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RP-HPLC法测定垂盆草药材中槲皮素 、山柰素和异鼠李素的含量
胡玥 ,李启艳＊
(山东大学威海分校海洋学院 ,威海 264209)
摘要　目的:建立 RP-HPLC法测定垂盆草药材中槲皮素 、山柰素和异鼠李素的含量。方法:采用 ThermoBDSC
18
(4.6 mm×
150mm, 5 μm)色谱柱 ,以甲醇 -0.4%磷酸(45∶55)为流动相;检测波长为 360 nm。结果:槲皮素 、山柰素和异鼠李素分别在
0.09558 ～ 0.6690μg, 0.01974 ～ 0.1382 μg和 0.0206 ～ 0.1442 μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系 , r分别为 0.9999,
0.9998, 0.9999;平均回收率分别为 98.22%, 96.44%, 96.50%。结论:该法简便可行 , 结果准确可靠 , 适用于垂盆草药材的质
量控制。
关键词:RP-HPLC;垂盆草;槲皮素;山柰素;异鼠李素
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)03-0504-04
RP-HPLCdeterminationofouercetin, kaempferide
andisorhamnetininHerbaSedi
HUYue, LIQi-yan＊
(MarineColege, ShandongUniversityatweihai, Weihai264209, China)
Abstract　Objective:ToestablishaRP-HPLCmethodfordeterminationofouercetin, kaempferideandisorhamne-
tininHerbasedi.Methods:ThermoBDS, C18 column(250mm×4.6mm, 5μm)wasadopted;Themobilephaseconsis-
tedofmethanol-0.4% phosphoricacid(45∶55), thedetectionwavelengthwas360nm.Results:Thecalibration
curvesofquercetin, kaempferideandisorhamnetinwereseparatelylinearintherangeof0.09558 -0.66906 μg,
0.01974-0.13818μg, 0.0206-0.1442μgwithcorrelationcoeficient0.9999, 0.9998and0.9999.Theaveragere-
coverywere98.22%, 96.44%and96.50%.Conclusion:Themethodissimple, rapidandreliable.Itcanbeusedas
quantitativedeterminationforqualitycontrolofHerbaSedi.
Keywords:RP-HPLC;HerbaSedi;quercetin;kaempferide;isorhamnetin
垂盆草 SedumsarmentosumBunge又称卧茎景
天 ,为景天科植物垂盆草的新鲜或干燥全草 。具有清
热解毒 、利尿消肿 、排脓生肌之功效;临床用于治疗湿
热黄疸 、小便不利 、痈肿疮疡 、急慢性肝炎等疾病。
目前 ,从垂盆草中分离并鉴定的化合物主要为黄
酮及垂盆草苷 、三萜 、甾醇 、生物碱 、氰苷 、氨基酸 、糖
类等 。文献[ 1]多报道垂盆草苷为垂盆草的主要活性
成分 ,具有明显保肝作用 ,但是研究表明垂盆草苷不
稳定 ,受热或遇碱易分解 ,贮藏过程中也可酶解 ,以其
为指标[ 2]来评价垂盆草质量很难保证方法的重现性
和稳定性。由于垂盆草中富含黄酮类化合物[ 3] ,且黄
酮类成分化学性质较为稳定 、药理作用明确 ,因此为
了更好的控制垂盆草质量 ,保证垂盆草药用疗效 ,本
试验以槲皮素 、山柰素和异鼠李素为指标 ,对垂盆草
的质量控制方法进行了研究 ,建立了含量测定方法 ,
从而为垂盆草及其提取物的质量评价提供一种方法。
1 仪器与试药
岛津 UV-2550紫外分光光度计 , MetlerAE240
电子天平 , Agilent1200高效液相色谱仪 。槲皮素对
照品 , 供含量测定用 , 批号为 100081 -200406 ,
HPLC含量测定按 97.3%计;山柰素对照品 ,供含
量测定用 ,批号为 0861 -200002;异鼠李素对照
品 ,均为中国药品生物制品检定所提供 ,供含量测
定用 ,批号为 110860 -200406。药材经山东省药
—504— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(3)
＊ 通讯作者 Tel:13553181376;E-mail:huyue0902@yahoo.com.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.03.024
品检验所徐丽华主任药师鉴定为景天科植物垂盆草
SedumsarmentosumBunge的新鲜或干燥全草;甲醇 、
乙腈为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:ThermoBDS, C18色谱柱(4.6 mm×150
mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸(45∶55),流
速 1mL·min-1;柱温:35 ℃;检测波长:360nm。理
论板数按槲皮素峰计算应不低于 3000。采用此色
谱条件 ,供试品及对照品色谱分离度良好 ,见图 1。
