全 文 ：天仙果根总黄酮提取工艺研究
王喜周1，应跃跃2，张 昊1，姚晓伟1，陈学智3
(1．丽水学院医学院，浙江丽水 323000;2．丽水市质量技术监督检测院，浙江丽水 323000;3．景宁县人民医院，浙江丽水 31000)
摘要 ［目的］优选天仙果根中总黄酮的超声辅助提取工艺。［方法］以总黄酮的含量为指标，采用单因素试验考察乙醇浓度、料液比、
提取时间和提取次数对天仙果根部总黄酮得率的影响，并采用正交试验优选天仙果根总黄酮的超声辅助提取工艺。［结果］4个因素对
天仙果根部总黄酮提取得率的影响大小顺序为:料液比 ＞乙醇浓度 ＞提取时间 ＞提取次数;最佳提取工艺为:提取溶剂乙醇的浓度为
50%，料液比 1∶ 20( W/V，g /ml，下同) ，提取 2次，每次 60 min;在此条件下，天仙果根部总黄酮得率为 27． 83 mg /g。［结论］提取工艺合
理，测定方法简单、快速、准确，为天仙果深度开发提供了科学依据。
关键词 天仙果( Ficus erecta Thunb． var． beecheyana ( Hook． et Arn． ) King) ; 总黄酮; 提取工艺;紫外分光光度法
中图分类号 S663 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 02 －00601 －03
Extraction and Determination of Total Flavonoids from Ficus beecheyana Radix
WANG Xi-zhou et al ( Medical College of Lishui University，Lishui，Zhejiang 323000)
Abstract ［Objective］To optimum ultrasonic-assisted extraction technique of total flavonoids in radix of Ficus beecheyana． ［Method］Effects of
ethanol concentration，solid-liquid ratio，extraction time and times on yield of total flavonoids were investigated by using orthogonal test，and the
contents were determined by UV spectrophotometry． ［Result］The order of influencing factors is: solid-liquid ratio ＞ ethanol concentration ＞ ex-
traction time ＞ extraction times; the optimal extraction technique is: ethanol concentration 50%，solid-liquid ratio 1∶ 20( W/V，g /ml，the same as
follows) ，extraction 2 times and extraction time 60 min． Under these optimum conditions，the extraction efficiency of total flavonoids reached as
high as 27． 83 mg /g． ［Conclusion］The extraction technique is proper，the determination method is simple，rapid and accurate，which will pro-
vide a scientific basis for deeply utilization of Ficus beecheyana．
Key words Ficus beecheyana; Total flavonoids; Extraction technique; UV spectrophotometry
基金项目 浙江省科技厅公益项目( 2011C23128 ) ; 2010 年度丽水学院
重点科研项目( kz201018 ) ; 2011 年度丽水市科技局公益项
目( 20111JYZB20) 。
作者简介 王喜周( 1969 － ) ，男，浙江缙云人，讲师，工程师，硕士，从事
天然药物研究，E-mail: wangxizhou88w@ sina． com。
收稿日期 2012-12-03
天仙果(Ficus erecta Thunb． var． beecheyana (Hook． et
Arn．)King)为桑科(Moraceae)榕属(Ficus)植物，又名大号
牛奶仔、牛奶柴、鬼馒头［1］、细叶牛乳绳、小叶牛奶绳、小攀
坡［2］、牛奶浆、野枇杷、牛奶珠、毛天仙果［3］，最早记载于《本
草纲目》［4］，主要分布于浙江、江西、福建、安徽、湖北、湖南、
广东、广西、四川、贵州和河南等地。天仙果是畲族常用的畲
药，也是苗药之一。其根入药，性温、味甘、淡、无毒，具有补
中益气、健脾化湿、行气活血、强筋壮骨、祛风通络和清热解
毒等功效，主治风湿痹痛、贫血、月经不调、脱肛、骨结核、皮
肤搔痒、跌打损伤和劳倦乏力等［5 －8］。天仙果除了药用之
外，在浙南山区还被用作烹制菜肴的调味品、保健品;其嫩叶
也是一种野菜［9］。
黄酮是自然界中广泛存在的化合物。在唇形科(Lami-
