全 文 ：山 东 农 业 科 学 2016，48(6):92 ～ 94 Shandong Agricultural Sciences
DOI:10． 14083 / j． issn． 1001 － 4942． 2016． 06． 023
收稿日期:2016 －02 －28
基金项目:山东省“泰山学者”建设工程专项;青岛农业大学高层次人才科研基金项目(631217) ;应用型人才培养特色名校建设工程
大学生科技创新项目
作者简介:迟梦宇(1993 －) ，女，在读硕士研究生，研究方向为分子植物病理学。
钱恒伟(1991 －) ，男，在读硕士研究生，研究方向为分子植物病理学。
* 同为第一作者。
＊＊ 通讯作者:黄金光(1973 －) ，男，博士，教授，研究方向为植物病害防控、分子植物病理学。E － mail:jghuang@ qau． edu． cn
青岛地区鹅掌柴炭疽病病原菌鉴定
迟梦宇1* ，钱恒伟1* ，赵颖1，黄金光1，2＊＊
(1．青岛农业大学农学与植物保护学院，山东 青岛 266109;
2． 山东省植物病虫害综合防控重点实验室，山东 青岛 266109)
摘 要:2015 年鹅掌柴炭疽病在青岛地区发病严重，发病率达 50%。本研究从青岛城阳区采集鹅掌柴炭
疽病病叶，采用组织分离法对病原菌进行分离，结合形态学观察与分子生物学方法对其进行鉴定。结果表明，
引起青岛地区鹅掌柴炭疽病的病原菌是胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides (Penz．)Sacc．)。此病原菌
引起的鹅掌柴炭疽病在山东省是首次报道。
关键词:鹅掌柴炭疽病菌;胶孢炭疽菌;形态特征;分子鉴定
中图分类号:S436． 8 + 1 文献标识号:A 文章编号:1001 －4942(2016)06 －0092 －03
Identification of Anthracnose Pathogen of
Schefflera actinophylla in Qingdao
Chi Mengyu1* ，Qian Hengwei1* ，Zhao Ying1，Huang Jinguang1，2＊＊
(1． College of Agronomy and Plant Protection，Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109，China;
2． Key Lab of Integrated Crop Disease and Pest Management of Shandong Province，Qingdao 266109，China )
Abstract The anthracnose of Schefflera actinophylla (Endl．)occurred seriously in Qingdao area in
2015 with the incidence up to 50% ． The S． actinophylla leaves infected by anthracnose were collected from
Chengyang District of Qingdao． The pathogen was isolated using tissue isolation method and identified by mor-
phological observation and molecular methods． The results showed that according to its morphological charac-
teristics and rDNA － ITS sequence analysis，the anthracnose of S． actinophylla was caused by Colletotrichum
gloeosporioides (Penz．)Sacc．，which was firstly reported in Shandong Province．
