全 文 ：［收稿日期］ 20110410(003)
［基金项目］ 辽宁省教育厅项目(2009A496) ;辽宁中医药大学
青年药学人才基金课题(YXRC0920)
［第一作者］ 李慧，在读硕士研究生，从事药用植物种质资源与
品质评价研究
［通讯作者］ * 王冰，教授，博士研究生导师，从事药用植物资
源与鉴定研究，Tel:0411-87586004，yzbwang @
lnutcm． edu． cn
HPLC测定地锦草中没食子酸、槲皮素及山柰素含量
李慧，许亮，徐保利，管慧洁，何华，王冰 *
(辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:建立同时测定地锦草药材中槲皮素、山柰素和没食子酸含量的高效液相色谱法。方法:采用 Agilent TC-
C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)柱分离，以甲醇和 0. 4%磷酸水溶液进行梯度洗脱，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·min
－ 1。结果:没食子
酸在 0. 051 8 ～ 0. 621 6 μg 线性关系良好，平均回收率在 102. 17% (RSD 2. 83%) ，槲皮素在 0. 070 2 ～ 0. 702 0 μg 线性关系良
好，平均回收率在 97. 80% (RSD 2. 42%) ，山柰素在 0. 020 4 ～ 0. 408 0 μg 线性关系良好，平均回收率在 98. 02% (RSD
2. 72%)。结论:操作简便，准确度高，重复性好，可作为地锦草质量控制方法之一。
［关键词］ 地锦草;高效液相色谱法;没食子酸;槲皮素;山柰素
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)07-0100-03
Determination of Gallic Acid，Quercetin and Kaempferol in
Euphorbia humifusa Herba by HPLC
LI Hui，XU Liang，XU Bao-li，GUAN Hui-jie，HE Hua，WANG Bing*
(Liaoning University of Chinese Traditional Medicine，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To develop a HPLC method for determining quercetin，kaempferol and gallic acid
in Euphorbia humifusa herba． Method:The analysis was performed on a column Agilent TC-C18 (4. 6 mm × 150
mm，5 μm) ，the solvent system composed of methanol-0. 4% phosphoric． The column temperature was at 30 ℃，
the flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ． Result:Quercetin，kaempferol and gallic acid were linear in the range of
0. 070 2-0. 702 0，0. 020 4-0. 408 0，0. 051 8-0. 621 6 μg． The average recovery of quercetin，kaempferol and
gallic acid was 97. 80% (RSD 2. 42%) ，98. 02% (RSD 2. 728%) ，102. 17% (RSD 2. 83%)． Conclusion:
The method is quick，simple，and reproducible，which can be used to control the quality of Euphorbia humifusae
herb．
［Key words］ Euphorbia Humifusa herba;HPLC;gallic acid;quercetin;kaempferol
地锦草为大戟科植物地锦或斑地锦的干燥全
草，具有清热解毒、凉血止血、利湿退黄的功效，常用
于治疗痢疾、肠炎、咳血、便血、崩漏、疮疥痈肿，湿热
黄疸等［1］。地锦草主要含有黄酮类、没食子酸、鞣
质类化学成分，其鲜汁、水煎剂、醇提液均有抗菌作
用。临床常用中药，也是一种维吾尔药材和蒙药材，
在《中国药典》、《中华人民共和国卫生部药品标准
维吾尔药材分册》和《内蒙古药材标准》均有记
载［2］。其中没食子酸具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等
生物学活性，槲皮素、山柰素等黄酮类化合物是地锦
草抗菌、止血、抗氧化的主要有效成分。本实验建立
高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸、槲皮素、山
柰素的含量的方法，目的是为了更好的控制地锦草
药材的质量，保证该临床用药安全有效。
1 仪器和试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪，VWD 检测器
(G1314A) ，四元泵(G1311A) (美国 Agilent 公司) ，
电子天平(瑞士 Mettler Toledo AG285，AE240)。
·001·
第 18 卷第 7 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 7