图 1　槲皮素 、山柰素和异鼠李素对照品(a)供试品(b)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(a)sample(b)
1槲皮素(ouercetin)　2山柰素(kaempferide)　3异鼠李素(isorham-
netin)
2.2 线性关系考察
对照品溶液的制备 　精密称取槲皮素对照品
15.93 mg、山柰素对照品 9.87 mg、异鼠李素对照品
10.30 mg,分别置 100 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,分别精密量取上述槲皮素对照品溶
液 15mL、山柰素和异鼠李素对照品溶液各 5mL,置
同一 100mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为
对照品溶液 。
精密吸取上述对照品溶液 (槲皮素浓度为:
23.895 μg· mL-1 ,山柰素浓度为 4.935 μg·mL-1 ,
异鼠李素浓度为 5.15 μg· mL-1)4, 8, 12, 16, 20,
24 , 28 μL注入液相色谱仪 ,记录色谱峰面积 。以对
照品的进样量(μg)为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐
标 ,进行线性回归 ,得槲皮素 、山柰素 、异鼠李素回归
方程分别为:
Y=3703.2052X+4.3398 r=0.9999;
Y=4023.5180X-0.7639 r=0.9998;
Y=3893.7164X-0.7651 r=0.9999
结果表明槲皮素 、山柰素和异鼠李素进样量分
别在 0.09558 ～ 0.6690 μg, 0.01974 ～ 0.1382 μg和
0.0206 ～ 0.1442 μg范围内呈良好线性关系 。
2.3 精密度实验 分别精密吸取上述对照液 10
μL,注入液相色谱仪 ,连续进样 5次 ,按上述测定方
法进行测定 , 结果槲皮素 、山柰素和异鼠李素的
RSD分别为 0.27%, 048%, 0.81%,表明仪器精密
度良好。
2.4 稳定性试验　取本品粉末(过二号筛)0.5 g,
按样品测定项下供试品溶液的制备方法制得供试品
溶液 。按上述测定方法 ,于 0, 2, 4, 6, 8 h分别精密
吸取供试品溶液 10 μL进样测定 ,记录槲皮素 、山柰
素和异鼠李素的峰面积积分值 ,结果 RSD分别为
0.27%, 0.80%, 0.70%,表明供试品溶液在 8 h内
稳定性良好 ,能够满足测定需要。
2.5 重复性试验　取本品细粉 5份 ,精密称定 ,按
样品测定项下供试品溶液的制备方法分别制得供试
品溶液。按上述测定方法进行测定 ,记录槲皮素 、山
柰素和异鼠李素的峰面积积分值 ,结果槲皮素 、山柰
素 、异鼠李素的含量分别为 0.118%(n=5 RSD=
0.61%), 0.026%(n=5RSD=1.07%), 0.031%(n
=5 RSD=0.83%),表明本品含量测定方法的重复
性良好。
2.6 回收率试验
2.6.1 对照品储备液的制备
槲皮素:精密称取槲皮素对照品 15.55 mg,加
甲醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液稀释至 100 mL,摇
匀 ,即得(浓度为 0.1555mg· mL-1)。
山柰素:精密称取山柰素对照品 10.85mg,加甲
醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液稀释至 100 mL,摇匀 ,
精密量取 6 mL,加甲醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液稀
释至 10mL,摇匀 ,即得(浓度为 0.0651mg·mL-1)。
异鼠李素:称取异鼠李素对照品 9.34 mg,加甲
醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液稀释至 50 mL,摇匀 ,精
密量取 5mL,加甲醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液稀释
至 25mL,摇匀 ,即得(浓度为 0.03736mg·mL-1)。
2.6.2 回收率测定 精密称取已测知含量的样品
5份 ,分别精密加入槲皮素对照品储备液 2mL、山柰
素对照品储备液 1 mL和异鼠李素对照品储备液
—505—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(3)
2 mL,再精密加甲醇 -25%盐酸(4∶1)混合溶液
20 mL,按样品测定项下的供试品溶液的制备方法 ,
制得供试品溶液。照上述测定方法进行测定 ,计算
回收率 ,结果见表 1 ～ 3。
表 1 槲皮素加样回收率试验结果
Tab1 Resultsoftherecoveryforouercetin
编号
(No.)
取样量
(sample)
/g
样品中含量
(samplecontent)
/mg
加入量
(added)
/mg
测得量
(found)
/mg
回收率
(recoveries)
/%
平均回收率
(averagerecovery)
/%
RSD/%
1 0.2513 0.3418 0.3026 0.6434 99.68
2 0.2531 0.3442 0.3026 0.6436 98.94
3 0.2534 0.3446 0.3026 0.6462 99.66
4 0.2533 0.3445 0.3026 0.6398 97.59
5 0.2541 0.3456 0.3026 0.6397 97.20
6 0.2548 0.3465 0.3026 0.6377 96.22
98.22 1.18
表 2　山柰素加样回收率试验结果
Tab2　Resultsoftherecoveryforkaempferide
编号
(No.)
