全 文 ：— 56 — 现代中药研究与实践2013年第27卷第4期Chin Med J Res Prac,2013 July.Vol.27 NO.4
垂盆草配方颗粒的质量标准研究
潘志文 1，莫结丽 2
（1. 佛山市食品药品检验所，广东 佛山 528000 ；2. 广东省食品药品检验所，广东 广州 510180）
摘　要：目的 建立垂盆草配方颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法对垂盆草进行定性鉴
别；采用高效液相色谱法测定垂盆草中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。结果 TLC 斑点清晰、分离度好，
阴性无干扰。槲皮素进样量在 0.015 ～ 0.300μg 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=1.000 0），平均
回收率为 96.7%，RSD 为 4.1%（n=6）；山柰素进样量在 0.005 ～ 0.100μg 范围内与峰面积积分值呈良好线
性关系（r =0.999 6），平均回收率为 97.6 %，RSD 为 3.7%（n=6）；异鼠李素进样量在 0.005 ～ 0.100μg 范
围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r =0.999 0），平均回收率为 96.4 %，RSD 为 2.1%（n=6）。结论 所
建方法简便、准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。
关键词： 垂盆草配方颗粒；槲皮素；山柰素；异鼠李素；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2013)04-0056-04
收稿日期：2013-04-08
作者简介：潘志文(1974-)，主管药师，本科，研究方向：药品质量标准
研究。Tel：0757-83338461, E-mail：panzhiwen@163.com。
Study on the Quality Standard of Sedi Herba Prescription Granules
PAN Zhi-wen1, MO Jie-li2
(1. Foshan Institute for Food and Drug Control, Foshan 528000, China; 2. Guangdong Institute for Food and Drug
Control, Guangzhou 510180, China)
Abstract: Objective To establish a quality standard for Sedi Herba prescription granules. Methods The
identifi cation of Sedi Herba was carried out by TLC. The content of quercetin and kaempferol and isorhamnetin,
was determined by HPLC. Results The TLC spots were clear with high resolution. Negative non-intrusive. The
linear range of quercetin was 0.015~0.300μg (r = 1. 000 0), the average recovery was 96.7% (RSD=4. 1%, n=6);
The linear range of kaempferol was 0.005~0.100μg (r = 0. 999 6), the average recovery was 97.6%(RSD=3.7%,
n=6); The linear range of isorhamnetin was 0.005~0.100μg (r = 0. 999 0) , the average recovery was
96.4%(RSD=2.1%, n=6). Conclusion The methods was simple and accurate with good reproducibility which
could be used for the quality control of Sedi Herba prescription granules.
Key words: Sedi Herba prescription granules; quercetin; kaempferol; isorhamnetin; TLC; HPLC
垂盆草是一味民间流传极广的常用药草，全草
入药，有清热解毒、消肿利尿、排脓生肌等的功效。
垂盆草配方颗粒是以垂盆草作为原料，经现代制药
技术提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装精制而成
的纯中药产品。为了控制该制剂质量，笔者参考《中
国药典》2010 年版 ( 一部 )“垂盆草”项下方法，采
用薄层色谱（TLC）法对垂盆草作定性鉴别，采用高
效液相色谱（HPLC）法测定槲皮素、山柰素、异鼠
李素的含量。
1　仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括 Agilent 化学
工作站（美国 Agilent 公司）；METTLER AE240 电子
分析天平（瑞士METTLER 公司）。
垂盆草对照药材（中国药品生物制品检定所，批
号：121434-200501）；槲皮素对照品、山柰素对照品、
