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鬼箭羽与其伪品大果榆的薄层色谱鉴别研究



全 文 :一定程度上反应术后大鼠的疼痛情况。
祖国医药外治法治疗肛肠病历史悠久,紫白膏是
本院院内制剂,其临床疗效显著。但笔者认为中医药
的疗效不仅仅是体现在临床效果上,中医应走向科学
化道路,故通过本实验为紫白膏的临床效果提供科学
的数据支持。紫白膏主要成分是大黄、紫草、石膏、白
及、冰片等,全方起到清热利湿、凉血止血、消肿止痛的
功效。本方以大黄、紫草为君,研究证实大黄素[9]、紫
草素[10]等中药提取物对炎性介质有干预效果;白及、
煅石膏共为臣,有研究[11]证实白及具有缓解术后疼痛
效果,而煅石膏具有收敛生肌,多外用以治痈疽疮疡,
溃不收口,金疮出血等[12]。冰片为使,研究证实其具
有显著的抗炎、镇痛效果[13]。总而观之,本方整体药
理具有抗炎镇痛效果,本实验研究证实了紫白膏对肛
肠病术后疼痛模型大鼠 IL-6 的控制作用和对 IL-10 的
提升作用,此可能为紫白膏镇痛机制之一,但遗憾的是
本实验不能证实紫白膏对炎性因子产生作用的具体机
理,有待后续进一步研究。
参考文献
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(本文校对:叶玲 收稿日期:2015 - 01 - 12)
鬼箭羽与其伪品大果榆的薄层色谱鉴别研究*
王 相 郭丁丁△ 陈静静 李先荣
摘要:目的 建立区分鬼箭羽与其伪品大果榆的薄层色谱鉴别方法,为鬼箭羽药材的鉴别提供更加方便、快捷的依据。方法 通
过系统的对比研究,采用薄层色谱法对鬼箭羽及大果榆进行定性鉴别。结果 在鬼箭羽与大果榆的薄层色谱鉴别结果中存在一特殊
斑点,利用该斑点可以区分两者。结论 研究所建立的薄层色谱方法操作简单、可行性高,可以作为鬼箭羽与大果榆的鉴别依据。
关键词:鬼箭羽;大果榆;薄层鉴别
doi:10. 3969 / j. issn. 1003-8914. 2016. 01. 024 文章编号:1003-8914(2016)-01-0050-04
The TLC Study of Euonymus Alatus and Its Adulterants Ulmus Macrocarpa
WANG Xiang GUO Dingding△ LI Xianrong
(Shanxi Institute of Prescription of TCM,Shanxi,Taiyuan 030012,China)
Abstract:Objective To establish the TLC methods of the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa in order to make its identification easier
and convenient. Methods According to its systems research,using TLC methods can identify the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa.
Results There is a special spot in TLC results which can distinguish the two herbs between the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa.
Conclusion The method is easy and reliable with good reproducibility,and can be used as quality control standard of Euonymus alatus and
its adulterants Ulmus macrocarpa.
Key words:Euonymus alatus;Ulmus macrocarpa;TLC
* 基金项目:山西省中药材、中药饮片地方药材标准研究(No.2012016A)
作者单位:山西省中医药研究院(太原 030012)
△通讯作者
鬼箭羽,又名卫矛、鬼箭、六月凌等,为卫矛科植物
卫矛 Euonymus alatus(Thunb.)Sieb. 的具翅状物的嫩
·05· 光明中医 2016 年 1 月第 31 卷第 1 期 CJGMCM January 2016. Vol 31. 1
枝或翅状附属物。具有破血通经、解毒消肿、杀虫之功
效。近代研究表明,其化学成分主要为黄酮类[1]、甾
体类、萜类及多糖类[2]等,且其药理活性研究主要集
中在黄酮类成分[3]的活性研究。大果榆,为榆科植物
大果榆 Ulmus macrocarpa Hance.的干燥茎,具有祛痰、
利尿、杀虫之功效。二者来源不同,但因其茎亦为圆柱
状,具不规则木栓翅,枝坚硬而韧,故目前药材商品流
通中常常可见以大果榆冒充鬼箭羽药材。为了保证药
材质量及临床用药安全,本文系统的研究了鬼箭羽与
大果榆在薄层色谱的主要差别,已达到有效鉴别真伪
的目的,保证药材质量及临床用药安全。
1 仪器与试药
KQ-3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司);BP-211D型电子天平(德国赛多利斯);
DZKW-4 型电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限
公司);DFT-200C 型粉碎机(上海比朗仪器有限公
