全 文 ：第 29卷第 6期
Vol.29 No.6 南华大学学报·医学版Journal of Nanhua University(Medical Edition) 2001年12月Dec.2001　
金粉蕨素急性毒性实验
黄红林1 ,朱炳阳1 , 郑　兴1 , 戴洁玉2 , 范庆全2 , 廖端芳1
(1.南华大学 基础医学院 药理教研室 ,湖南 衡阳 421001;2.南华大学 96级学生科协成员)
摘　要:目的　观察金粉蕨素(Onychin)的毒性 ,为评价其毒性等级以及拟定临床安全剂量提供依据。
方法　采用急性毒性实验方法 ,以一次大剂量给小白鼠灌胃金粉蕨素 ,连续观察小鼠行为活动等指标和毒性
反应程度 ,并在实验结束时处死小白鼠进行剖检 ,以获得金粉蕨素初步毒性资料。结果　实验连续观察 14
d ,小鼠无明显行为异常 ,也未出现死亡 ,求不出 LD50 。结论　本实验设定的最高剂量 640 mg/kg及其以下剂
量对小白鼠均无明显毒性作用 ,提示在临床和药理实验上应用金粉蕨素是安全的。
关键词:金粉蕨素;　急性毒性;　小白鼠
中图分类号:R965.3　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-2510(2001)06-0539-03
The　Acute　Toxicity　Test　of　Onychin
HUANG Hong-lin , ZHU Bing-yang , ZHENG Xing , et al
(Department of Pharmacology , Basic Medical College of Nanhua University , Hengyang , Hunan 421001 , China)
Abstract　　Aim :To obtain the original toxic materials and evaluate the toxic grade and decide clinical safe dose ,
we observed the response and extension of the acute toxicity that the big dose Onychin induced the mouse.Methods:Sixty
mature healthy mice were randomly divided into 6 groups.After Onychin was administered by pouring it into stomach for
14 days , a series of indexes:symptom , sign , diet , excrement and weight of the mice were observed.All mice were put
to death at the end of experiment and abnormalities were examined.Result:Onychin with the biggest dose(640 mg/kg)
and below the dose had no obvious toxic response to the mouse.Conclusion:Onychin is safe in clinical application and
pharmacology study test.
Key words　onychin;　acute toxicity;　mouse
　　金粉蕨素(Onychin)是从湖南永州采集的中国
蕨科(Sinopterideceae)金粉蕨属(Onychium Ching)栗
柄金粉蕨(Onychium lucidum)植物中提取 、分离 、纯
化得到的一种二氢黄酮甙类化合物 。美国国家癌症
研究中心(NCI)研究发现金粉蕨素对P388淋巴细胞
性白血病有显著细胞毒性[ 1] 。我室初步研究发现金
粉蕨素能促进血管内皮细胞 (VEC)释放和合成一
氧化氮(NO),且抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖;
对溶血性磷脂酰胆碱损伤血管内皮依赖的舒张功能
具有保护作用;采用溴代苯致小鼠实验性肝损伤模
