全 文 ：分光光度法测定黄花补血草中总黄酮的含量
刘 宇 1 ,张应鹏 2 ,梁剑平 1 ,华兰英1 ,王学红 1 ,尚若峰 1
(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 ,甘肃兰州 730050;2.兰州理工大学石油化工学院 ,甘肃兰州 730050)
摘要　[目的 ]建立一种简单、快速的方法 ,测定黄花补血草中总黄酮含量 ,以期为黄花补血草质量控制和开发利用提供科学依据。 [方
法]以槲皮素为对照品 ,采用紫外分光光度法 ,在波长 370nm处测定黄花补血草总黄酮含量。 [结果]槲皮素在 2.5～ 12.5μg/ml浓度范
围内与吸光度值呈良好的线性关系 ,总黄酮平均回收率为 99.46%, 黄花补血草中总黄酮含量为 1.63%。 [结论]该测定方法稳定、快
速、简便 ,测定结果良好 ,为黄花补血草质量控制和开发利用提供了科学依据。
关键词　黄花补血草;分光光度法;总黄酮;槲皮素
中图分类号　R284.2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)20-10639-02
DeterminationofTotalFlavonoidsinLimoniumaureum(L.)Hill.bySpectrophotometry
LIUYuetal　(LanzhouInstituteofAnimalandVeterinaryPharmceuticalSciences, ChineseAcademyofAgriculturalSciences, Lanzhou,
Gansu730050)
Abstract　[ Objective] TheaimwastoestablishasimpleandquickmethodtodeterminetotalflavonoidscontentinLimoniumaureum(L.)
Hil.toprovidescientificevidenceforthequalitycontrolanddevelopmentofLimoniumaureum(L.)Hil.[ Methods] Withquercetinasthe
referencesubstance, UVSpectrophotometrywasusedandthedetectionwavelengthwas370nm.[ Results] Thelinearrelationshipwasgood(r
=0.999 6)intherangeof2.5-12.5μg/ml, theaveragerecoveryrateoftotalflavonoidswas99.46%andthecontentoftotalflavonoidsin
thesampleswas1.63%.[ Conclusion] UVSpectrophotometryisasuitablemethodfordetectionoftotalflavonoidscontentinLimoniumaure-
um(L.)Hil.foritssimpleandquickcharacteristics, anditwilprovidethescientificevidenceforthequalitycontrolanddevelopmentofLi-
moniumaureum(L.)Hil.
Keywords　Limoniumaureum(L.)Hil.;Spectrophotometry;Totalflavonoids;Quercetin
基金项目　中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(BRF-
080401)。
作者简介　刘宇(1981-),男 ,硕士 ,助理研究员 ,从事有机及天然药物
化学的研究。E-mail:yangguang8684@ 163.com。
收稿日期　 2010-04-12
　　黄花补血草 [ Limoniumaureum(L.)Hil.] ,又称黄花矶
松 、金色补血草 、金匙叶草 ,系蓝雪科补血草属多年生草本植
物 。其多分布于我国西北地区的甘肃 、青海以及内蒙等地的
沙漠干旱地区 。
黄花补血草的花萼可入药 ,具有止痛 、消炎 、止血及抗癌
等功效 ,外用治疗各种炎症 ,内服治疗神经痛 、月经少 、耳鸣 、
奶汁少 、牙痛 、齿槽脓肿 、感冒 、发烧 、疮疖 、痈肿等症 [ 1] 。叶
冠等 [ 2]的研究发现 ,其提取物对于血小板活化因子(PAF)有
拮抗作用。我国黄花补血草植物资源十分丰富 ,但国内外对
这方面的报道较少 ,迄今报道的成分主要是鞣质类和黄酮类
成分 [ 3-5] 。笔者以槲皮素为对照品 ,采用紫外分光光度法在
波长 370nm处测定黄花补血草中的总黄酮含量 ,以期对黄
花补血草的化学成分及其含量有一个系统 、全面的了解 ,为
深入研究并综合开发甘肃产黄花补血草的药用价值和经济
价值提供科学依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象。黄花补血草 , 2009年 10月采于甘肃兰州
甲子坪。
1.1.2　主要设备。 U-2001紫外分光光度计 ,由日本日立公
司生产;KQ5200DE型数控超声波清洗器 ,由昆山市超声仪器
有限公司生产 。
1.1.3　主要试剂。槲皮素标准品 ,由中国药品生物制品检
定所提供;甲醇(市售 ,分析纯),由北京化工厂生产;蒸馏水 ,
由实验室自制 。
1.2　方法
1.2.1　供试品溶液的制备。将干燥的黄花补血草全草粉
碎 ,精密称取 0.500 0g放入 100 ml锥形瓶中 ,加入 30 ml甲
醇 ,超声提取 1 h,过滤 ,用甲醇将滤液定容在 50 ml容量
瓶中。
1.2.2　对照品溶液的制备。精密称取干燥至恒重的槲皮素
标准品 5.0mg,用甲醇溶解 ,定容至 10 ml。