司);薄层层析硅胶 G(化学纯 青岛海洋化工有限公
司);薄层层析硅胶 GF254(化学纯 青岛海洋化工有限
公司);β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所,
批号:110851-201206);蒸馏水;其他试剂均为分析纯。
鬼箭羽药材分别购自成都、河北、山西等地,另有
自采自山西沁水县鬼箭羽药材,共 13 批,经山西省食
品药品检验所王春芳教授鉴定 1,2,7 号样品为榆科植
物大果榆 Ulmus macrocarpa Hance.,其余样品为卫矛
Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.具体信息见表 1。
表 1 鬼箭羽药材收集情况
编号 来源 性状 收集时间
1 成都药材市场 枝条(伪品大果榆) 2013. 3
2 成都药材市场 枝条(伪品大果榆) 2013. 3
3 成都药材市场 翅状物 2013. 3
4 成都药材市场 翅状物 2013. 3
5 成都药材市场 翅状物 2013. 5
6 成都药材市场 翅状物 2013. 5
7 成都药材市场 枝条(伪品大果榆) 2013. 5
8 安国药材市场 翅状物 2013. 3
9 安国药材市场 翅状物 2013. 3
10 山西沁水(自采) 嫩枝及翅状物 2013. 4
11 山西省中医院药房 枝条及翅状物 2013. 5
12 山西中医学院附属医院药房 枝条及翅状物 2013. 5
13 北京同仁堂药房 枝条及翅状物 2013. 5
2 试验方法与结果
曾参照不同文献中记载鬼箭羽药材的薄层色谱鉴
别方法对 10 份鬼箭羽药材及 3 份大果榆药材进行鉴
别。结果如下。
2. 1 方法一[4] 取样品粉末 2 g,加甲醇 30ml,超声
处理 20 分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶
解,作为供试品溶液。以 β-谷甾醇为对照,照薄层色
谱法(《中国药典》2010 年版一部附录 VI B)试验,吸
取上述四种溶液各 5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板
上,以甲苯-乙醚(3∶ 2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷
以 5%香草醛硫酸溶液,在 105℃加热至斑点显色清
晰,置日光下检视。其结果见图 1。
图 1 薄层色谱鉴别
1-13:供试品 B:β-谷甾醇对照品
实验结果显示,利用该方法进行薄层鉴别,以 β-
谷甾醇为对照,鬼箭羽与大果榆均在相同位置显示相
同颜色斑点,该成分在两种药材中均含有,选用该方法
未能区分两者,无鉴别意义。
2. 2 方法二[5] 取样品粉末 5 g,加乙酸乙酯 50ml,
超声 2 小时,提取液回收乙酸乙酯至近干,残渣加乙
酸乙酯 2ml使溶解,作为供试品溶液,另取齐墩果酸
对照品,加乙酸乙酯制成每 1ml 含 2mg 的对照品溶
液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录
VI B)试验,分别吸取上述溶液各 5μl,分别点于同一
以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上,以
氯仿-甲醇(10 ∶ 1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以
5%硫酸乙醇液,在 105℃加热至斑点显色清晰。结
果见图 2。
图 2 薄层色谱鉴别
1-13:供试品 B:齐墩果酸对照品
实验结果显示,利用该方法进行薄层鉴别,以齐墩
果酸为对照,3 份大果榆样品中均未显示对应斑点,而
10 份鬼箭羽药材中却在某些批次中显示该斑点,有些
批次中并未显示该斑点,利用齐墩果酸为对照,未能达
到区分所有鬼箭羽与大果榆的目的。
·15·光明中医 2016 年 1 月第 31 卷第 1 期 CJGMCM January 2016. Vol 31. 1
2. 3 方法三 基于以上实验结果,并结合相关文献
资料,对鬼箭羽样品进行了系统的薄层色谱条件
研究。
2. 3. 1 供试品溶液的制备 取本品粉末 2 g,加甲醇
30ml,超声处理 30 分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇
1ml使溶解,作为供试品溶液。另取鬼箭羽对照药材,
同法制成对照药材溶液。
2. 3. 2 不同展开条件下薄层鉴别
2. 3. 2. 1 不同展开体系下对鬼箭羽与大果榆的薄层
鉴别 照薄层色谱法(《中国药典》2010 版一部附录
VI B)试验,吸取上述两种溶液各 5μl,分别点于同一
硅胶 G薄层板上,分别以正丁醇-醋酸-水(12 ∶ 5 ∶ 4)、
甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9 ∶ 4 ∶ 1)[6],展开,取出,晾干,
置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图 3、4。
图 3 硅胶 G板 365nm检视
正丁醇-醋酸-水(12∶5∶4)1,3:样 2(大果榆)
2,4:样 10(鬼箭羽)5:样 9(鬼箭羽)
实验结果显示,利用该两种方法进行薄层鉴别,图
3 薄层结果中大果榆与鬼箭羽存在差异,但鬼箭羽主
斑点 Rf 值太大,未能显示更多信息,图 4 薄层结果中
二者均有相同主斑点,但大果榆结果在 Rf 值约 0. 4 左
