全 文 ：收稿日期:2012-11-05
作者简介:刘洪蛟(1987-) ，女(汉族) ，内蒙古宁城人，硕士研究生，E-mail 1753264299@ qq． com;* 通讯作者:郭兴
杰(1956-) ，女(汉族) ，辽宁葫芦岛人，教授，博士，博士生导师，主要从事药物分析研究，Tel． 024-23986285，E-mail
gxjhyz@ yahoo． com． cn。
文章编号:1006-2858(2013)05-0356-03
HPLC法测定链荚豆根中水杨酸的含量
刘洪蛟，雷 鸣，胡艳丽，俞 嘉，郭兴杰*
(沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立测定链荚豆根中水杨酸含量的方法。方法 采用 HPLC 法。色谱柱为 Elite C18柱
(200 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-体积分数 0. 8%乙酸水溶液(体积比 25∶ 75) ，流速为 1. 0
mL·min －1。结果 水杨酸质量浓度在 2. 625 ～ 21. 00 mg·L －1内与峰面积呈良好的线性关系(r =
0. 999 6) ，平均加样回收率为 99. 4%，RSD为 2. 1%。结论 本方法专属、简便、准确、重现性好，可
用于测定链荚豆根中水杨酸的含量。
关键词:链荚豆;水杨酸;HPLC;含量测定
中图分类号:R 917 文献标志码:A
链荚豆(Alysicarpus vaginalis(L．)DC．)为豆
科蝶形花科链荚豆属，别名练荚豆、小号野花生、
山花生，在我国南方及西部各省均有分布。链荚
豆性凉，味甘、苦，具有活血化瘀、接骨消肿、清火
解毒、利胆退黄、去腐生肌的功效。用于治疗半身
不遂、筋骨酸痛、慢性肝炎、蛇咬伤、跌打损伤、疮
疡溃烂久不收口等，为我国西部地区常用药，疗效
已得到肯定并应用于临床［1 － 3］。
目前国内外未见有关链荚豆化学成分及质量
控制方法的研究报道。本课题组从链荚豆根中首
次分离得到单体化合物水杨酸(化学结构式见
图 1)。水杨酸为消毒防腐药，可用于治疗烧伤、
皮肤真菌、烫伤及皮炎等［4 － 5］。有文献报道用毛
细管电泳法测定水杨酸的含量［6 － 7］。作者首次建
立 HPLC法测定链荚豆根中水杨酸的含量，为链荚
豆的质量控制和开发利用提供了方法和参考依据。
Fig． 1 Structure of salicylic acid
图 1 水杨酸的化学结构式
1 仪器与材料
JASCO-PU-1580 高效液相色谱仪、JASCO-
MD-1515 紫外检测器(日本分光株式会社) ，数显
恒温水浴锅 HH － 2(国华电器有限公司) ，RE-52
旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
水杨酸对照品(中国药品生物制品检定所，
批号 0845-9501) ，D101 型大孔吸附树脂(沧州宝
恩化工有限公司) ，甲醇、乙腈(色谱纯，天津康科
德科技有限公司) ，冰醋酸(色谱纯，天津科密欧
化学试剂有限公司) ，重蒸水(实验室自制) ，其他
试剂(分析纯，市售)。
3 批药材样品分别采自广西南宁、广西柳州、
广西桂林，经沈阳药科大学路金才教授鉴定为链
荚豆(Alysicarpus vaginalis(L．)DC．)。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 对照溶液
精密称取水杨酸对照品约 10 mg，置于
100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
制成质量浓度为 0. 105 g·L －1的对照储备液，4 ℃
避光保存。精密量取对照储备液 2 mL，置于
10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，
0. 45 μm 微孔滤膜过滤，即得质量浓度为
21. 0 mg·L －1对照溶液。
2. 1. 2 供试溶液
取过 0. 63 mm 筛的链荚豆根粉末约 6. 0 g，
精密称定。加入体积分数 75%乙醇溶液 60 mL，
水浴加热回流提取 2 次，每次 2 h，滤过，合并续滤
液，减压浓缩至相对密度 1. 05(60 ℃)。加入浓
第 30 卷 第 5 期
2 0 1 3 年 5 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 30 No. 5
May 2013 p. 356