型 ,观察到金粉蕨可降低肝匀浆 TBARs含量 ,具抗
脂质过氧化作用;提示金粉蕨素在防治心脑血管硬
化性疾病和 PTCA术后再狭窄方面具有一定意义。
本实验通过一次给予小白鼠大剂量金粉蕨素 ,观察
小白鼠毒性反应 ,以初步了解金粉蕨素的毒性 ,评价
其毒性等级 ,为精确测定金粉蕨素 LD50值和研究其
长期毒性提供实验基础 ,并为拟定临床用药安全剂
量提供依据 。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂　金粉蕨素 ,自湖南永州采集得到
栗柄金粉蕨植物 ,粉碎后用工业酒精冷浸再减压回
收得到浸膏。用双蒸水溶解静置后依次用石油醚 、
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:国家卫生部课题(981345),湖南省科委重点课题(98SSY1001)和湖南省教育厅课题(98B099)
乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯萃取液减压回收所得稠
状物置于硅胶柱中层析 ,用 CHCl3-MeOH 进行梯度
洗脱 ,得一白色粉末 ,与金粉蕨素标准品(由昆明植
物研究所许云龙教授提供)对照检测 ,确证为金粉蕨
素 ,纯度 >98%。使用时用 20%的二甲基亚砜
(dimethyl sulfoxide ,DMSO)溶解 。
MDSO 、石油醚 、乙酸乙酯 、氯仿 、甲醇等试剂均
为市售分析纯试剂。
1.2　实验方法[ 2]
根据文献[ 3]及预实验结果估计金粉蕨素的半
数致死量 LD50为 160mg/kg ,以此为中间剂量 ,按1∶2
的比例 ,设计 5个剂量组 ,如表 1。
表 1 　金粉蕨素急性毒性实验剂量设计表
组别 鼠数 剂量(mg/kg)
浓度
(mg/ kg)
给药体积
(mL/只)
1 10 640 16.0 0.8
2 10 320 8.0 0.8
3 10 160 4.0 0.8
4 10 80 2.0 0.8
5 10 40 1.0 0.8
选取昆明种小鼠 100只(南华大学实验动物部
提供),体重17 ～ 24 g ,雌雄不拘。用普通饲料饲养 3
d ,供给充足的水和饲料 ,保持室温 18 ～ 25℃,相对
湿度 50%～ 60%,12 h 明 ,12 h暗 ,进一步观察小白
鼠的健康状况 , 剔除病鼠 、孕鼠。随机分为溶媒
(20%DMSO)对照组及金粉蕨素 5个剂量组共 6组 ,
每组10只 ,并分笼喂养分别编号 。给药 5组按表 1
所示剂量及给药体积以灌胃方式给药 ,溶媒对照组
每只小白鼠以灌胃方式给予 20%DMSO 0.8 mL。给
药后立即观察小白鼠是否出现中毒反应 ,随后每隔
4 h观察 1 次 ,直至 14 d 后结束 。观察期间保证喂
养条件不变 ,发现死亡小鼠及时进行剖检 。14 d后 ,
将剩余小白鼠全部处死剖检 。
1.3　观察指标
1.3.1　一般症状及死亡情况　给药期间主要观察
动物外观(如瞳孔 、眼睑 、背毛等)、行为活动(如呼
吸 、反射活动等)、肌张力和粪便情况 。对出现严重
中毒反应的小白鼠进行重点观察 ,及时记录其死亡
前症状和死亡时间 。
1.3.2　剖检　对中途死亡和实验结束时处死的小
白鼠进行剖检 。肉眼观察各主要脏器(心 、肺 、脾 、
肝 、肾 、胃 、肠等)有无异常。主要观察内容包括脏器
的大小 、颜色 、硬度 、表面光滑程度以及胸腹腔有无
积液等 。
1.3.3　体重变化　各鼠编好号后在给药前各称一
次体重(W1),处死前(或死亡之时)称一次体重
(W2),体重变化 X=W2 -W1(mg)。最后结果以 x
±s 表示 ,结果用SPSS 软件包作 t 检验 。
2　结　　果
2.1　一般症状　给药后观察期间各组小鼠均未见
异常表现 ,活动正常 ,行为活泼 ,毛发光润 ,排泄物无
异常 ,摄食均正常(见表 2)。
表 2　金粉蕨素对小白鼠各系统和体重变化的影响(n =10)
组别 剂量(mg/ kg) 瞳孔 眼睑 毛色 紫绀 血便 、血尿 肛周污秽 呼吸 肌颤 反射
体重变化
(mg)
对照组 0 N N N — — — — — — 2.6±1.5
1 640 N N N — — — — — — 4.1±3.0
