全 文 ：收稿日期:2013-08-05; 修订日期:2014-03-12
基金项目:国家自然科学基金地区项目( No． 21062015)
作者简介:许红平( 1964-) ，女( 汉族) ，浙江临海人，宁夏医科大学副教授，
硕士学位，主要从事天然产物化学及中药药理学研究工作．
* 通讯作者简介:王 妍( 1958-) ，女( 汉族) ，陕西西安人，宁夏医科大学
教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事天然产物化学及中药药理学
研究工作．
鹅绒藤醇提物各组分清除自由基的研究
许红平1，水 栋2，徐 泉2，时 洋2，马春芳2，赵 晶3，王 妍1*
(1．宁夏医科大学基础医学院，宁夏 银川 750004; 2．宁夏医科大学药学院，宁夏 银川 750004;
3．福建中医药大学药学院，福建 福州 350122)
摘要:目的 通过 DPPH·法测定鹅绒藤地上部分醇提物及根部醇提物各萃取组分的清除自由基的能力。方法 分别将
鹅绒藤地上部分醇提物、根部醇提物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，各组分都配置成适当浓度的溶液，通过
DPPH·法测定各组分的清除自由基的能力，并计算各组分的清除 50%自由基时样品浓度( IC50 ) ，以维生素 E 作为阳性
对照。结果 乙酸乙酯组分清除自由基的能力均最强，正丁醇组分次之，石油醚组分抗氧化活性较弱。结论 鹅绒藤地上
部分醇提物，根部醇提物各组分对 DPPH·均具有一定清除作用，乙酸乙酯和正丁醇组分的清除能力显著，确定为活性组
分，具有体外抗氧化性，可作为有效的天然自由基清除剂，具有较大的开发利用前景。
关键词:鹅绒藤; DPPH·
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 07． 009
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 07-1558-02
鹅绒藤 Cynanchum Chinese Ｒ． Br．为萝摩科鹅绒藤属植物，又
名牛皮消、羊奶角角，系多年生，生于海拔 500m 以下的向阳山
坡、灌丛、路旁、河畔、田埂或沿海盐碱滩涂湿地。广泛分布于宁
夏各地，山东、浙江、河南、陕西、甘肃、青海等省区亦有分布［1］，
资源极为丰富，夏、秋间随用随采。鹅绒藤味苦、性寒，具祛风解
毒、健胃止痛之功效，全株具白色乳汁，民间常用鹅绒藤乳汁治疗
寻常性疣赘，也有用于治疗耳乳突状瘤和甲癣的报道［2，3］。综合
相关文献发现，对鹅绒藤抗氧化活性研究较少，从而限制了人们
对该资源的开发利用，造成了该资源的浪费。本文分别对鹅绒藤
地上部分及根部用 70%乙醇进行提取，依次用石油醚、乙酸乙
酯、正丁醇进行萃取，通过 DPPH·法测定其各萃取组分清除自
由基的能力，对鹅绒藤抗氧化活性进行了研究，认识鹅绒藤地上
部分及根中抗氧化成分的分布情况，为进一步开发利用鹅绒藤这
样的地区性中草药提供了理论依据。
1 仪器与材料
1． 1 材料 鹅绒藤地上部分及根采自宁夏银川贺兰山，经宁夏医
科大学药学院陈靖博士鉴定为 Cynanchum Chinese Ｒ． Br．。
1． 2 试剂 1，1 －二苯基 － 2 －苦肼基自由基(DPPH·)(日本东
京化成工业株式会社);乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、
二甲基亚砜(DMSO)均为国产分析纯。
1． 3 仪器 DK － S14 电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限
公司);旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司);SHB － B95 型循环
水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);AL104 电子天平
(梅特勒 －托利多仪器有限公司);VIS － 7220N 可见分光光度计
(北京瑞利分析仪器公司)。
2 方法