aceae)、玄参科(Scrophulariaceae)、爵床科(Acanthaceae)和菊
科等植物中分布较多。研究表明，桑科榕属植物中也富含黄
酮类化合物，如条叶榕(Ficus pandurata Hance var． angustifolia
Cheng)、全叶榕(Ficus pandurata Hance var． holophylla Migo)、
小叶榕(Ficus microcarpa var． pusillifolia)、薜荔(Ficus pumila)、
无花果(Ficus carica Linn)、珍珠莲(Ficus foveolata)、孟加拉湾
榕、聚果榕(Ficus racemosa Linn)和金卓叶(Ficus deltoidea)等。
榕属药用植物中的黄酮类活性物质具有广泛的生物活性作用，
如抗氧化、清除自由基、抗胆碱酯酶、护肝作用、抗血管紧张素
转换酶、抗菌、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗醛糖还原酶、降血糖
等［10 －20］。笔者对天仙果根部的黄酮提取工艺进行研究，以期
为充分发掘利用天仙果药用资源提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。野生天仙果，于 2010 年 8 月中旬采自遂
昌白马山国家森林公园，经丽水食品药品监督所李建良鉴定
为 Ficus erecta Thunb． var． beecheyana(Hook． et Arn．)King。
1． 1． 2 主要仪器。756型分光光度计，购自上海精密科学仪
器有限公司;KQ-100DB型数控超声波清洗器，购自昆山市超
声仪器有限公司;台式离心机，购自上海安亭科学仪器厂;手
提式高速中药粉碎机，购自温岭市大德中药机械有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。纯度为 99%芦丁标准样品，购自中国药
品生物制品检定所;无水乙醇，氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、
浓盐酸、四氢化二硼钠、镁粉、三氯化铝均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 样品的预处理。随机选取 20 株天仙果，取根部，水
洗、晾晒后置 60 ℃烘箱中烘干，粉碎，混匀，过 3 号筛，装保
鲜袋，冷藏备用。
1． 2． 2 供试品溶液制备。精密称定天仙果根粉末 1． 000 g，
置 100 ml容量瓶中，按设计的工艺条件(乙醇浓度、料液比、
提取时间和提取次数)超声辅助(功率 250 W，频率 40 kHz)
提取，真空抽滤，放冷，用相同浓度的乙醇溶液定容至容量瓶
刻度，摇匀，得供试品溶液。
1． 2． 3 对照品溶液的制备。精密称取 120 ℃干燥至恒重的
芦丁对照品适量，加浓度 70%乙醇制成浓度为 0、0． 10、0． 20、
0． 30、0． 40和 0． 50 mg /ml的溶液，即得。
1． 2． 4 线性关系的考察。精密量取对照品溶液 1． 0 ml分别
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(2):601 － 603 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.02.017
置 10 ml容量瓶中，加 4． 0 ml浓度 70%乙醇，再加 0． 3 ml浓
度 5%的 NaNO2 溶液，摇匀静置 5 min，接着加 0． 3 ml 浓度
10%的 Al(NO3)3 溶液，摇匀静置 5 min，然后加 3． 0 ml 浓度
4%的 NaOH溶液，最后用浓度 70%的乙醇定至刻度，摇匀，
放置 15 min，以不加对照品溶液为空白，在 510 nm波长处测
定吸光度。以芦丁溶液浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵
坐标，用最小二乘法作线性回归，计算线性回归方程。
1． 2． 5 总黄酮的测定［11，21］。(1)总黄酮的检识［21 －22］。采用
四氢化二硼钠反应、盐酸 －镁粉反应、三氯化铝反应和浓氨
水反应。(2)含量测定。采用分光光度法。黄酮类化合物在
亚硝酸盐存在的碱性条件下与铝离子形成稳定的红色络合
物。此络合物在 510 nm处有吸收带，然后用分光光度法直
接测定样品液中总黄酮的含量。精密量取供试品溶液 1． 0
ml加入 10 ml容量瓶，按“1． 2． 4”项下方法测定其吸光度，根
据回归方程计算出供试品溶液中总黄酮的含量。同样方法
平行 3次，求均值。
1． 2． 6 单因素试验［9］。(1)乙醇浓度。称取天仙果根粉末5
份，每份 1． 000 g，加入 10 ml的浓度分别为 30%、50%、70%、
80%和 95%的乙醇，超声辅助提取 45 min，按“1． 2． 4”项下方
法测定提取液中总黄酮的含量。(2)料液比。称取天仙果根
粉末 5份，每份 1． 000 g，分别加入 5、10、20 和 25 ml 的浓度
70%乙醇，并超声辅助提取 45 min，按“1． 2． 4”项下方法测定
提取液中的总黄酮含量。(3)提取时间。称取天仙果根粉末
5份，每份 1． 000 g，加入 10 ml的浓度 70%乙醇，分别超声提
取 15、30、45、60、75和 90 min，按“1． 2． 4”项下方法测定提取