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2013.05.006
盐酸调 pH值为 2. 0 ～ 3. 0，用乙酸乙酯萃取 3 次，
每次 10 mL，合并乙酸乙酯层，用少量水洗乙酸乙
酯层，减压回收乙酸乙酯，浓缩至稠膏。稠膏加适
量甲醇溶解，滤过，滤液加至已预处理好的 D101
型大孔吸附树脂柱上(稠膏和树脂的质量比为
1∶ 15) ，用水洗至洗脱液无色。换用体积分数
60%乙醇溶液洗至水杨酸检测为阴性，合并洗脱
液，减压浓缩至体积少于 5 mL，转移至 10 mL 棕
色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 2 色谱条件和系统适用性试验
色谱柱:Elite C18 柱(200 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ，流动相:乙腈-体积分数 0. 8%乙酸水溶液
(体积比 25∶ 75) ，流速:1. 0 mL·min －1，检测波长:
230 nm，柱温:室温，进样量:20 μL。在上述色谱
条件下，吸取对照溶液和供试溶液各 20 μL，注入
高效液相色谱仪，色谱图见图 2。水杨酸色谱峰
与其他色谱峰达到完全分离，理论塔板数不低于
5 000。
1—Salicylic acid
Fig． 2 HPLC chromatograms of standard solution(A)
and sample solution(B)
图 2 对照溶液(A)和供试溶液(B)的高效液相色谱图
2. 3 线性关系考察
分别精密量取对照储备液 0. 25、0. 5、1. 0、
1. 5、2. 0 mL置 10 mL 棕色量瓶中，甲醇定容，摇
匀，过 0. 45 μm 微孔滤膜。按“2. 2”条色谱条件
进行测定。以峰面积(A)为纵坐标，质量浓度(ρ)
为横坐标绘制标准曲线，得水杨酸的回归方程为
A = 4. 862 × 104ρ － 7. 707 × 103，r = 0. 999 6。线性
范围为 2. 625 ～ 21. 00 mg·L －1。
2. 4 精密度试验
精密吸取对照溶液 20 μL，按“2. 2”条色谱条
件，重复进样 6 次，测得水杨酸峰面积的 RSD 为
1. 4%，表明仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验
取供试溶液，避光常温保存，按“2. 2”条色谱
条件，分别于 0、1、2、4、6、8、10、12 和 24 h 进样测
定，计算水杨酸峰面积的 RSD为 2. 9%，表明水杨
酸供试溶液配制后避光保存在 24 h内稳定。
2. 6 重复性试验
取同一产地 (广西南宁)药材粉末 (过
0. 63 mm筛)6 份，每份 6. 0 g，精密称定。按
“2. 1. 2”条方法制备供试溶液，按“2. 2”条色谱条
件测定，测得水杨酸含量的 RSD为 2. 8%，表明方
法重复性良好。
2. 7 加样回收率试验
取同一产地 (广西南宁)药材粉末 (过
0. 63 mm筛)9 份，每份 3. 0 g，精密称定。置圆底
烧瓶中，分别加入适量水杨酸对照储备液，按
“2. 1. 2”条方法制备供试溶液，按“2. 2”条色谱条
件测定，计算回收率，结果见表 1。
2. 8 供试品含量测定
取 3 批不同来源的药材，每批 3 份，按
“2. 1. 2”条方法制备供试溶液，按“2. 2”条色谱条
件测定，以外标一点法计算水杨酸含量，结果见表 2。
Table 1 Recovery results of salicylic acid in Alysicarpus vaginalis(L．)DC．
表 1 链荚豆中水杨酸的提取回收率
No． moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovey /% Average recovery /% RSD /%
1 0. 171 2 0. 084 0 0. 253 7 98. 2
2 0. 154 3 0. 084 0 0. 236 5 97. 9
3 0. 169 2 0. 084 0 0. 255 0 102. 1
4 0. 176 4 0. 168 0 0. 348 6 102. 5
5 0. 157 9 0. 168 0 0. 323 9 98. 8 99. 4 2. 1
6 0. 168 8 0. 168 0 0. 332 1 97. 2
7 0. 169 3 0. 252 0 0. 425 8 101. 8
