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牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制



全 文 : 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2014, 49 (6): 875−881 · 875 ·




牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制
徐晓娜 1, 牛子冉 1, 王守宝 1, 陈俞材 1, 高 莉 2, 方莲花 1*, 杜冠华 1*
(1. 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 北京市药物靶点研究与新药筛选重点实验室,
天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 北京 100050;
2. 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所, 新疆维吾尔医方剂学实验室, 新疆 乌鲁木齐 830049)
摘要: 牛舌草是维吾尔医长期实践中治疗心脑血管疾病的常用药材之一。本研究采用大鼠冠状动脉左前降
支结扎 30 min, 复灌 4 h 模拟临床心肌缺血再灌注 (ischemia/reperfusion, I/R) 损伤, 于再灌注后腹腔注射给予
10、30 和 50 mg·kg−1 牛舌草总黄酮 (bugloss total flavonoids, BTF), 根据心电图、心功能、心肌梗死指数和血清
心肌酶谱结果评价牛舌草总黄酮的心肌保护作用, 并从炎症、细胞凋亡以及 PI3K/Akt 信号通路等探讨其作用机
制。实验结果显示, 牛舌草总黄酮能够剂量依赖性地降低心肌梗死指数, 改善缺血再灌注大鼠的心脏功能, 减少
心肌酶的漏出, 具有明显的心肌保护作用。ELISA 结果表明, 牛舌草总黄酮能降低心肌炎症因子 IL-1β、IL-6、
TNF-α 的水平, 增加 Bcl-2, 降低 Bax, 并上调 PI3K 和 Akt 的磷酸化水平。牛舌草总黄酮具有明显的抗心肌缺血
再灌注损伤作用, 其机制可能与上调 PI3K/AKT 信号通路而抑制细胞凋亡与炎症有关。
关键词: 牛舌草; 总黄酮; 心肌缺血再灌注; 细胞凋亡; 炎症; PI3K/Akt 信号通路
中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2014) 06-0875-07
Effect and mechanism of total flavonoids of bugloss on rats with
myocardial ischemia and reperfusion injury
XU Xiao-na1, NIU Zi-ran1, WANG Shou-bao1, CHEN Yu-cai1, GAO Li2,
FANG Lian-hua1*, DU Guan-hua1*
(1. Beijing Key Laboratory of Drug Targets Identification and Drug Screening, State Key Laboratory of Bioactive Substances and
Functions of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical
College, Beijing 100050, China; 2. China Key Laboratory of Traditional Uygur Medical Prescription, Xinjiang Uygur Autonomous
Region Institute of Traditional Uygur Medicine, Urumqi 830049, China)

Abstract: This study is to investigate the effect of total flavonoids of Uygur medicine bugloss (BTF) on rats
with myocardial ischemia/reperfusion injury, and to explore the mechanisms by which it acts. Left anterior
descending (LAD) coronary artery in rats was occluded for 30 min followed by 4 h reperfusion. Meanwhile, BTF
dissolved in saline was administered intraperitoneally at dosage of 10, 30 and 50 mg·kg−1. Electrocardiograph,
infarction index, serum myocardial enzymes and heart function were determined to evaluate the effect of BTF.
Some other observations were carried out to explore whether inhibiting inflammation and apoptosis is involved
in the mechanisms underlying BTF. Our results showed that in ischemia/reperfusion injured rats BTF could
dose-dependently reduce myocardial infarction index and myocardial enzyme leakage, and enhance heart function,
indicating that it possesses significant cardio protection. ELISA analysis showed that BTF could decrease the

收稿日期: 2014-04-23; 修回日期: 2014-05-06.
基金项目: 国家科技重大专项“重大新药创制”(2013ZX09103001-008, 2012ZX09103-101-078); 国家自然科学基金青年科学基金项目 (81202538);
新疆维吾尔医方剂学重点实验室开放课题 (XJYS1104-2012-01).
*通讯作者 Tel: 86-10-63165313, Fax: 86-10-63165184, E-mail: fanglh@imm.ac.cn;
Tel / Fax: 86-10-63165184, E-mail: dugh@imm.ac.cn
DOI:10.16438/j.0513-4870.2014.06.004
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content of myocardial inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-6 and TNF-α. Western-blotting confirmed that
BTF could increase the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 and reduce the expression of proapoptosis
protein Bax. Further more, the phosphorylation level of PI3K and Akt was upregulated by BTF treatment.
BTF can protect rat against myocardial ischemia/reperfusion injury. Anti-inflammation and inhibition of apoptosis
through upregulating PI3K/Akt signal pathway may contribute to the protective effect of BTF.
Key words: Uygur medicine bugloss; total flavonoids; myocardial ischemia/reperfusion injury; cell
apoptosis; inflammation; PI3K/Akt signal pathway