右有一斑点,鬼箭羽未显示相同斑点,但当所有批次药
材均在该薄层条件下展开时,并未出现相同薄层行为,
某些批次鬼箭羽样品中也显示相同斑点,因此对该方
法进行进一步优化研究,以期达到区分所有批次鬼箭
羽与伪品大果榆的目的。
2. 3. 2. 1 同一展开体系下不同薄层板对鬼箭羽与大
果榆的薄层鉴别 照薄层色谱法(《中国药典》2010 版
一部附录 VI B)试验,吸取上述两种溶液各 5μl,分别
点于同一硅胶 G、GF254薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲
酸(9∶ 4∶ 1),展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下
检视。结果见图 4、5。
实验结果显示,利用该种方法进行薄层鉴别,大果
榆与鬼箭羽在 Rf 值约 0. 95 附近有一斑点存在差异,
但该主斑点 Rf 值偏大,故调整该薄层展开剂体系,以
图 4 硅胶 G板 365nm检视
甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)1,3:样 2(大果榆)
2,4:样 10(鬼箭羽)5:样 9(鬼箭羽)
图 5 硅胶 GF254板 254nm检视
1:样品 2(大果榆)2:样品 10(鬼箭羽)
3-4:样品 9(鬼箭羽)
寻求更好的薄层鉴别方法。
2. 3. 2. 1 同一展开体系下不同极性展开剂对鬼箭羽
与大果榆的薄层鉴别 照薄层色谱法(《中国药典》
2010 版一部附录 VI B)试验,吸取上述两种溶液各
5μl,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以甲苯-乙酸
乙酯-甲酸(9∶ 4∶ 1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶ 9 ∶ 1)、甲
苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶ 1∶ 0. 5),展开,取出,晾干,置紫
外光灯(254nm)下检视。结果见图 6、7、8。
由以上试验结果可知,在硅胶 G254薄层板上,以甲
苯-乙酸乙酯-甲酸(20 ∶ 1 ∶ 0. 5)为展开剂进行展开,得
到的结果能较好的区别鬼箭羽药材与大果榆药材。故
将其薄层鉴别方法定为:取本品粉末 2 g,加甲醇
30ml,超声处理 30 分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇
1ml使溶解,作为供试品溶液。另取鬼箭羽对照药材,
同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》
·25· 光明中医 2016 年 1 月第 31 卷第 1 期 CJGMCM January 2016. Vol 31. 1
图 6 硅胶 GF254板 254nm检视
1-13:样 1-13 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)
图 7 硅胶 GF254板 254nm检视
1-13:样 1-13 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶9∶1)
图 8 硅胶 GF254板 254nm检视
1-13:样 1-13 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶1∶0. 5)
2010 版一部附录 VI B)试验,吸取上述两种溶液各
5μl,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以甲苯-乙酸
乙酯-甲酸(20∶ 1∶ 0. 5),展开,取出,晾干,置紫外光灯
(254nm)下检视。
2. 3. 3 薄层板耐用性考察 观察在不同厂家生产的
薄层板上的层析效果。将相同的供试品溶液分别点样
于自制硅胶 GF254板和青岛海洋化工厂分厂购买的硅
胶 GF254板上,用相同的展开系统展开,结果显示两个
薄层板上的展开效果均较理想,所得斑点清晰,且分离
效果好。结果见图 8、9。
3 讨论
鬼箭羽在临床中的应用越来越广泛,市场中常有其
伪品出现,鬼箭羽与伪品大果榆的鉴别已有相关报
道[7],但通过实验验证,发现其重复性较差,往往得不到
预期的结果。目前,湖南、湖北、甘肃等地的药材地方标
准中收载有鬼箭羽药材的薄层色谱鉴别方法,但所建立
图 8 硅胶 GF254板 254nm检视(自制)
1-13:样 1-13
图 9 硅胶 GF254板 254nm检视(青岛海洋化工厂)
1-13:样 1-13
的方法标准[1,8 ~ 9]中所收载的定性鉴别方法分别以β-谷
甾醇、异鼠李素等对照品来鉴别鬼箭羽,均未能用于区
分其与大果榆。另外,文献报道中作为对照使用的香橙
素、柚皮素、山奈酚等多为实验室自制,不易购得。本文
通过系统的研究,以鬼箭羽药材为对照来区分鬼箭羽及
其伪品大果榆,并找出定性区别鬼箭羽与大果榆的方
法,经过考察,该方法可行性高、直观、方便,为区别鬼箭
羽与大果榆提供了有利的依据。区别鬼箭羽与其伪品
大果榆的斑点成分结构鉴定将另文报道。
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(本文校对:刘言言 收稿日期:2015 - 01 - 17)
·35·光明中医 2016 年 1 月第 31 卷第 1 期 CJGMCM January 2016. Vol 31. 1