2． 1 DPPH·法原理 DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自
由基，它的甲醇溶液呈紫色，在 515nm 处有强吸收峰，DPPH·通
常被用来检测抗氧化剂的抗氧化活性，当 DPPH·溶液中加入自
由基清除剂时，DPPH·会和清除剂提供的质子结合形成 DPPH
－ H，从而使溶液颜色变浅，在 515nm处的吸光度变小，故该法可
以用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，
清除率越大，抗氧化能力越强。
清除 DPPH·的能力采用 IC50值表示，IC50定义为 DPPH·清
除率为 50%时所需抗氧化剂浓度，其测定值系根据不同浓度抗
氧化剂的清除率作曲线得出 IC50值，IC50值越小，该物质抗氧化活
性越强。
2． 2 鹅绒藤地上部分及根部提取方法 分别称取鹅绒藤地上部
分及根部各 100g，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入 1L 70%乙醇，加
热煮沸回流 3h，抽滤，滤液保存备用，滤渣同法再提 3 次。合并
滤液，置旋转蒸发仪减压回收溶剂至干，得浸膏。
2． 3 供试品溶液的制备 见图 1。
图 1 供试品溶液的制备
将浸膏溶于 100ml 水中，加热超声助溶，加入 100ml 石油醚
进行萃取，静止分层，得到下层水液;同法反复萃取至石油醚层的
颜色清淡为止，合并石油醚萃取液，减压蒸馏至干，得石油醚萃取
部分的浸膏。
将石油醚萃取后的水液用乙酸乙酯萃取，同样加入 100ml乙
酸乙酯进行萃取，方法同上，最后得到乙酸乙酯萃取部分的浸膏。
将乙酸乙酯萃取后的水液用正丁醇萃取，同样加入 100ml正
丁醇进行萃取，方法同上，最后得到正丁醇萃取部分的浸膏。
各浸膏用相应溶剂配制成 10mg·ml －1的溶液，备用。
2． 4 维生素 E阳性对照溶液的制备 精密称取维生素 E 100mg，
用 DMSO溶解并定容于 10ml的棕色容量瓶中，得到 10 mg·ml －1
的阳性对照溶液，置于冰箱中，避光冷藏。
2． 5 DPPH·标准曲线的制作 准确称取 DPPH· 2． 5mg，用甲醇
定容到 100ml，配制成质量浓度为 2． 5 × 10 －2 mg·ml －1的标准溶
液，置冰箱中备用(现用现配)。分别取 0，2，4，6，8，10ml 标准溶
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液，用甲醇定容至 10ml，最终质量浓度分别为 0，5，10，15，20，
25μg·ml －1。测定上述标准溶液在 515nm 波长处的吸光度，制
作标准曲线(见图 2)。由图 2 可得标准曲线的线性方程 Y =
0． 024 5X + 0． 002 6，Ｒ2 = 0． 999 8，标准曲线显示良好的线性。
图 2 DPPH·标准曲线
2． 6 测定方法和清除率的计算 将待测液配制成不同浓度溶液，
分别取不同浓度的待测液 0． 3ml，量取浓度为 0． 1mmol·L －1的
DPPH·溶液 2． 7ml，立即混匀，室温避光反应 30min，用比色皿在
515nm波长处测定吸光值，在一定时间间隔内测定吸光度，直到
读数稳定。
通过公式:清除率(%)=［1 － A1 /A0］× 100%来计算自由基
清除率。
式中 A0 为未加试样的 DPPH·在 515 nm 处的吸光度，A1
为抗氧化性物质与 DPPH·反应后的 515nm处的吸光度。
2． 7 清除 50%自由基时样品浓度(IC50)的计算
［4］ 绘制 DPPH
自由基清除率对待测液浓度曲线，通过线性回归分析可以得到回
归方程，根据回归方程可以计算出 DPPH·清除率为 50%时所需
的样品浓度，即 IC50值。
3 结果
3． 1 DPPH·溶液稳定性实验 测定 DPPH·在无水甲醇中吸光
度变化与时间的关系，结果显示 DPPH·的吸光度在 60min 内基
本不变。在 DPPH·溶液中加入供试品后，测定吸光度与时间的
关系，发现吸光度随时间增长呈线性降低，但 40min后，吸光度的