异鼠李素对照品（中国药品生物制品检定所，批号
依次为：100081-200406、110861-200405、110860-
200406）；垂盆草配方颗粒由生产企业提供。薄层层析
硅胶Ｇ（化学纯，中国青岛海洋化工集团公司出品）；
甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2　定性鉴别
取本品粉末 1.5g，加甲醇 20mL，超声处理
30min，滤过，取滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇
2mL 溶解，作为供试品溶液。另取垂盆草对照药材
DOI:10.13728/j.1673-6427.2013.04.019
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1.5g，加甲醇 10mL，超声处理 30min，滤过，取滤液
作为对照药材溶液。照 TLC 试验，吸取上述两种溶
液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-
乙酸乙酯（40 ∶ 1）为展开剂，展开，取出，晾干，
喷以 5%磷钼酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色
清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置
上，显相同的灰蓝色斑点。TLC 见图 1。
图 1 垂盆草 TLC图谱
1～ 3. 供试品；4. 垂盆草对照药材
Fig. 1 TLC graph of Sedi Herba
1-3.sample; 4.Sedi Herba
3　含量测定
3.1　色谱条件
色 谱 柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（45∶ 55）；流速：
1.0 mL·min-1 ；检测波长：360nm ；柱温：20℃；进
样量：10μL。
3.2　溶液的制备
3.2.1　供试品溶液的制备　　取装量差异项下的本
品，研细，取约 0.25g，精密称定，精密加入甲醇 -25%
盐酸溶液（4 ∶ 1）混合溶液 25mL，称定重量，加
热回流 1h，放冷，再称定重量，用甲醇 -25% 盐酸
溶液（4∶ 1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，
取续滤液，即得。
3.2.2　混合对照品溶液的制备　　取槲皮素对照
品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，
加甲醇分别制成每 1mL 各含 15μg、5μg、5μg 的
混合溶液，即得。
3.2.3　阴性对照溶液的制备　　以制备供试品溶液
的溶剂作为阴性对照溶液。
3.3　空白试验
取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶
液，按上述色谱条件进行测定。结果，阴性对照溶液
在槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品色谱峰相应的位
置上无干扰峰。色谱见图 2。
图 2 高效液相色谱图
A. 对照品（1. 槲皮素；2. 山柰素；3. 异鼠李素）；B. 供试品；C. 阴性对照
Fig. 2 HPLC chromatograms
A. reference substance(1.quercetin, 2.kaempferol, 3.isorhamnetin); B.
sample; C. negative control
3.4 　线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液 1、2、5、10、15、20
μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
分别以槲皮素、山柰素和异鼠李素的进样量（X）为
横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性
回归，得回归方程分别为 Y( 槲皮素 )=4024.3 X( 槲皮
素 )-1.991 0（r=1.000 0）、Y( 山柰素 )=3 846.2X( 山柰
素 )+0.927 8（r=0.999 6）、Y( 异鼠李素 )=3 596.9 X( 异
鼠李素 )+3.339 7（r=0.9990）。结果表明，槲皮素、山
柰素和异鼠李素的进样量分别在 0.015 ～ 0.300μg、
0.005 ～ 0.100μg、0.005 ～ 0.100μg 范围内与峰面积
积分值呈良好线性关系。
3.5 　精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，重复进样 6
次，按上述色谱条件测定。结果，槲皮素、山柰素和
异鼠李素峰面积的RSD 分别为 0.1%、0.6% 和 0.8%（n
均为 6），表明仪器精密度良好。
3.6　重复性试验
精密称取同一批 ( 批号：1006181S) 供试品 6份，
按“3.2.1”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱
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条件测定，记录峰面积；另精密吸取混合对照品溶液
10μL，同法测定，按外标法以峰面积计算槲皮素、
山柰素和异鼠李素的含量。结果，槲皮素、山柰素和
异鼠李素测定结果的RSD 分别为 1.7%、1.8% 和 2.0%
