  4.77±0.74  6.55±0.93  8.12±0.73  9.22±0.62
52  3.10±0.52  4.38±0.64  6.35±0.46  6.83±0.45** 5.98±0.66**
EA  26  2.96±0.38  4.56±0.58  6.60±0.49  7.15±0.37* 6.67±0.22**
13  2.91±0.43  5.22±0.67  7.01±0.63  7.41±0.55* 7.38±0.48*
TA  3  3.15±0.72  5.09±0.53  6.93±0.40  7.10±0.32* 7.33±0.36*
GTW  30  3.10±0.30  5.03±0.61  7.10±0.49  7.03±0.34* 6.86±0.39**
3.3 八角枫对大鼠血清生化指标的影响
EA和TA对AA大鼠血清生化指标的影响
见表3所列,表3数据显示,TA给药后,大鼠血
清中ALT、AST明显高于正常组,ALP和TBIL
值虽有升高,但无统计学差异,ALB值无明显变
化;EA各剂量组的生化指标未见异常。
表3 EA和 TA对AA大鼠血清生化指标的影响(珚x±s,n=6)
组别
剂量/
(mg·kg-1)
ALT酶活/
(U·L-1)
AST酶活/
(U·L-1)
ALP酶活/
(U·L-1)
ρ(ALB)/
(g·L-1)
c(TBIL)/
(μmol·L-1)
正常 55.0±12.7  104.5±20.4  196.5±50.56  29.57±2.97  3.22±1.35
AA  57.3±15.1  110.3±26.9  189.8±35.5  29.32±3.14  3.53±0.93
52  51.7±9.6  93.2±21.3  179.0±75.8  30.38±1.72  3.30±0.28
EA  26  55.5±11.2  98.7±14.4  173.3±41.8  31.05±1.76  3.83±0.80
13  51.2±14.4  94.7±21.4  158.3±45.1  28.33±2.33  3.88±1.11
TA  3  69.7±7.2▲ 139.5±20.0▲ 209.0±68.4  30.06±3.41  3.97±0.70
GTW  30  59.3±7.5  111.7±16.0  205.8±81.4  29.97±1.71  3.78±1.14
3.4 病理组织学观察
3.4.1 八角枫对AA大鼠关节病理变化的影响
八角枫对AA大鼠关节组织病理变化的影响
如图1所示。
由图1可看出,在光学显微镜下观察,正常大鼠
的关节滑膜组织衬覆1~2层滑膜细胞,软骨表面光
438    合肥工业大学学报(自然科学版) 第35卷 
滑;而AA大鼠的关节滑膜组织明显增厚,其滑膜细
胞增生至4~8层,同时伴有小血管增生和慢性炎细
胞浸润;严重时,出现软骨组织破损、剥落,并有明显
的血管翳形成。八角枫各用药组均可不同程度地减
轻上述病理变化,主要表现为关节滑膜炎症减轻,滑
膜组织轻度增生,血管翳形成减少,软骨受损程度减
轻,但TA组仍有部分小血管充血。
图1 八角枫对AA大鼠关节组织病理学的影响
3.4.2 八角枫对大鼠肝脏组织的病理学影响
八角枫对大鼠肝脏组织的病理学影响如图
2所示。图2a、图2b的放大倍数为×100,图
2c、图2d的放大倍数为×200。从图2可看出,
正常大鼠肝组织结构完整,肝细胞形态均匀,肝
小叶以中央静脉为中轴,肝细胞索呈放射状排
列组给药8d后,大鼠的肝细胞出现不同程度的
水肿,局部肝窦间隙变大,并可见点状坏死;而
EA组,无论是高剂量还是低剂量,给药后肝细
胞形态都基本正常。
图2 八角枫对大鼠肝脏组织的病理学影响
4 结束语
类风湿性关节炎(RA)是一种慢性的、以炎症
和关节进行性破坏为特征的自身免疫性疾
病[8-9],临床表现为关节疼痛、肿胀、强直甚至畸
形。RA的显著特点是关节滑膜组织增生、炎性
细胞浸润和血管翳形成,进一步可导致骨膜、软骨
组织的破坏。AA大鼠的关节组织病理变化和实
验室指标与人类RA相似[10],是筛选和研究治疗
RA药物较理想的模型。
本研究在实验中观察到,模型复制10d后,
各组大鼠出现继发侧关节肿胀,关节评分指数增
大;同时,病理学检查显示,AA大鼠关节出现血
管增生、炎性细胞浸润、软骨组织破坏等,说明模
型复制是成功的。
八角枫的须根及根皮中含有生物碱、水杨苷
类和树脂等物质,在临床用于治疗风湿性关节炎、
类风湿性关节炎、跌打损伤等[6],具有较好的疗
效。本实验研究发现,八角枫给药组可显著减轻
AA大鼠的关节肿胀度,减少血管翳的形成,改善
AA大鼠关节病理变化,提示EA、TA均对 AA
大鼠关节炎症有明显的抑制作用。
由于八角枫治疗RA的有效成分一直不明,
使得临床剂量难以控制,同时八角枫所含的生物
碱有一定的毒性[11],稍有不慎,就会引起中毒反
应[12-16],这些都极大地限制了其临床应用。文献
[17]研究发现,肝脏是八角枫毒性作用的主要靶
器官之一。AST和ALT是反应肝功能的酶类指
标,当肝细胞受损时,ALT上升;而当肝细胞严重
受损危及线粒体时,则AST上升;此外,肝脏发生
炎症、坏死、中毒等损害时,均可引起 ALP、TBIL
升高和ALB降低。
本实验中,大鼠给予 TA 后,其血清 ALT、
AST水平明显升高(P<0.05),肝组织细胞出现
了水肿、破损甚至坏死,而EA各剂量组对大鼠血
清生化指标、肝组织没有明显影响;表明 TA在
3mg/kg剂量时,虽对RA有疗效,但对肝脏有一
定程度的损害,提示在保证疗效的前提下,八角枫
醇提物相对安全、毒性较小。
[参 考 文 献]
[1] 王本祥.中药药理学[M].天津:天津科学技术出版社,
1997:491.
