全 文 ：— 69 —现代中药研究与实践2013年第27卷第6期Chin Med J Res Prac,2013 Nov.Vol.27 No.6
HPLC法测定杠板归中槲皮素和山柰素的含量
陈　建，朱彩芳， 蔡　芳， 殷黎霞， 莫晶昉， 郦红岩*
（ 江苏吉贝尔药业有限公司 ， 江苏 镇江 212009）
摘　要：目的　建立杠板归中槲皮素和山柰素含量的HPLC测定方法。方法　色谱柱：Kromasil C18(5
μm，250×4.6mm) ；流动相：甲醇 -0.4% 磷酸溶液（60 ：40）；检测波长：360nm，柱温：30℃。结果　槲
皮素和山柰素的回收率分别为 99.6%、100.8% ；线性范围分别为 0.158 9~3.178μg、0.006 99~0.279 6μg。结
论结果准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。
关键词： 杠板归；槲皮素 ；山柰素；含量测定；HPLC
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2013)06-0069-02
Determination of Quercetin and Kaempferol in Polygonum perfoliatum L. by HPLC
CHEN Jian, ZHU Cai-fang, CAI Fang , YIN Li-xia, MO Jin-fang, LI Hong-yan﹡
(Jiangsu Jibrier Pharm Co.，Ltd.,Zhenjiang 212009,China)
Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol
in Polygonum perfoliatum L.Methods HPLC was used to quantitative analysis. The Kromasil C18
column(5μm,250×4.6mm) was used,and mobile phase was composed of methanol-0.4%H3PO4/Water（60:40）.
Detection wavelength was at 360 nm at 30℃. Results The quercetin and kaempferol’s average recovery were
99.6% and 100.8%,respectively. Linear range of methods was 0.158 9~3.178μg and 0.006 99~0.279 6μg,
respectively.Conclusion The result is accurate and the reproducibility is good. The method can be used for quality
control of Polygonum perfoliatum L.
Key words: Polygonum perfoliatum L.; quercetin;kaempferol ; determination; HPLC
收稿日期：2013-06-03
作者简介： 陈建，主要从事新药制剂及质量标准研究。
*通讯作者：郦红岩，主要从事新药制剂及质量标准研究。Tel：0511-
88888404，E-mail：blacker2000@126.com
杠板归为蓼科植物杠板归 Polygonum perfoliatum
L. 的干燥地上部分，具有清热解毒，利水消肿，止
咳之功效。用于咽喉肿痛，肺热咳嗽，小儿顿咳等 [1]。
现代研究表明，杠板归中含有黄酮类、苦木素类、蒽
醌类等成分 [2] 。《中国药典》（2010 版）中对其所含
的槲皮素进行了质量控制，本文参考相关文献 [3~5]，
对其所含的槲皮素和山柰素进行了含量测定，以对杠
板归的质量控制作为参考。
1　仪器与试药
岛 津 LC-10A 高 效 液 相 色 谱 仪，LC-10ATVP
泵，SPD-10AVP 可见紫外检测器 ；浙大智达 N2000
双通道色谱工作站 ；Satorius CP225D 电子天平 ；
BRANSON SB3200 超声波清洗器；HH 恒温水浴锅（金
坛中大仪器厂）。
槲皮素、山柰素对照品（中国药品生物制品检定
所，批号分别为 100081-200907、110861-200808，
供含量测定用），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其
余试剂均为分析纯。
杠板归药材购自江苏宏康医药有限公司，经江苏
大学欧阳臻教授鉴定为杠板归。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
Kromasil C18 柱 (4.6mm×250mm,5μm); 流动相 ：甲
醇 -0.4% 磷酸溶液（60：40）；流速：1.0mL/min；柱温：
30℃ ；检测波长 ：360nm ；进样 20μL。理论板数按
槲皮素峰计算应不低于 2 500。
2.2　对照品溶液与供试品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品和山柰素对照品适量，加
80% 甲醇制成每 1mL 含 40μg 和 2μg 的对照品混合
溶液，即得。取本品粉末约 2.0g，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加 80% 甲醇 50mL，密塞，称定重量，