（n 均为 6），表明方法重复性良好。
3.7　 稳定性试验
精密吸取供试品溶液，分别在 0、1、2、3、4、
5 h，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
结果，槲皮素、山柰素和异鼠李素峰面积的RSD 分
别为 2.7%、1.9% 和 1.6%（n 均为 6），表明供试品溶
液在 5 h 内稳定。
3.8　加样回收率试验
取已知含量的供试品（批号：1006181S，测得含
量为槲皮素 0.953 0mg·g-1、山柰素 0.195 9 mg·g-1、
异鼠李素 0.203 3 mg·g-1）6 份，各约 0.125 g，精密
称定，分别精密加入混合对照品溶液（含槲皮素 0.023
955mg·mL-1、山柰素 0.005 250 mg·mL-1、异鼠李
素 0.005 185 mg·mL-1）5mL，甲醇 15 mL，25% 盐
酸 5 mL，按“3.2.1”项下的方法制备供试品溶液，
按上述色谱条件测定，记录峰面积，另精密吸取混合
对照品溶液 10μL，同法测定，按外标法以峰面积计
算回收率。结果分别见表 1、表 2和表 3。
表 1 槲皮素回收率试验结果（n=6）
Tab. 1 Results of quercetin recovery test (n=6)
槲皮素含量
/mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
平均回收率
/% RSD/%
0.1198 0.1198 0.2303 92.24
96.66 4.1
0.1230 0.1198 0.2427 99.92
0.1219 0.1198 0.2370 96.08
0.1209 0.1198 0.2428 101.75
0.1205 0.1198 0.2310 92.24
0.1192 0.1198 0.2363 97.75
表 2 山柰素回收率试验结果（n=6）
Tab. 2 Results of kaempferol recovery test (n=6)
山柰素含量
/mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
平均回收率
/% RSD/%
0.0246 0.0262 0.0497 95.80
97.58 3.7
0.0253 0.0262 0.0523 103.05
0.0251 0.0262 0.0508 98.09
0.0249 0.0262 0.0506 98.09
0.0248 0.0262 0.0489 91.98
0.0245 0.0262 0.0503 98.47
表 3 异鼠李素回收率试验结果（n=6）
Tab. 3 Results of isorhamnetin recovery test (n=6)
异鼠李素含
量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
平均回收率
/% RSD/%
0.0256 0.0259 0.0499 93.82
96.40 2.1
0.0262 0.0259 0.0516 98.07
0.0260 0.0259 0.0511 96.91
0.0258 0.0259 0.0511 97.68
0.0257 0.0259 0.0500 93.82
0.0254 0.0259 0.0508 98.07
3.9 　样品含量测定
取 3批样品，按“3.2.1”项下的方法制备供试品
溶液，按上述色谱条件测定，记录峰面积，另精密吸
取对照品溶液 10μL，同法测定，按外标法以峰面积
计算样品中槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量。结果
见表 4。
表 4 样品含量测定结果（n=2）
Tab. 4 　Content determination results of samples ( n=2)
批号 槲皮素含量 /(mg/g)
山柰素含量 /
(mg/g)
异鼠李素含量
/(mg/g) 总量 /(mg/g)
1006181S 0.9515 0.1963 0.2052 1.3530
1006241S 1.3636 0.1261 0.2454 1.7351
1006281S 1.0590 0.4365 0.1538 1.6493
3.10　色谱柱耐用性试验
精密量取供试品溶液 10μL，分别用以下填料
的色谱柱进行测定，流速 1.0 mL·min-1、检测波长
360nm，待测的三个成分与其相邻峰的分离度均能达
到要求的柱温和流动相比例。见表 5。
表 5 色谱柱耐用性试验
Tab .5 　Column selectivity experiment
色谱柱型号、规格 柱温 流动相比例 采集时间
Hypersil ODS2( 5μm, 4.6×250mm) 20℃ 甲醇 -0.4% 磷酸溶液（45 ∶ 55） 60min
Hypersil ODS2( 5μm, 4.6200mm) 15℃ 甲醇 -0.4% 磷酸溶液（45 ∶ 55） 55min
Hypersil BDS C18( 5μm, 4.6250mm) 10℃ 甲醇 -0.4% 磷酸溶液（40 ∶ 60） 75min
Kromasil ODS-1 ( 5μm, 4.6200mm) 10℃ 甲醇 -0.4% 磷酸溶液（45 ∶ 55） 140min
4　讨论
4.1　TLC鉴别参照了《中国药典》2010年版 (一部 )“垂
盆草”鉴别项 [1] 的方法，操作简便，特征斑点简单、
明显、易辨。
4.2　含量测定项供试品溶液色谱图中，槲皮素前
的色谱峰跟槲皮素峰挨得很近，在用 Hypersil ODS2
（5μm 4.6×250mm）色谱柱，柱温 30℃的条件下，