液中总黄酮含量。(4)提取次数。称取天仙果根粉末 4 份，
每份1． 000 g，用10 ml的浓度70%乙醇，分别超声提取1、2、3
和 4次，每次 45 min，按“1． 2． 4”项下方法测定提取液中总黄
酮含量。
1． 2． 7 正交试验［21 －22］。为了综合考察影响因素，根据单因
素试验结果，设置乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数共
4个因素，每个因素 3 水平，即 L9(3
4)进行正交试验。根据
表 1设定的工艺条件，超声辅助提取天仙果总黄酮，取 1． 0
ml滤液，测定总黄酮含量，每个试验重复 3次，根据统计学处
理结果确定最优提取工艺。
表 1 正交试验因素水平设计
水平
因素
A料液比
g /ml
B提取
次数
C提取时间
min
D乙醇
浓度∥%
1 1∶ 20 2 45 60
2 1∶ 25 4 75 50
3 1∶ 15 3 60 70
1． 2． 8 正交试验最佳提取工艺的重复性验证。根据正交试
验得出的最佳工艺，超声辅助提取天仙果根的总黄酮，并测
定其含量，重复 3次，取均值，检验最佳提取工艺的重现性。
1． 2． 9 统计方法。采用 SAS数据处理软件和 Excel 软件处
理，回归分析采用 t检验，正交试验方差分析采用 F检验，总
黄酮含量均数采用 t检验。
2 结果与分析
2． 1 供试液总黄酮的检识 试验结果表明，盐酸 －镁粉反
应显红色;四氢硼钠反应显红色;三氯化铝反应显黄色并有
荧光;氨水反应呈黄褐色荧光，表明含有总黄酮成分。
2． 2 线性关系的考察 计算得线性回归方程为:Y = 1． 320 0
X －0． 007 1(R =0． 999 4)。试验结果表明，在 0 ～0． 05 mg /ml
范围内，芦丁浓度与吸光度的线性关系良好。
2． 3 单因素试验
2． 3． 1 乙醇浓度。图 1表明，乙醇浓度在 30% ～ 50%时，黄
酮的得率增加;当乙醇浓度超过 70%时，黄酮的得率随乙醇
浓度增加而下降。所以取浓度 50% ～ 70%乙醇作为提取溶
剂较好。
图 1 乙醇浓度对天仙果根部总黄酮得率的影响
2． 3． 2 料液比。图 2表明，黄酮得率在料液比为 1∶ 5 ～ 1∶ 20
时呈上升趋势，但在 1∶ 20 ～ 1∶ 25 时变化不明显。从经济角
度出发，选择料液比在 1∶ 15 ～1∶ 25时较好。
图 2 料液比对天仙果根部总黄酮得率的影响
2． 3． 3 提取时间。图 3表明，提取时间在 15 ～ 75 min时，总
黄酮得率呈上升趋势，但在 75 min后呈下降趋势。故时间以
45 ～75 min较佳。
图 3 提取时间对天仙果根部总黄酮得率的影响
206 安徽农业科学 2013 年
2． 3． 4 提取次数。图 4 表明，提取次数为与黄酮得率呈正
相关，综合考虑成本及提取效率的因素，提取次数以 2 次
较好。
图 4 提取次数对天仙果根部总黄酮得率的影响
2． 4 正交试验 由表 2 可知，料液比对天仙果根总黄酮提
取得率的影响最大，其次是提取溶剂乙醇的浓度。4 个因素
影响从大到小依次为:料液比 ＞乙醇浓度 ＞提取时间 ＞提取
次数。料液比与黄酮得率呈正相关，料液比越高，天仙果根
内外的黄酮浓度差增高，所以黄酮得率增加;在乙醇浓度为
50%时提取得率最大，其原因可能是天仙果根总黄酮中的苷
类含量较高，提取溶剂乙醇的浓度超过 50%时，黄酮的溶解
性下降［21］;另外提取时间对总黄酮提取得率也有一定影响，
随着提取时间的延长，提取得率略有提高。
根据单因素试验和正交试验的结果，参考经济经济因
素，得到较优的提取工艺条件为:A1B1C3D2，即以天仙果根总
黄酮得率为指标，超声辅助提取溶剂为浓度 50%乙醇溶液，
料液比 1∶ 20，提取 2次，每次 60 min。
表 2 正交试验结果
试验号
因素
A B C D
天仙果总黄
酮含量∥mg /g
1 1 1 1 1 20． 46
2 1 2 2 2 24． 41
3 1 3 3 3 23． 25
4 2 1 2 3 23． 01
5 2 2 3 1 21． 59
6 2 3 1 2 23． 12
7 3 1 3 2 20． 75
8 3 2 1 3 18． 71
9 3 3 2 1 16． 04
k1 22． 71 21． 40 20． 43 19． 36
k2 22． 57 21． 24 21． 15 22． 76
k3 18． 17 20． 80 21． 86 21． 32
R 4． 54 0． 60 1． 43 3． 40
注:以上试验结果均为 3次重复的平均值;影响因素经 F检验，没有明
显差异。
2． 5 天仙果根的总黄酮含量 以选择料液比1∶ 20、提取次数2
次、提取时间 60 min、提取溶剂乙醇浓度 50%为条件进行验证
试验，重复 3次，测得天仙果根黄酮得率平均值为27． 83 mg /g，
比 A1B2C2D2 的得率(24． 41 mg /g)提高 14． 01%。
3 结论
试验利用超声波(功率 250 W，频率 40 kHz)辅助技术提
取天仙果根中的总黄酮，其最佳工艺条件为:提取溶剂为浓
度 50%乙醇溶液，料液比 1∶ 20，提取 2 次，每次 60 min;在此
工艺条件下，天仙果根的总黄酮得率为 27． 83 mg /g。按照研
究的提取工艺条件从天仙果根中提取总黄酮，可以获得到较
高的得率，值得进行进一步的研究。
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