Key words Anthracnose pathogen of Schefflera actinophylla;Colletotrichum gloeosporioides;Morpholog-
ical characteristic;Molecular identification
鹅 掌 柴 (Schefflera actinophylla ［Endl．］
Harms)俗名大叶伞，隶属五加科，鹅掌柴属，是一
种深受人们喜爱的常绿观叶木本花卉植物，可用
于花园、花坛、道路绿化或者作为盆栽置于庭院和
室内观赏。鹅掌柴原产于大洋洲、我国广东、福建
等亚热带雨林，日本、越南、印度也有分布，现广泛
种植于世界各地。但是，鹅掌柴在繁殖和栽培种
植时常会发生病害，大大影响其观赏价值。对鹅
掌柴的病原真菌，美国记载了 15 种［1］。在我国，
2003 年，习平根等［2］调查鉴定了广东省鹅掌柴 12
种真菌病害及其病原菌，其中以叶疫病和炭疽病
危害较重。2012 年，黄江华等［3］对广东省鹅掌柴
炭疽病病原菌进行鉴定。2015 年，鹅掌柴炭疽病
在青岛地区发病严重，发病率高达 50%。为有效
防控鹅掌柴炭疽病，笔者用病原形态学及分子生
物学方法研究青岛市鹅掌柴炭疽病病原菌，为该
病的综合治理提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料与试剂
1． 1． 1 供试材料 2015 年 11 月采集青岛城阳
地区的鹅掌柴炭疽病病叶，并对其进行分离纯化。
1． 1． 2 试剂 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):
马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g、蒸馏水
1 000 mL;75%乙醇(化学纯);0． 1%升汞溶液;无
菌水。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 病原菌的分离纯化与培养 采用组织分
离法对鹅掌柴病叶上的病原菌进行分离。于病健
交界处切取病组织长度为 4 ～ 5 mm 的小块，置于
75%乙醇中浸泡 5 s，接着移入 0． 1%升汞溶液中
浸泡 3 ～ 5 min，无菌水漂洗 3 遍，最后将病组织移
到 PDA培养基上，置于 25℃培养箱中培养 3 ～ 7
d［4］。
从边缘挑取病原菌菌丝于 PDA 培养基上，
25℃培养箱中进行纯培养，4 d 后挑取纯培养菌
丝至斜面保存。
1． 2． 2 致病性接种及再分离 挑取 3 片健康鹅
掌柴叶片，用无菌水清洗叶片表面并用酒精消毒。
用灭菌针将叶片刺伤，再接种病原菌块，将接好菌
的叶片放在盛有湿润滤纸的培养皿中，25℃培养
7 d后观察发病情况，以无菌 PDA 接种作为阴性
对照。从接种的发病组织上再次分离纯化病原
菌。
1． 2． 3 病原菌形态观察 用 1 mL无菌水反复冲
洗 PDA上的分生孢子以获得浓度为 104 个 /mL的
孢子悬浮液，用灭菌接种针挑取少量菌丝置于灭
菌载玻片上，用挑针挑取培养基内部的菌核放在
滴有无菌水的载玻片上，在 Olympus BX53 显微镜
下观察病原菌的菌核、菌丝、分生孢子梗和分生孢
子特征并拍摄形态图，测量分生孢子大小。
1． 2． 4 病原菌 rDNA － ITS 序列测定 采用
CTAB法提取病原菌基因组 DNA［5］，用真菌通用
引物 ITS1 和 ITS4 进行 PCＲ 扩增［6］(ITS1:5 －
TCCGTAGGTGAACCTGCGG － 3;ITS4:5 － TC-
CTCCGCTTATTGATATGC － 3)。PCＲ 反应体系
为 25 μL，反应液为:10 × Buffer 2． 5 μL，dNTP 1
μL，引物(ITS1 和 ITS4)各 1 μL，Taq 酶 0． 5 μL，
DNA模板 3 μL，ddH2O 16 μL。PCＲ 扩增程序:
94℃预变性 5 min ;94℃变性 45 s，53℃退火 45 s，
72℃延伸 1 min，进行 30 个循环;72℃总延伸 10
min。在质量浓度为 1% 的琼脂糖凝胶上检测