Apr．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.07.041
没食子酸、槲皮素、山柰素(贵州迪大生物工程
有限公司，纯度均 ＞ 98%)。甲醇为分析纯和色谱
纯，重蒸馏水，盐酸、磷酸为分析纯。
地锦草为 2009 年 10 月采于辽宁省大连市双 D
港，经辽宁中医药大学药学院王冰教授鉴定为大戟
科植物地锦 Euphorbia humifusa Willd． 或斑地锦 E．
maculata L．的干燥全草。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性 Agilent TC-C18色谱
柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，甲醇(A)-0. 4%磷酸
水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0 ～ 13 min) ，2% A;
13 ～ 14 min，2% ～ 52% A; (14 ～ 30 min，52% A) ，
流速 1. 0 mL·min － 1;柱温 30 ℃;检测波长为梯度波
长(0 ～ 12. 5 min，270 nm，12. 5 ～ 30. 0 min，360
nm)。理论塔板数按槲皮素、山柰素和没食子酸计
算均不低于 20 000。
1. 没食子酸;2. 槲皮素;3. 山柰素;A．对照品;B． 药材样品
图 1 地锦草 HPLC 色谱
2. 2 对照品溶液的制备 分别取没食子酸、槲皮素
和山柰素对照品，精密称定，加甲醇并稀释到刻度，
摇匀，制成质量浓度分别为 0. 518，0. 702，0. 408 g·
L － 1的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 称取本品粉末(过 60 目
筛)约 3. 0 g，精密称定，置 250 mL 圆底烧瓶中，精密
加入 80%甲醇 100 mL，称定质量，加热回流 1. 5 h，
放冷，再称定质量，用 80%甲醇补足减失的质量，摇
匀，滤过，精密量取续滤液 40 mL，精密加入 25%盐
酸溶液 14 mL，置 85 ℃水浴中水解 30 min，取出，迅
速冷却，转移至 100 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 4 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液 1，
2，4，6，8，10 μL，按 2. 1 项的色谱条件分别进样，没
食子酸、槲皮素、山柰素的线性方程为 Y = 2 830. 3
X + 2. 357 1(r = 0. 999 8) ;Y = 2 997. 3X － 22. 906
(r = 0. 999 8) ;Y = 3 260. 8X － 27. 26(r = 0. 999 9) ，
分别在 0. 051 8 ～ 0. 621 6，0. 070 2 ～ 0. 702 0，
0. 020 4 ～ 0. 408 0 μg 线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液，
连续进样 6 次，记录峰面积，结果没食子酸、槲皮素
和 山 柰 素 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1. 96%，
2. 09%，2. 84%。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在 0，
2，4，6，8，12 h 进样，记录峰面积，结果没食子酸、槲
皮素和山柰素峰面积的 RSD 分别为 1. 96%，
2. 86%，1. 41%。表明供试品溶液在 0 ～ 12 h 内稳
定性良好。
2. 7 重复性试验 取同批药材 6 份，精密称定，按
2. 3 项下供试品溶液制备方法制备并测定，RSD
2. 17%，2. 85%，1. 50%。表明本试验重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量地锦草粉末 6
份，每份约 1. 5 g，精密称定，添加混合对照品适量，
按 2. 3 项下供试品溶液制备方法制备并测定，计算，
没食子酸、槲皮素、山柰素的平均回收率分别为
102. 17%，RSD 2. 83% (n = 6) ，97. 80%，RSD
2. 42%(n = 6) ，98. 02%，RSD 2. 72%(n = 6)。见表
1 ～ 3。
2. 9 样品测定 按上述色谱条件测定，并计算没食
子酸、槲皮素和山柰素的含量。见表 4。
表 1 没食子酸加样回收率
No． 取样量 / g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 1. 500 2 2. 863 2. 642 5. 507 92. 70
2 1. 500 4 2. 869 2. 642 5. 484 94. 77
3 1. 499 7 2. 868 2. 642 5. 505 99. 81
102. 17 2. 83
4 1. 500 5 2. 870 2. 642 5. 615 103. 90
5 1. 509 0 2. 886 2. 642 5. 699 106. 48
6 1. 505 2 2. 903 2. 642 5. 677 105. 02
·101·
李慧，等:HPLC 测定地锦草中没食子酸、槲皮素及山柰素含量
表 2 槲皮素加样回收率
No． 取样量 / g 样品中含槲皮素量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 1. 500 2 2. 961 3. 851 6. 560 93. 47