8 0. 167 5 0. 252 0 0. 416 7 98. 9
9 0. 168 8 0. 252 0 0. 413 7 97. 2
753第 5 期 刘洪蛟等:HPLC 法测定链荚豆根中水杨酸的含量
Table 2 Contents(c)determination of salicylic acid in
Alysicarpus vaginalis(L.)DC.(n =3)
表 2 链荚豆中水杨酸的含量测定(n =3)
Origin c /(μg·g －1) RSD /%
Nanning 56 1. 6
Liuzhou 57 1. 8
Guilin 53 2. 1
3 讨论
a. 样品处理方法的选择。本实验选择浓盐
酸将供试品续滤液酸化至 pH 值 2. 0 ～ 3. 0，使水
杨酸以分子形式存在，更有利于水杨酸在乙酸乙
酯中的萃取。有文献报道采用大孔吸附树脂制备
水杨酸供试溶液［8 － 9］。在研究中，对使用和未经
大孔吸附树脂制备供试溶液进行了比较，结果表
明大孔吸附树脂对样品的纯化起到了重要作用。
未经树脂处理的样品，在水杨酸色谱峰附近有明
显的其他物质的色谱峰干扰水杨酸的测定。
b. 色谱条件的选择。水杨酸为弱酸，在水中
易发生电离，产生拖尾现象。为使有机酸尽可能
以分子形式存在，一般使用酸性流动相来抑制有
机酸的离解。试验比较了在流动相中加入不同浓
度磷酸、冰醋酸时对分离的影响。结果发现，加入
体积分数 0. 8%乙酸水溶液时可很好地抑制水杨
酸离解，得到满意峰形。
c. 检测波长的选择。实验采用水杨酸的最
大吸收波长 230 nm作为检测波长。在此波长下，
样品中其他成分的色谱峰不干扰水杨酸的测定，
而且检测灵敏度大大提高。
4 结论
采用 HPLC法测定了链荚豆根中水杨酸的含
量。水杨酸质量浓度在 2. 625 ～ 21. 00 mg·L －1内
与峰面积呈良好的线性关系(r = 0. 999 6) ，平均
加样回收率为 99. 4%，RSD 为 2. 1%。该方法专
属、简便、准确、重现性好，可用于测定链荚豆根中
水杨酸的含量。
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Determination of salicylic acid in Alysicarpus vaginalis
(L．)DC． by HPLC
LIU Hong-jiao，LEI Ming，HU Yan-li，YU Jia，GUO Xing-jie*
(School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
Abstract:Objective To develop a new method for determination of salicylic acid in Alysicarpus vaginalis
(L．)DC．Methods HPLC method was used to determine the salicylic acid． The separation was performed on
an Elite C18 column(200 mm ×4． 6 mm，5 μm)with acetonitrile-0． 8% glacial acetic acid(V ∶ V = 25∶ 75)as
the mobile phase at the flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． Results The linear ranges of salicylic acid was 2． 625-
21. 00 mg·L －1(r = 0． 999 6)． The average recovery was 99． 4% and RSD was 2． 1% ． Conclusions The
method is selective，simple，accurate and reproducible． It can be applied for determination of salicylic acid in
Alysicarpus vaginalis(L．)DC．
Key words:Alysicarpus vaginalis(L．)DC．;salicylic acid;HPLC;content determination
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