PCＲ结果，产物送生工生物工程(上海)股份有限
公司测序，并进行 BLAST同源性对比。
2 结果与分析
2． 1 鹅掌柴炭疽病症状
发病初期，病斑从枝干中间向上向下发展，沿
着叶脉侵染叶片，病斑近椭圆形，灰白色，形状规
则至不规则形。在环境阴湿的情况下病斑不断扩
展成水泽状墨绿色病块，发病严重的植株整条枝
干和叶片均成墨绿色，枝干横切后内部也都变成
墨绿色至黑褐色。后期病斑上可见黑色小点，为
病原菌的分生孢子盘，湿度大时病部可产生大量
的粉红色粘孢团(图 1)。
图 1 鹅掌柴炭疽病症状
2． 2 病原菌形态观察
在 PDA培养基上，鹅掌柴炭疽病病原菌菌落
白色至灰白色，边缘整齐，气生菌丝发达，后期产
生菌核可长至培养基内。病原菌分生孢子梗无
色，具隔膜;分生孢子无色，单孢，长椭圆形至圆柱
形，较直，大小为(13． 3 ～ 18． 4)μm ×(3． 8 ～ 5． 6)
μm(图 2)。根据形态结果初步判定病原菌为胶
孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。
2． 3 rDNA － ITS序列分析
应用真菌 18S ～ 28S rDNA 间隔区序列的通
用引物 ITS1 和 ITS4，从病原菌基因组 DNA 中
PCＲ扩增到一条约 500 bp 的片段(图 3)。测序
结果表明，该片段长 547 bp(登录号:KU820630)，
39第 6 期 迟梦宇，等:青岛地区鹅掌柴炭疽病病原菌鉴定
将其在 GenBank中进行同源比较分析，BLAST 比
对结果表明，该菌株的 rDNA － ITS 序列与已报道
的 C． gloeosporioides 菌株(KT582155、KT582183)
的序列相似性为 99%。分子鉴定进一步证实该
病原菌为 Colletotrichum gloeosporioides。
A、B:菌落;C、D:菌核;E:分生孢子;F:分生孢子与分生孢子梗
图 2 鹅掌柴炭疽病病原菌图
M:DL 2000;1:分离菌株扩增片段
图 3 rDNA － ITS序列的 PCＲ扩增结果
3 讨论与结论
鹅掌柴炭疽病是危害鹅掌柴的主要病害之
一，在美国、中国广东省都有过报道。近年来，随
着国内外花卉贸易的发展，青岛市从广东、云南等
省市引种大量鹅掌柴。鹅掌柴炭疽病在青岛地区
发病也日渐严重，影响了鹅掌柴的观赏价值，严重
的引起植株死亡，造成较大经济损失。为有效防
控鹅掌柴炭疽病，本研究对其病原菌进行了形态
学和分子生物学鉴定，证实青岛鹅掌柴炭疽病病
原菌为胶孢炭疽菌(C． gloeosporioides)，对该地区
鹅掌柴炭疽病的防治具有重要意义。该病原菌是
炭疽属内最大的一个种群，其分布非常广泛，在海
南、台湾、广东、广西、湖北、福建、山东等地均有分
布，危害寄主近 300 种，可引起芒果、香蕉、葡萄、
龙眼、万年青、七叶树等多种植物的炭疽病。炭疽
病菌在潮湿环境下发病重，所以在福建、广东、海
南等地区鹅掌柴炭疽病发病较重。
参 考 文 献:
［1］ Farr D F，Bills G F，Chamuris G P，et al． Fungi on plants and
plant products in the United States［M］． Minnesota:APS
Press，1989:44．
［2］ 习平根，戚佩坤，姜子德． 鹅掌柴真菌病害鉴定［J］． 植物
病理学报，2003，33(1):19 － 24．
［3］ 黄江华，叶宜丽． 鹅掌柴炭疽病病原菌鉴定［J］． 广东农业
科学，2012(16):69．
［4］ 代丽婷，刘东，张艳菊．黑龙江省冬小麦雪腐病病原鉴定及
生物学特性研究［J］．植物保护，2013，39(1):44 － 49．
［5］ 刘少华，陆金萍，朱瑞良，等．一种快速简便的植物病原真菌
基因组 DNA 提取方法［J］． 植物病理学报，2005，35(4):
362 － 365．
［6］ 郭鹏豪，刘秀丽，崔颖鹏，等．真菌通用引物 Its1 和 Its4 在丝
状真菌鉴定中的价值评价［J］．中国微生态学杂志，2013，
25(8):922 － 924．
49 山 东 农 业 科 学 第 48 卷