取样量
(sample)
/g
样品中含量
(samplecontent)
/mg
加入量
(added)
/mg
测得量
(found)
/mg
回收率
(recoveries)
/%
平均回收率
(averagerecovery)
/%
RSD/%
1 0.2513 0.0905 0.0651 0.1525 95.29
2 0.2531 0.0911 0.0651 0.1534 95.67
3 0.2534 0.0912 0.0651 0.1538 96.12
4 0.2533 0.0912 0.0651 0.1536 95.87
5 0.2541 0.0915 0.0651 0.1547 97.12
6 0.2548 0.0917 0.0651 0.1559 98.57
96.44 0.72
表 3　异鼠李素加样回收率试验结果
Tab3　Resultsoftherecoveryforisorhamnetin
编号
(No.)
取样量
(sample)
/g
样品中含量
(samplecontent)
/mg
加入量
(added)
/mg
测得量
(found)
/mg
回收率
(recoveries)
/%
平均回收率
(averagerecovery)
/%
RSD/%
1 0.2513 0.0980 0.0747 0.1694 95.57
2 0.2531 0.0987 0.0747 0.1703 95.84
3 0.2534 0.0988 0.0747 0.1708 96.35
4 0.2533 0.0988 0.0747 0.1699 95.20
5 0.2541 0.0991 0.0747 0.1713 96.65
6 0.2548 0.0994 0.0747 0.1736 99.37
96.50 0.62
试验结果表明 ,该测定方法的回收率良好 。
2.7　样品测定
取本品粉末(过二号筛)约 0.5 g,精密称定 ,精
密加入甲醇 -25%盐酸溶液(4∶1)混合液 25 mL,称
定重量 ,加热回流 60min,放冷 ,再称定重量 ,用甲醇
-25%盐酸溶液(4∶1)混合液补足减失的重量 ,摇
匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 10 μL进样测定 ,即得。
样品测定结果见表 4。
—506— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(3)
表 4 样品测定结果
Tab4 Determinationresults
编号
(No.) 产地(productarea)
含量(contents)/%(n=2)
槲皮素
(ouercetin)
山柰素
(kaempferide)
异鼠李素
(isorhamnetin)
总含量
(total)%
1 山东(Shandong) 0.128 0.023 0.029 0.180
2 山东(Shandong) 0.121 0.027 0.026 0.174
3 江西(Jiangxi) 0.133 0.025 0.027 0.185
4 江西(Jiangxi) 0.145 0.029 0.033 0.207
5 湖北(Hubei) 0.161 0.030 0.035 0.226
6 湖北(Hubei) 0.139 0.028 0.031 0.198
7 湖北(Hubei) 0.105 0.021 0.025 0.151
8 安徽(Anhui) 0.137 0.031 0.029 0.197
9 安徽(Anhui) 0.106 0.021 0.018 0.145
10 河南(Henan) 0.133 0.027 0.029 0.189
3 讨论
3.1 最大吸收波长的考察　分别取槲皮素 、山柰
素 、异鼠李素对照品溶液 ,在 190到 400 nm期间进
行扫描 ,结果槲皮素在 204, 256, 372 nm处有吸收
峰;山柰素在 199, 266 , 324, 366 nm处有吸收峰;异
鼠李素在 230, 254 , 307, 370 nm处有吸收峰 。根据
各成分的吸收情况 , 选择三成分都有较大吸收的
360nm作为检测波长 。
3.2 水解条件的考察 比较了甲醇 -10%盐酸溶
液(4∶1),甲醇 -25%盐酸溶液(4∶1)及甲醇 -30%
盐酸溶液(4∶1)3种水解溶剂 ,结果表明以甲醇 -
25%盐酸溶液(4∶1)混合液作为水解溶剂时 ,所得
样品含量最高 ,故确定采用甲醇 -25%盐酸溶液(4
∶1)混合液作为水解溶剂 。同时 ,还进一步比较了
不同的水解时间(回流 30, 45, 60, 90 min)对提取效
果的影响 ,结果显示 60 min即水解完全。
3.3 小结　本文采用高效液相色谱法测定垂盆草
药材中槲皮素 、山柰素和异鼠李素的含量 , 方法简
便 、专属 、测定结果准确 ,且重复性好 ,可用于垂盆草
药材的质量控制。
参考文献
1 WEITai-ming(魏太明), YANYu-ning(阎玉凝), GUANXin
-lu(关昕璐), etal.Analysisofchemicalconstituentsofthe
groundpartofsedumsarmentosum(垂盆草的化学成分研究).J
BeijingUnivTCM(北京中医药大学学报), 2003, 26(4):59
2 PANJIN-huo(潘金火), LUOLan(罗兰), HEMan-tang(何满
堂), etal.Studyonqualitycontrolmethodforsedumsarmentosum
bunge(垂盆草药材质量控制方法研究).JChengduUnivTCM
(成都中医药大学学报), 2002, 25(1):44
3 HEAi-min(何爱民), WANGShi-ming(王明时).Flavonoids
fromstringystonecrop(sedumsarmentosum)(垂盆草中的黄酮类
成分).ChinTraditHerbDrugs(中草药), 1997, 28(9):517
(本文于 2010年 1月 27日修改回)
—507—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(3)