加热回流 1h，放冷，再称定重量，用 80% 甲醇补足
减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25mL，
DOI:10.13728/j.1673-6427.2013.06.026
— 70 — 现代中药研究与实践2013年第27卷第6期Chin Med J Res Prac,2013 Nov.Vol.27 No.6
精密加入盐酸 5mL，摇匀，置 90℃水浴中加热回流
1h, 取出，迅速冷却 , 转移至 50mL 量瓶中 , 用 80%
甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3　线性关系的考察
精密吸取不同浓度的对照品溶液注入液相色谱
仪，以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积值为
纵坐标（Y），进行线性回归绘制标准曲线，计算得
回归方程，槲皮素Y=218.15X － 0.540 8, r=0.999 9 ；山
柰素Y=220.28X ＋ 0.081 , r=0.999 8。结果表明槲皮
素在 0.158 9~3.178μg、山柰素在 0.006 99~0.2796μg
范围内呈良好的线性关系。
2.4　进样精密度试验
精密吸取同一浓度对照品溶液，依法测定，连续
进样 5 次，测定峰面积，其精密度良好，槲皮素、山
柰素的RSD 分别为为 1.66%、0.85%。
A. 对照品溶液
B. 供试品溶液
图 1 HPLC 图
Fig.1 HPLC chromatograms
2.5　供试液稳定性试验
取同一样品供试液，分别在 0、2、4、6、8h 测
定槲皮素和山柰素峰面积，其RSD 分别为 1.73%、
1.62%，表明样品在 8h 内具有良好的稳定性。
2.6　重复性试验
取同一批样品分别精密称取 5 份，依法处理，测
定，结果样品中槲皮素和山柰素的平均含量分别为
1.733、0.043mg/g，RSD 分别为 1.76％、1.59%。
2.7　回收率测定
精密称取已知含量的样品 6 份约 1.0g，分别加入
槲皮素、山柰素对照品溶液，依法处理，得供试品溶
液。依法测定，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果 (n=6)
Tab. 1 Results of recovery test(n=6)
成分 序号 取样量(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
（mg）
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
（%）
槲皮素
1 1.0021 1.7366 1.3747 3.1218 100.8
99.6 1.17
2 1.0082 1.7472 1.3747 3.0917 97.8
3 1.0018 1.7361 1.7184 3.4345 98.8
4 1.0032 1.7385 1.7184 3.4657 100.5
5 1.0024 1.7372 2.0621 3.8079 100.4
6 1.0047 1.7411 2.0621 3.7917 99.4
山柰素
1 1.0085 0.0434 0.0343 0.0787 102.9
100.8 1.61
2 1.0012 0.0430 0.0343 0.0779 101.7
3 1.0038 0.0432 0.0429 0.0856 98.8
4 1.0047 0.0432 0.0429 0.0865 100.9
5 1.0036 0.0432 0.0515 0.0953 101.6
6 1.0029 0.0431 0.0515 0.941 99.0
2.8　样品测定
分别精密称取不同批次的杠板归样品，按供试品
溶液制备方法制备，依法测定，结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
Tab. 2 Content determination results of samples
批 次 1 2 3
槲皮素（mg/g） 1.733 1.754 1.742
山柰素（mg/g） 0.043 0.051 0.049
3　讨论
3.1　选择甲醇 -0.4% 磷酸溶液体系，改变流动相的
比例，通过试验摸索，在甲醇 -0.4% 磷酸溶液比例
在 60 ：40 时，能使目标主峰能够实现较好的分离，
且其他成分对测定无干扰。
3.2　在研究过程中分别进行了不同浓度的甲醇提
取、不同提取方法（加热回流、超声提取）和不同提
取时间（0.5、1、1.5h）的比较，最后确定以 80% 甲
醇回流 1h。
3.3　经本法测定，杠板归药材中的山柰素含量较少，
与文献报道一致。
参考文献
[1]　国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社,2010：
155.
[2]　张荣林，孙晓翠，李文欣，等 杠板归化学成分的分离与鉴定 [J]. 沈阳
药科大学学报，2008,25（2）：105-107
[3]　杨燕飞 . HPLC 测定金胆片中山柰素和槲皮素的含量 [J]. 中成
药 ,2005,27(11),1263-1265
[4]　雷鹏 , 刘韶 , 李新中 , 等 .HPLC 测定地锦草中槲皮素、山柰素的含量 [J].
中药材 ,2005,28(8),666-667
[5]　郑瑁 , 孙兰香 , 王紫秋 , 等 . 油菜花粉中槲皮素和山柰素总含量的 HPLC
法测定 [J]. 中国新药杂志 ,2005,14(5),592-594