2 320 N N N — — — — — — 3.6±4.4
3 160 N N N — — — — — — 7.6±4.5＊
4 80 N N N — — — — — — 7.9±2.5＊
5 40 N N N — — — — — — 8.2±2.4＊
　　N:正常 , — :阴性表现;＊:与对照组比较 , P<0.05
2.2　剖检　各组小白鼠于给药 14 d后处死 ,剖检 ,
肉眼观察各主要脏器如心 、肺 、脾 、肝 、肾 、胃 、肠等均
未发现异常变化 。
2.3　体重　我们发现特大剂量两组小白鼠体重增
长与对照组无显著性差异 ,而较小剂量的 3个组小
鼠体重比对照组增长得更快 ,且有显著性差异(表
2)。
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3　讨　　论
实验结果显示 ,给予 20%二甲基亚砜和各浓度
金粉蕨素后 ,小白鼠外观体征 、行为活动 、排泄均表
现正常 ,实验结束时处死小白鼠剖检 ,未见小白鼠的
心 、肺 、脾 、肝 、肾 、胃 、肠等有明显异常变化 ,以上说
明金粉蕨素经灌胃途径给药在 640 mg/kg 及其以下
剂量时对小白鼠各器官无明显毒性作用 。此剂量相
当于同类药物临床用量的 640倍[ 4] ,表明金粉蕨素
口服给药是安全的。有趣的是 ,经与对照组比较 ,我
们发现 160 mg/kg以下剂量金粉蕨素组小白鼠的体
重增长明显大于高剂量金粉蕨素组和溶媒对照组 ,
金粉蕨素在小剂量使用时是否有增进食欲或其他方
面的作用 ,从而使体重增加 ,有待以后验证 ,其真正
的原因有待进一步探讨。
我室目前在对金粉蕨素的药效学实验的观察中
发现 ,在异丙肾上腺素诱导 SD 大鼠心肌缺血模型
中 ,金粉蕨素可明显改善心肌缺血状况 ,减轻异丙肾
上腺素引起的心电图 ST 段下降 ,增加冠脉血流量;
金粉蕨素具有抗脂质过氧化作用。在培养的大鼠血
管平滑肌细胞中 ,金粉蕨素明显抑制氧化应激(ox-
LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖 、钙超载和抑制丝
裂素活化蛋白激酶(ERK1/2)的活性 。在培养的牛
主动脉内皮细胞中 ,金粉蕨素明显抑制氧化应激引
起的内皮细胞凋亡 ,并有促进内皮细胞生长的作用 。
通过家兔离体胸主动脉血管环实验 ,发现其对溶血
性磷脂酰胆碱损伤血管内皮依赖性舒张功能有明显
的保护作用 。在培养的人脐静脉内皮细胞上 ,金粉
蕨素明显降低 LDH的释放[ 5] 。另外 ,采用MTT比色
法 、Western Blot法 、流式细胞仪等方法 ,观测金粉蕨
素对超氧阴离子损伤人肺静脉内皮细胞的保护作
用 ,结果发现金粉蕨素对受损的内皮细胞具有明显
保护作用 ,增强 eNOS 活性 ,增加 NO 释放 ,降低内皮
细胞的凋亡。以上结果均说明 ,在心血管疾病的防
治上金粉蕨素具有重要意义和开发价值。为全面掌
握金粉蕨素的毒性资料 ,以更好地为药效学实验的
剂量设计及临床拟定安全剂量提供参考 ,有必要进
一步深入进行金粉蕨素的急性毒性研究和长期毒性
及器官毒性研究。本实验结果为进一步开发金粉蕨
素并满足临床安全有效地用药提供了实验依据 。
参 考 文 献
1　Yunlong Xu , Isao Kubo ,Yunbao Ma.A cytotoxic f la-
vanone glycoside from Onychium japonicum:structure
of Onychin[ J] .Phytochemistry , 1993 ,33(2):510-
511
2　张均田.现代药理实验方法[M] .北京:北京医
科大学 、中国协和医科大学联合出版社 , 1998.
1810-1828
3　温玉麟.药物与化学物质毒性数据[M] .天津:
天津科学技术出版社 , 1989.372
4　赵克健.中国化学药品大全[M] .北京:新时代
出版社 , 1990.10
5　庹勤慧 ,黄红林 ,谢志忠 ,等.金粉蕨素对溶血性
磷脂酰胆碱损伤血管内皮依赖性舒张功能的保
护作用及机制[ J] .中国动脉硬化杂志 , 2001 , 9
(1):27-30
(收稿时间:2001-08-17)
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