1.2.3　方法学考察。
1.2.3.1　最大吸收波长的确定。精密量取槲皮素对照品溶
液 0.2 ml,置于 10 ml容量瓶中 ,用无水甲醇定容至刻度 ,摇
匀 ,以甲醇作为空白对照 ,在 210 ～ 530 nm波长范围内进行
紫外扫描 ,确定其检测波长。
1.2.3.2　线性关系考察。精密量取槲皮素对照品溶液 1.0
ml,置于 10ml容量瓶中 ,用甲醇定容至 10ml,精密量取上述
溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml分别置于 10 ml容量瓶中 ,并
各加入甲醇定容至 10 ml,摇匀。以甲醇作为空白对照 ,在最
大吸收波长处测定吸光度。以浓度 C(mg/ml)为横坐标 ,吸
光度 A为纵坐标绘制标准曲线。
1.2.3.3　精密度试验 。精密量取对照品溶液 0.2 ml,置于
10 ml容量瓶中 ,用甲醇定容 ,在最大吸收波长处测定其吸光
度 ,重复测定 5次 ,计算相对标准偏差值(RSD)。
1.2.3.4　稳定性试验。精密称取 0.501 0 g(精确至 0.000 1
g)黄花补血草 ,按 “1.2.1”方法制成供试液。取 0.5 ml供试
液置于 10ml容量瓶中 ,用甲醇定容 ,于最大吸收波长处测其
吸光度 ,每隔 30 min测 1次 ,连续测定 6次计算 RSD值。
1.2.3.5　重复性试验。称取同一批黄花补血草细粉 5份 ,
按 “1.2.1”方法制成供试液 。各取 0.5 ml供试液置于 10 ml
容量瓶中 ,用甲醇定容 ,于最大吸收波长处测定吸光度 ,计算
样品含量及 RSD值。
1.2.3.6　加样回收率试验 。精密称取已知含量黄花补血草
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(20):10639-10640 责任编辑　刘群燕　责任校对　况玲玲
细粉 5份 ,按 “1.2.1”方法制成供试液。各取 0.1 ml置于 10
ml容量瓶中 ,加 0.1 ml的槲皮素对照品溶液 ,加甲醇稀释至
刻度 ,在最大波长处测定吸光度 ,计算其回收率及 RSD值 。
1.2.4　样品含量测定。精密称取 0.500 0 g(精确至 0.000 1
g)黄花补血草 ,按 “1.2.1”方法制备样品供试液 ,精密量取供
试品溶液 0.5 ml,用甲醇定容至 10 ml。以甲醇作为空白对
照 ,在最大波长处测定吸光度 ,代入标准曲线计算样品中总
黄酮的含量。
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　最大吸收波长的确定结果。结果表明 ,在 370 nm波
长处观察到最大吸收峰 ,从而确定测定波长为 370nm。
2.1.2　线性关系考察结果 。求得回归方程 A=33.04C+
0.052 2(r=0.999 6),表明槲皮素在 2.5 ～ 12.5 μg/ml浓度
范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.1.3　精密度试验结果。测得总黄酮含量的 RSD值为
0.57%,表明仪器的精密度良好。
2.1.4　稳定性试验结果。测得总黄酮含量的 RSD值为
0.57%,表明试验在 3 h内稳定 ,满足测定要求 。
2.1.5　重复性试验结果。结果表明 , 5次测得的平均含量为
1.57%, RSD值为 2.88%,说明该方法的重复性良好。
2.1.6　加样回收率试验结果。按样品测定的方法测定其含
量 ,计算回收率 ,结果见表 1。测得加样平均回收率为
99.46%, RSD值为 0.52%。
表 1　加样回收率实验结果
Table1　Resultsoftheadditionrecoveryexperiment
编号
No.
对照品加入量∥mg
Addedamountof
controlsamples
药材加入量∥mg
Addedamountof
medicinalmaterials
吸光度
Absorbance
测得值∥mg
Measuredquantity
回收率∥%
Recoveryrate
平均值∥%
Averagerecovery RSD∥%
1 0.050 0 0.023 2 0.293 0.072 7 99.32 99.46 0.52
2 0.050 0 0.023 2 0.291 0.072 3 98.77
3 0.050 0 0.023 4 0.294 0.073 2 99.73
4 0.050 0 0.023 1 0.294 0.073 2 100.14
5 0.050 0 0.023 1 0.292 0.072 6 99.32
2.2　样品中总黄酮含量测定结果　其结果见表 2,计算得样
品中总黄酮含量为 1.63%。
表 2　样品中总黄酮含量测定结果
Table2　Resultsofdeterminationoftotalflavonoidsinsamples
编号
No.
吸光度
Absorbance
含量∥%
Content
平均值∥%
Averagecontent RSD//%
1 0.322 1.63 1.63 0.75
2 0.323 1.64
3 0.325 1.65
4 0.320 1.62
5 0.321 1.63
3　结论
该试验首次对黄花补血草中的总黄酮含量进行了分析
测定 。研究结果表明 ,采用分光光度法测定黄花补血草中的
总黄酮含量 ,其操作简便 、快速 ,结果准确 ,对仪器要求不高 ,
为该药材的质量标准研究和进一步开发利用提供了质量保
证和科学依据 。
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10640 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2010年