变化已经很小。为了提高测试准确度，在加入供试品反应 30min
后，迅速测定吸光度。
3． 2 各组分清除 DPPH自由基的能力 依据“2． 6”方法测定鹅绒
藤地上部分、根部各萃取组分对 DPPH·的清除率如图 3 ～ 4 所
示，根据萃取组分对 DPPH·的清除率拟合出的回归方程与所得
IC50值如表 1 ～ 2 所示。
图 3 鹅绒藤地上部分各萃取组分对 DPPH·的清除率
图 4 鹅绒藤根部各萃取组分对 DPPH·的清除率
由图 3 ～ 4 可以看出，鹅绒藤地上部分醇提物，根部醇提物各
组分对 DPPH·均具有一定清除作用，在一定浓度范围内清除能
力与浓度呈正相关。
表 1 鹅绒藤地上部分各萃取组分对 DPPH·的
清除活性的回归方程和 IC50值(珋x ± s)
样品 回归方程 IC50 /mg·ml －1
地上部分总提物 Y = 27． 839X + 2． 841 3 1． 694
石油醚组分 Y = 13． 236X + 3． 445 7 3． 517
乙酸乙酯组分 Y = 54． 09X + 8． 633 9 0． 765
正丁醇组分 Y = 55． 387X + 6． 428 9 0． 787
VE Y = 17． 12X － 0． 947 9 2． 976
表 2 鹅绒藤根部各萃取组分对 DPPH·的
清除活性的回归方程和 IC50值(珋x ± s)
样品 回归方程 IC50 /mg·ml －1
根部总提物 Y = 24． 669X + 5． 017 4 1． 823
石油醚组分 Y = 16． 417X + 6． 925 1 2． 624
乙酸乙酯组分 Y = 53． 157X + 11． 163 0． 731
正丁醇组分 Y = 38． 736X + 6． 624 5 1． 120
VE Y = 17． 12X － 0． 947 9 2． 976
由表 1 ～2可以得出，与 VE 对照组相比，鹅绒藤地上部分醇
提物及根部醇提物均有较强的清除自由基活性，鹅绒藤地上部分
各萃取组分的 IC50(mg·ml
－1)从小到大依次为乙酸乙酯层(0． 765
mg·ml －1)＜正丁醇层(0． 787mg·ml －1)＜石油醚层(3． 517mg·
ml －1)，鹅绒藤根部各萃取组分的 IC50(mg·ml
－1)从小到大依次
为乙酸乙酯层(0． 731mg·ml －1)＜正丁醇层(1． 120mg·ml －1)＜
石油醚层(2． 624mg·ml －1)。
4 讨论
本试验以体外 DPPH·法为评价方法，以维生素 E 作为对照
物，研究鹅绒藤地上部分、根部各提取部位的清除自由基活性。
实验结果表明，鹅绒藤地上部分醇提物、根部醇提物及各萃取组
分都具不同程度的清除 DPPH自由基的能力，二者的实验结果均
为乙酸乙酯组分最强，正丁醇组分次之，石油醚组分抗氧化活性
较弱。从中可确定正丁醇和乙酸乙酯组分为活性组分，在对鹅绒
藤地上部分、根部抗氧化活性成分提取与分离时可侧重正丁醇和
乙酸乙酯组分。
自由基又称游离基，随着分子生物学和医学的深入发展，人
们逐渐认识到自由基在调节细胞的许多生理功能中起重要作用，
对机体的各个方面产生影响，而适当补充外源性抗氧化剂可以改
善这一状况。天然抗氧化剂具有无毒副作用、无残留、无污染、稳
定、安全等优点，因此天然抗氧化物质的研究在医药学、保健与功
能食品、美容养颜等领域具有非常重要的意义。本实验对鹅绒藤
地上部分醇提物及根部醇提物的清除自由基活性研究，将为进一
步研究其活性成分奠定基石，为寻找其抗氧化活性机理提供依
据，为未来鹅绒藤属植物的资源开发提供依据。
参考文献:
［1］ 马毓泉．内蒙古植物志［M］．呼和浩特:内蒙古人民出版社，1980:
104．
［2］ 李红苹．鹅绒藤乳汁治疗耳乳突状瘤 1 例报告［J］． 湖南医学高等
专科学校学报，1999，1 (2 ):18．
［3］ 王淑珍．鹅绒藤治疗甲癣的疗效观察［J］． 天津药学，1996，8(3):
49．
［4］ 孙 涛，付雪艳，张 蓓． DPPH法测定沙棘籽原花青素清除自由基
的能力［J］．宁夏医科大学学报，2009，31(1):26．
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