全 文 ：收稿日期:2008-04-10　　　修回日期:2008-06-20
基金项目:北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室主任基金(CRE-B-2008104)
＊通讯联系人:魏　芸 , 女 ,教授 , 博士生导师 , 研究方向:天然药物的分离分析.
第 25卷第 2期
Vol.25　No.2 分 析 科 学 学 报JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE 2009 年 4 月Apr. 2009
文章编号:1006-6144(2009)02-0223-03
高速逆流色谱法对独角莲中有效成分皂苷的分离纯化
李　昂 , 魏　芸＊
(北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室 ,北京 100029)
摘　要:本文采用高速逆流色谱法对独角莲中的有效成分皂苷进行分离纯化 。分别以
乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5(V/V)及乙酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水=5∶10∶2∶20
(V/V)为溶剂系统 ,用下相作流动相 ,上相作固定相 ,分别采用2 mL/min及 1.5 mL/
min 的流动相流速 、800 r/min的转速对独角莲中的有效成分皂苷进行分离 ,得到纯度
98%的胡萝卜苷 6 mg 。
关键词:高速逆流色谱;分离纯化;独角莲;胡萝卜苷
中图分类号:O657.7+2　　　文献标识码:A
独角莲(Typhonium giganteum Engl)为天南星科(Araceae)犁头尖属(Typhonium Schot t)植物 ,是
中国特有植物 ,多生于华北地区。目前独角莲外敷及内服已广泛用于治疗脑血管疾病 、偏头痛 、面神经麻
痹 、结核病等 ,收载于我国药典中[ 1-3] ,作为独角莲皂苷的有效成分胡萝卜苷(苍耳苷)对体外培养的成骨
样细胞有显著的促增殖作用[ 4] ,并且对氧化低密度脂蛋白损伤人微血管内皮细胞有防治作用 ,具有潜在的
应用前景[ 5] 。
本文采用高速逆流色谱(HSCCC)法对独角莲中的有效成分皂苷进行分离纯化 ,方法简便快捷 ,可推
广应用。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
LC-20A 高效液相色谱仪系统(日本 ,岛津公司),附 LC-20A 高效液相色谱仪 , SPD-M20A 二极管阵
列检测器 ,CBA-20A 系统控制器 , SIL-20A 自动进样器 , 7725型手动进样器 , Class-VP-LC 工作站 , 2 个
LC-20A T 溶剂输送泵 。GS/OA多层螺旋管行星式离心分离仪;8823-UV 紫外检测仪;S-1007型数控往
复塞计量泵(北京新技术应用研究所);YOKGAWAO57 型记录仪(四川仪表厂);进样器(天津高科技公
司)。
乙酸乙酯 ,正丁醇 ,乙醇 ,乙腈(分析纯 ,北京化工厂)。
1.2　药材及其前处理
独角莲由辽宁葫芦岛市购得。称取独角莲 100 g 磨成细粉 ,加入 80%的乙醇 800 mL ,回流提取三次 ,
每次 2 h ,合并滤液浓缩至浸膏 ,备用。
1.3　高速逆流色谱溶剂的选择
1.3.1　溶剂系统　参考文献[ 6 , 7] 中常用分离皂苷化合物的各种溶剂体系 ,选择溶剂系统 1:乙酸乙酯∶正
丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5(V/V);溶剂系统 2:乙酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水=5∶10∶2∶20(V/V)。
1.3.2　分配系数的测定　从每个溶剂系统中各取 1 mL 上下相溶剂置于试管中 ,加入适量独角莲粗提
物 ,震荡混匀 ,静置分层后 ,分别取等量的上下相进样于液相色谱 ,运用液相色谱法计算胡萝卜苷的 K 值 。
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第 2 期 李　昂等:高速逆流色谱法对独角莲中有效成分皂苷的分离纯化 第 25 卷
分配系数 K =cs/cm ,其中 cs 指溶质在固定相中浓度 , cm 指溶质在流动相中浓度 。K 值的最佳范围在
0.5 ～ 2之间。
1.3.3　固定相保留率的测定　固定相的保留率:ρ=(V -V 。)/V ×100% ,式中 V 表示管路总体积;V 。
表示管路中上下相平衡时流出的固定相体积 。
2　结果与讨论
2.1　样品的鉴定和纯度检查
2.1.1　胡萝卜苷组分的鉴定　通过与胡萝卜苷标准核磁氢谱及质谱的比对确定为胡萝卜苷 。
2.1.2　胡萝卜苷的纯度检查　采用 HPLC法测定其纯度。所用色谱条件如下:色谱柱:250×4.6 mm ×