2 1. 500 4 2. 967 3. 851 6. 729 97. 70
3 1. 499 7 2. 966 3. 851 6. 709 97. 20
97． 80 2． 424 1. 500 5 2. 967 3. 851 6. 778 98. 95
5 1. 509 0 2. 984 3. 851 6. 827 99. 81
6 1. 505 2 3. 000 3. 851 6. 838 99. 68
表 3 山柰素加样回收率
No． 取样量 样品中含山柰素含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 1． 500 2 0． 779 2． 168 2． 893 97． 53
2 1． 500 4 0． 781 2． 168 2． 851 95． 52
3 1． 499 7 0． 780 2． 168 2． 857 95． 82
98. 02 2. 724 1． 500 5 0． 781 2． 168 2． 875 96． 63
5 1． 509 0 0． 785 2． 168 2． 967 100． 69
6 1． 505 2 0． 785 2． 168 2． 994 101． 91
表 4 地锦草药材中 3 种成分测定(n = 2) mg·g － 1
No． 种名 拉丁学名 没食子酸含量 槲皮素含量 山奈素含量
1 斑地锦 Euphorbia maculata L． 1. 47 1. 76 0. 75
2 斑地锦 Euphorbia maculata L． 1. 39 1. 66 1. 10
3 斑地锦 Euphorbia maculata L． 1. 91 2. 39 0. 55
4 斑地锦 Euphorbia maculata L． 2. 23 3. 17 0. 87
5 斑地锦 Euphorbia maculata L． 2. 35 2. 29 0. 65
6 斑地锦 Euphorbia maculata L． 1. 26 0. 61 0. 20
7 斑地锦 Euphorbia maculata L． 2. 66 3. 09 1. 57
8 斑地锦 Euphorbia maculata L． 1. 35 2. 31 0. 54
9 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 2. 88 1. 75 1. 31
10 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 09 0. 60 0. 17
11 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 50 2. 58 0. 40
12 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 2. 11 1. 52 1. 20
13 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 3. 06 2. 66 0. 90
14 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 91 1. 35 1. 35
15 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 92 2. 04 1. 43
16 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 87 2. 30 0. 64
17 地锦 Euphorbia humifusa Willd． 1. 06 0. 97 0. 11
3 讨论
地锦草中酚酸类化合物大多以糖苷的形式存
在，主要为槲皮素及苷、山柰素及苷等［3-5］。直接测
定地锦草药材中没食子酸、槲皮素、山柰素的含量，
发现其含量很低，直接测定可能难以准确反映其中
黄酮的实际含量，因此本实验采取酸水解后测定其
没食子酸、槲皮素和山柰素的含量，获得较为满意的
效果。
对于水解条件的选择，采用的 2010 年版《中国
药典》的水解条件，盐酸浓度不宜过高，酸性太强对
进样阀和色谱柱的腐蚀作用较大。色谱条件考察
时，发现流动相的 pH 对色谱峰的峰形及分离度影
响很大，比较甲醇-不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂
系统，确定流动相为甲醇-0. 4%磷酸梯度洗脱，得到
的色谱峰峰形尖锐，分离度高，且基线较稳定。
本实验利用高效液相色谱法测定没食子酸、槲
皮素、山柰素的含量尚属首次，该方法简便、准确、重
复性好，为地锦草药材提供了多指标质量控制依据。
［参考文献］
［1］ 中国药典 ．一部［S］． 2010:337．
［2］ 买买提江·阿布都瓦克，龚千锋 ． 地锦草的研究概况
［J］．江西中医学院学报，2008，20(4) :78．
［3］ 褚小兰，范崔生 ． 地锦类中草药的化学成分和药理研
究概况［J］．中国野生植物资源，1998，17(2) :18．
［4］ 邢俊波，水彩虹，刘云 ． 高效液相色谱法测定地锦草中
槲皮素和含量［J］．中国中药杂志，2002，27(10) :758．
［5］ 雷鹏，刘韶，李新中，等 ． HPLC 测定地锦草中槲皮素、
山柰素的含量［J］．中药材，2005，28(8) :666．
［责任编辑 蔡仲德］
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第 18 卷第 7 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 7
Apr．，2012