全 文 ：HPLC 法测定硬毛棘豆中山柰素的含量
内蒙古民族大学 蒙医药学院(通辽 028041)　白明纲　包晓华　吴香杰
摘　要:目的:探索建立测定硬毛棘豆中山柰素含量的方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法。应用 VP-ODS(150L×4.
6mm , 5μm)色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸水溶液(60:40)为流动相;流速为 1.0ml·min -1;检测波长为 365nm;柱温为 30℃。结果:
山柰素在 0.046μg～ 0.138μg范围内 , 与峰面积具有良好的线性关系 , r=0.9997;平均回收率为 98.49%、RSD为 3.91%(n=
6)。结论:该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 , 可用于硬毛棘豆中山柰素的含量测定。
关键词:硬毛棘豆;山柰素;HPLC
中图分类号:R291.2　文献标识码:A　文章编号:1006-6810(2008)11-0056-02
　　硬毛棘豆为豆科植物硬毛棘豆 Oxytropis hirta Bge.的干
燥全草。本品蒙古名译音为“旭润-奥日都扎” ,系常用蒙
药材 , 具有杀“黏” , 清热 , 燥“协日乌素” , 愈伤 , 生肌 , 锁脉 ,
止血 ,消肿 , 通便功能;主要用于瘟疫 , 发症 , 丹毒 , 腮腺炎 ,
阵刺痛 ,肠刺痛 , 脑刺痛 ,麻疹 , 颈强病 , 痛风 , 游痛症 , 创伤 ,
抽筋 , 鼻衄 ,月经过多 , 吐血 , 咯血等病症〔1〕。收载于《中华
人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》(1998 年版), 尚无
含量测定项目。本品含黄酮类化合物〔2〕。我们采用高效液
相色谱法〔3〕对其山柰素的含量进行了测定研究 ,为建立硬
毛棘豆的含量测定方法提供试验依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器:高效液相色谱仪:日本岛津 LC-10Atvp 二元泵 ,
SPD-M10Avp 检测器 , CLASS-VP 色谱工作站。 AUY120 电
子天平(日本岛津);KQ-100 型超声波清洗器(昆山);甲醇
为色谱纯;所用其它试剂均为分析纯。
1.2　试药:山柰素对照品 , 批号 110681-200405(供含量测
定用), 由中国药品生物制品检定所提供。
硬毛棘豆 , 为豆科植物硬毛棘豆 Oxytropis hirta Bge.的
干燥全草。三批 ,分别采自大兴安岭好森沟 、牙克石 、扎鲁
特旗罕山 ,依次为样品 1 、2、3。由内蒙古民族大学蒙医药学
院生药教研室吴香杰副教授鉴定 ,符合《中华人民共和国卫
生部药品标准·蒙药分册》(1998 年版)硬毛棘豆项下的各项
规定〔1〕。
2　方法与结果
2.1　色谱条件:色谱柱:VP-ODS(150mm×4.6mm , 5μm);流
动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(60:40);检测波长:360nm;流
速:1ml·min-1;柱温:30℃;进样量:10μl。在该色谱条件下 ,
样品中山柰素分离良好 , 理论板数(n)按山柰素计算大于
2500。见图 1。
2.2　对照品溶液的制备:精密称取山柰素对照品 9.2mg , 置
25ml量瓶中 , 加入 80%甲醇使溶解并稀释至刻度 , 摇匀;精
密吸取上液 0.25ml , 置 10ml量瓶中 , 加入 80%甲醇稀释至
刻度 ,摇匀 , 即得(每 1ml中含山柰素 9.2μg)。
2.3　供试品溶液的制备:取硬毛棘豆药材粉末(过三号筛)
约1.0g , 精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入 80%甲醇
50ml , 密塞 ,称定重量 , 加热回流 1 小时 ,放冷 ,再称定重量 ,
用 80%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 滤过。精密量取续滤液
20ml , 精密加入盐酸 4ml ,置 90℃水浴中加热水解 1 小时 , 取
出 ,迅速冷却 , 转移至 25ml量瓶中 , 用 80%甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得。
图 1　山柰素对照品(A)和硬毛棘豆样品(B)的高效液相色谱图
1.山柰素(kaempferol)
2.4　线性关系及其工作范围的考察:精密吸取山柰素对溶
液 5.0、7.5 、10.0、12.5 、15.0μl , 注入液相色谱仪 , 记录色谱
图 ,测定其峰面积(A)。并以峰面积(Y)对山柰素的进样量
(X)进行线性回归 ,得回归方程:Y=2912878X-59830 , r=0.