5μm , ODS;进样量:10 μL ;流速:0.5 mL/min;流动相:甲醇∶水(10∶90 ,V/V);柱温 30℃,214 nm 波长检
测。
2.2　高速逆流色谱条件
溶剂系统 1和溶剂系统 2的分配系数 K 均在最佳范围内 ,二者的固定相保留率分别为 36%和 32%。
溶剂系统 1:乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5为溶剂系统 ,用下相作流动相 ,上相作固定相 ,称取独角
莲粗提物 200 mg 溶于 10 mL 下相中进样 ,采用 800 rpm的转速和 2 mL/min的流动相流速 ,214 nm 进行
检测 。结果如图 1。溶剂系统 2:乙酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水=5∶10∶2∶20 为溶剂系统 ,用下相作流动相 ,
上相作固定相 ,独角莲粗提物 200 mg 溶于 10 mL 下相中进样 ,采用 800 r/min的转速和 1.5 mL/min 的
流动相流速 ,214 nm 进行检测 ,结果如图 2。
图 1　高速逆流色谱图及液相谱图
Fig.1　HSCCC and HPLC chromatogram of the
daucosterol of Typhonium giganteum Engl
　　　　　图 2　高速逆流色谱图及液相谱图
Fig.2　HSCCC and HPLC chromatogram of the
daucosterol of Typhonium giganteum Engl
2.3　分离皂苷的逆流体系的选择
作为分离皂苷的逆流体系乙酸乙酯 ,正丁醇 ,水加入不同的调节溶剂可以得到不同的结果 。由图 1 、
图 2可以看出 ,随着乙醇的加入 ,各单体的 K 值被拉开 ,得到比加入乙腈效果更好的逆流图。但加入乙醇
后 ,体系的固定相保留值变得更差 ,导致胡萝卜苷的纯度由 98%变为 86%,因此 ,对于独角莲中胡萝卜苷
的分离 ,乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5溶剂系统是更好的选择 。
3　结论
目前胡萝卜苷的分离主要采用柱色谱法 ,需经多次重结晶才能得到少量的胡萝卜苷样品[ 2] 。而采用
乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5为溶剂系统的高速逆流色谱法 ,可使分离纯化一步完成 ,效率高 ,实
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第 2 期 分 析 科 学 学 报 第 25 卷
现对独角莲中胡萝卜苷的一步分离 。该法简便快捷 ,值得推广应用。
参考文献:
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Preparative Isolation of Saponin from Typhonium giganteum
Engl by High-speed Counter-current Chromatography
LI Ang , WEI Yun＊
(S tate Key Laboratory of Chem ical Resource E ngineering , Bei j ing University of Chemical
Technology , Bei j ing 100029)
Abstract:High-speed counter-current chromatog raphy w as successful ly used fo r isolat ion and
purification o f saponin f rom Ty phonium giganteum Eng l.Ethy l acetate-n-butanol-ethano l-water(5∶10∶
2∶20 , V/V)and ethy l acetate-n-butanol-ace tonit ri le-water (5∶1∶1∶5 , V/V)we re employed as solvent
sy stem .The results showed that the suitable so lvent sy stem is ethy l acetate-n-butanol- acetoni trile-
water (5∶1∶1∶5 , V/V)by which a yield o f 6 mg dauco sterol w ith the puri ty over 98% dete rm ined by
HPLC could be obtained.
Keywords:HSCCC;Isolation and purif ication;Typhonium giganteum Engl;Daucostero l
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