[2] 蒋媛媛,伍卫红,彭荣珍,等.中药八角枫生药学的初步研究
538 第6期 张 威,等:八角枫对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及毒性
[J].广东药学,2004,14(5):8-10.
[3] Zhang Xiaohui,Liu Shanshan,Xuan Lijiang.Cyclopentenyl-
glycines and other constituents from Alangium chinense
[J].Biochemical Systematics and Ecology,2009,37
(3):214-217.
[4] Itoh A,Tanahashi T,Nagakura N,et al.Glycosides of ben-
zyl and salicyl alcohols from alangium chinense[J].Chemi-
cal Pharmaceutical Buletin,2001,49(10):1343-1345.
[5] Xu Hongmei,Wei Wei,Jia Xiaoyi,et al.Effects and mecha-
nisms of total glucosides of paeony on adjuvant arthritis in
rats[J].Journal of Ethnopharmacology,2007,109
(3):442-448.
[6] 钟兆健,傅 军,梁从庆,等.风湿定片中总生物碱的含量测
定[J].长春中医学院学报,2004,20(4):40.
[7] 戴 敏,魏 伟,汪倪萍,等.木瓜苷对大鼠佐剂性关节炎的
治疗作用[J].中国药理学通报,2003,19(3):340-344.
[8] Smith M D,Tak P P.Rheumatoid arthritis:new insights in-
to the role of synovial inflammation in joint destruction[J].
Modern Rheumatology,2002,12(4):287-293.
[9] Doan T,Massarotti E.Rheumatoid arthritis:an overview of
new and emerging therapies[J].The Journal of Clinical
Pharmacology,2005,45(7):751-762.
[10] 张玲玲,沈玉先,魏 伟.类风湿性关节炎动物模型与临床
的关系[J].中国药理学通报,2002,18(5):502-506.
[11] 全国中草药汇编组.全国中草药汇编:上[M].北京:人民
卫生出版社,1982:14-15.
[12] 陈冀胜,郑 硕.中国有毒植物[M].北京:科学出版社,
1987:58-59.
[13] 张昌华,王登文,许小明,等.八角枫中毒死亡1例[J].法
医学杂志,2008,24(2):155-156.
[14] 王洪宗,杨泉根,胡开发.GC/MS法检验人体组织及体液
中八角枫[J].中国法医学杂志,2009,24(1):53-54.
[15] 朱天忠.中药单方中毒的临床研究[J].实用中医内科杂
志,1991,5(1):11-13.
[16] 朱天忠,卢长云.某些含生物碱中药的毒性及防治初探
[J].中国中药杂志,1992,17(4):248-250.
[17] 张长银,张礼俊,胡永良,等.小鼠急性八角枫中毒的病理
学观察[J].法医学杂志,2009,25(5):329-331.
(责任编辑 闫杏丽)
(上接第771页)
  由图8可知,在一段时间内完成相同功能时
中间文件需要传输的数据量极大,实体特征方法
的累计数据量次之,隐式特征方法数据量最小,因
此即使是在用户数较多、操作频繁时也能保证系
统的低网络负荷。
由上述测试结果可知,基于隐式特征表达的
数据交换方法延迟时间短,网络负荷低,能较好地
满足实时性要求。
3  结束语
本文对复制式协同CAD环境下数据交换方
法进行了深入的研究,提出了一种基于隐式特征
表达的协同数据交换方法(IFDE)。该方法利用
面向对象的特征消息类封装、网络序列化传输以
及语义特征重构技术,增量式交换协同操作特征
的隐式表达信息,而将特征的几何拓扑信息交由
接收端系统的建模引擎重构实现。该方法极大地
减少了网络数据传输,降低了协同过程中网络传
输延时,提高了实时性。
[参 考 文 献]
[1] Li W D,Ong S K,Fuh J Y H,et al.Feature-based design
in a distributed and colaborative environment[J].Comput-
er-Aided Design,2003,36(9):775-797.
[2] 张必强,邢 渊,阮雪榆.分布式同步协同设计中基于三角
网格 模 型 的 实 时 传 输 [J].中 国 机 械 工 程,2003,13
(4):305-308.
[3] 刘云华,陈立平,钟 毅.利用设计历史实现异构CAD系统
特 征 信 息 交 换 [J].中 国 机 械 工 程,2003,14
(21):1845-1847.
[4] 汪慧芬,张友良,曹 健.基于特征的协同设计[J].计算机
辅助设计与图形学学报,2001,13(4):367.
[5] 黄素英,王周敬.面向对象框架在信息系统开发中的应用
[J].合 肥 工 业 大 学 学 报:自 然 科 学 版,2003,26
(Z1):896-898.
[6] 彭 维.网络化协同CAD系统的关键技术研究[D].西安:
西北工业大学,2001.
[7] 高玉琴,何云峰,于俊清.改进的基于AABB包围盒的碰撞检
测算法[J].计算机工程与设计,2007,28(16):3815-3817.
[8] Bergen G V D.Efficient colision detection of complex de-
formable models using AABB trees[J].Journals of Graph-
ics Tools,1997,2(4):1-14.
(责任编辑 张 镅)
638    合肥工业大学学报(自然科学版) 第35卷