通过调整流动相比例，无法达到 1.5 的分离度要求。
后通过降低柱温，发现此干扰成分在柱温 20℃时即
能达到与待测成分基线分离。从色谱柱耐用性试验结
果得出，Hypersil ODS2 填料的色谱柱是考察过的三
种填料中最适合用来分析垂盆草配方颗粒供试样的
色谱柱，另外两种填料的色谱柱分析时间过长，不建
议使用。
4.3　 《中国药典》2010 年版 ( 一部 ) 收载有“垂盆草
颗粒” [2] 这一品种，其含量测定是以芦丁为对照品，
照紫外 -可见分光光度法，以 510nm 为测定波长，
分别测定系列浓度对照品溶液和供试品溶液的吸光
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表 1 样品回收率试验结果
Tab.1 Results of recovery test
　加入比例 　加入量 　测得量 　 回收率 　 平均回收率 　 RSD
（%） (mg) (mg) (%) (%) (%)
　　 　80 　　 160.1　 160.7　 100.4
　　 　80 158.9 159.2 100.2
　　 　80 159.7 159.6 99.9
　　　100 200.3 199.8 99.8
　　　100 200.9 200.4 99.8 100.1 0.3
　　　100 199.7 200.1 100.2
　　　120 239.3 239.7 100.2
　　　120 239.6 240.9 100.5
　　　120 238.7 239.5 100.3
2.3.5　稳定性实验　　精密吸取同一批（111008）按
“2．2．2”项下方法制备的样品溶液，分别在 0，4，8，
12，16，20，24 h 测定峰面积值的变化，结果峰面积
RSD 为 0.5％ (n=7)。结果表明样品溶液在 24h 内基本
稳定。
2.4　样品测定　　取 3批样品，分别按 “2.2.2”的制
备方法操作，取“2.2.1”下的溶液与“2.2.2”项下样
品溶液各 2OμL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按
外标法以峰面积计算含量，并与《中国药典》[2] 规定
的紫外分光光度法 (UV 法 ) 测定的结果比较。结果表
明两种方法测定的溶出度基本一致。结果见表 2。
表 2 样品测定结果比较
Tab.2 Comparison of determination results
样品批号 　　　　 HPLC 法 　　　　 UV 法
　　　 42110603 　　　 　 92.9 　　　　 93.8
　　　 42110603 　　　　 　 93.1 　　　　　 93.3
　　　 42110603 　　　　　 92.7　　　　　 93.2
　　　 111008 　　　　 　 90.5 　　　　　 91.3
　　　 111008 　　　　　 91.1 　　　　　 91.7
　　　 111008 　　　　　 90.7 　　　　　 91.2
　　　 111215 　　　　 　 90.9 　　　　　 91.8
　　　 111215 　　　　　 90.1 　　　 90.9
　　　 111215 　　　　　 90.4 　　　 　 91.5
3　讨论
3.1　药物的溶出是评价药品质量及生产制备工艺的
重要质控项目 [3]，能全面、科学的评价不同企业生产
的同药品在体内的溶出行为是否一致。通常药品生产
企业应使用溶出度这一关键的质量控制技术对药品
生产工艺进行控制。在制药工业中，溶出度技术更能
反映药品的未来发展方向 [4]。
3.2　本文建立了高效液相色谱法测定肌苷片溶出度
的方法，并进行了方法学的考察，同时对三家药厂的
肌苷片的溶出度用高效液相色谱法与《中国药典》规
定的检验方法进行比较，结果一致。本法操作简便、
专属性高，重现性好。
3.3　本文采用的高效液相色谱法直接测定肌苷片的
溶出度，可与肌苷片的含量测定在同一色谱条件下同
时测定，操作简单易行，无需另配对照品，从而减少
了资源的浪费，省时省力，且肌苷片线性关系良好，
适应的浓度范围宽，提高了溶出度测定结果的精度与
准确度，与《中国药典》紫外分光光度法测定的结果
无明显差异，可用于肌苷片的溶出度测定。
参考文献
[1]　陈新谦，金有豫 主编 ．新编药物学（第 13 版）[M]．．北京：人民卫
生出版社，1994 ：350—350．
[2]　国家药典委员会 ．《中国药典》（二部）[S]．北京：中国医药科技出版社，
2010，277．
[3]　HANSON R，GRAY V．溶出度实验技术 [M]．宁保明，张启明，译 . 北
京 ：中国医药科技出版社 ，2007 ：129．
[4]　张梅君，王志强，黄学荪，等．固体制剂溶出度的研究进展[J]．中国药业，
2009，18(8) ：58—60．
度，计算出每袋含总黄酮以芦丁计的含量。本法则参
照了“垂盆草” [1] 含量测定项下的方法，以水解后得
到的槲皮素、山柰素和异鼠李素为指标性成份，通过
高效液相色谱法测得三个成份的总量来控制成品的
质量，比紫外法更具专属性，操作也更简单。
4.4　供试品溶液仅在 5 h 内稳定，在测多批样品时需
注意这一点，可对样品先后进行处理，避免同时处理
造成后进样的样品含量测定值偏低。
参考文献
[1]　国家药典委员会 . 中国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，
2010 ：198.
[2]　国家药典委员会 . 中国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，
2010 ：820.
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