9997。
结果表明 , 山柰素对照品进样量在 0.046μg ～ 0.138μg
范围内 ,与峰面积具有良好的线性关系 ,相关性显著。见表 1。
表 1　不同浓度山柰素对照品的测定结果
C(μg) 0.046 0.069 0.092 0.115 0.138
A(峰面积) 74740 138002 211007 276608 340418
2.5　精密度试验:精密吸取同一份供试品溶液 10μl , 在上
56　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2008 年 11月第 11 期
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2008.11.027
述色谱条件下依法重复进样 5 次 ,记录色谱图 , 测定其峰面
积积分值。结果 RSD为 3.07%, 表明精密度良好。
2.6　稳定性试验:同一份供试品溶液 ,分别于0 、2、4、6 、8 小
时 ,精密吸取 10μl , 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 , 测定其峰
面积。结果 RSD为 1.78%, 表明供试品溶液在 8 小时内测
定稳定性良好。
2.7　重复性试验:称取同一批样品约 1.00g , 共 5 份 , 精密
称定 ,照上述 2.3项下方法制得供试品溶液 5 份 , 按含量测
定方法 ,分别精密吸取 10μl , 注入液相色谱仪 ,记录色谱图 ,
测定其峰面积 , 并计算含量。 结果平均含量为 7.85mg g ,
RSD为 2.13%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。
2.8　回收率试验:取已知含量的硬毛棘豆药材粉末(过三
号筛),约 0.5g , 精密称定 , 分别加入一定量的山柰素对照
品 ,照上述 2.3项下方法制得供试品溶液 , (见表 2), 山柰素
平均回收率为 98.49%、RSD为 3.91%。
按供试品处理方法处理后进测定峰面积 , 按下例公式
计算回收率 ,在规定色谱条件下按含量测定方法进行测定 ,
并按下列公式计算回收率。结果(见表 2),山柰素平均回收
率为 98.49 %、RSD 为3.91%。
表 2　回收率试验结果
编号 取样量(g)
样品中
含量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
1 0.5001 3.4057 1.68 5.1378 103.65
2 0.5001 3.4057 1.68 5.0092 95.45
3 0.5001 3.4057 1.68 5.0390 94.22
4 0.5001 3.4057 3.36 6.8884 103.65
5 0.5001 3.4057 3.36 6.6396 96.25
6 0.5001 3.4057 3.36 6.6066 95.26 98.49 3.91
2.9　样品测定:照高效液相色谱法(《中国药典》 2005 年版
一部附录VID)测定。精密吸取对照品溶液(每 1ml中含山
柰素 9.2μg)与供试品溶液各 10μl , 注入液相色谱仪 ,记录色
谱图 ,测定其峰面积值 , 计算山柰素(C15H10O7)含量。结果
见表 3。
表 3　硬毛棘豆中山柰素的含量
编号 n 含量(mg g) x(mg g) S(mg g) RSD(%)
1 6.960
2 6.676
1 3 6.749
4 6.917
5 6.754 6.81 0.12 1.78
1 7.708
2 8.066
2 3 7.785
4 7.694
5 7.978 7.85 0.17 2.13
1 6.853
2 7.078
3 3 7.031
4 6.925
5 7.141 7.01 0.12 1.66
3　小　结
该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 , 可用于硬毛棘豆中
山柰素的含量测定 , 为《中华人民共和国卫生部药品标准》
硬毛棘豆的质量标准的进一步完善提高提供了实验依据。
参考文献
〔1〕中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标
准(蒙药分册)〔S〕.1998.48.
〔2〕武生芳 , 罗素琴 , 刘乐乐 , 等.蒙药多叶棘豆的研究进展
〔J〕.内蒙古医学院学报 , 2007 , (4).
〔3〕国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部〔S〕.北京:
化学工业出版社 , 2005.152.
2008 年 8月 6 日收稿
Determination of kaempferolin Herba Oxytropis hirtae by HPLC
BAI Ming-gang , BAO Xiao-hua ,WU Xiang-jie
(Colleg of Mongolian Medicine and Pharmacology ,
Inner Mongolia Univrsity for the Nationalities , tongliao 028000)
Abstract:Objective:To explore the establishment of Herba Oxytropis of kaempferolin the way.Methods:HPLC.Ap-
plication VP-ODS (150L ×4.6mm , 5μm)column;methanol-0.1% phosphoric acid solution (60:40)as mobile
phase flow rate of 1.0ml·min-1;detection at365 nm;column To 30℃.Results:of quercetin in 0.046μg ～ 0.138μg
range , with the peak area has a good linear relationship , r=0.9997;verage recovery rate was98.9%.RSD to 3.91(n
=6).Conclusion:ethod is simple , fast , accurate , reproducible and can be used for Herba Oxytropis kaempferolin the-
determination.
Key words:Herba Oxytropis;kaempferolin;HPLC
572008年 11 月第 11 期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志