维吾尔药牛舌草 (又名高孜斑、高孜万) 是维吾
尔医长期实践中治疗心脑血管疾病的常用药材之一,
以意大利牛舌草 (Anchusaitalic Retiz) 或琉璃苣
(Borageofficinalis) 的地上部分入药, 具有生湿生热、
调节异常黑胆质、生湿补脑、祛寒补心、爽心悦智、
润燥消炎和止咳平喘等功效[1]。在维吾尔医的许多经
典复方制剂中, 诸如异常黑胆质成熟剂、艾菲提蒙汤
等, 牛舌草都是必不可少的主药之一。
现代研究已证实, 总黄酮是异常黑胆质成熟剂
的主要药效部位, 具有显著的清除自由基、抗氧化作
用, 能够保护羟自由基引发的 DNA 氧化损伤和线粒
体氧化损伤, 调控凋亡基因表达等[2, 3]。研究报道意
大利牛舌草含有丰富的黄酮类化合物, 正是黄酮类
化合物生物活性的多样性使得牛舌草的研究进入了
一个新的阶段[4]。目前关于其总黄酮的提取工艺研究
已比较成熟, 但其相关药理研究仍然缺乏, 尤其是牛
舌草总黄酮对缺血性心脏病的影响未见报道。本研究
采用大鼠冠状动脉左前降支结扎法制备心肌缺血/再
灌注 (ischemia/reperfusion, I/R) 损伤模型 , 观察牛
舌草总黄酮对 I/R 大鼠的作用, 并对其机制进行初步
探讨。

材料与方法
动物 Sprague Dawley (SD) 大鼠, 雄性, 240~
260 g, SPF 级, 北京维通利华实验动物技术有限公
司。许可证编号: SCXK (北京) 2012-0001。
牛舌草总黄酮提取 牛舌草购自新疆麦迪森维
药有限公司饮片厂, 产地: 巴基斯坦; 鉴定人为新疆
维吾尔自治区维吾尔医医院的艾尼瓦尔主任药师。取
粉碎的牛舌草 2 kg, 以 60% 乙醇为溶剂, 浸泡 6 h, 以
药材质量 6 倍量的 75% 乙醇为提取剂, 加热至 90 ℃,
回流提取 2 h, 提取 2 次, 合并提取液, 减压旋蒸回
收乙醇, 得浓缩液; 将得到的提取液浓缩到每毫升含
提取物 30 mg, 过滤后采用 D101 大孔树脂柱进行纯
化, 用 70% 乙醇洗脱, 收集乙醇洗脱液, 减压除乙醇
后, 真空冷冻干燥。利用分光光度法, 以芦丁为对照
品, 在波长 510 nm 处测定吸收度, 计算总黄酮含量
(约为 56.2%)。临用前以生理盐水溶解, 并以总黄酮
含量计, 配制成 5、15 和 25 mg·mL−1不同浓度稀释液,
按照 2 mL·kg−1 体重腹腔注射给予大鼠。
试剂 伊文思蓝、2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (2, 3,
5-triphenyltetrazolium chloride, TTC) 购自 Sigma 公
司; 乳酸脱氢酶 (lactic dehydrogenase, LDH)、天冬
氨酸转氨酶 (aspartate transaminase, AST) 购自北京
中生北控生物科技股份有限公司; 肌钙蛋白 (cardiac
Troponin-T, cTn-T)、白细胞介素 (interleukin, IL)
IL-1β, IL-6, 肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,
TNF-α) 检测试剂盒购自武汉华美生物工程有限公
司; Akt 抗体、Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) 抗体、
PI3 Kinase p85 (19H8) 抗体、Phospho-PI3 Kinase
p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) 抗体、Bcl-2 抗体、Bax 抗
体均购自 Cell Signaling Technology 公司; anti-rabbit
IgG 购自北京中衫金桥生物技术有限公司。其他试剂
均为国产或进口分析纯试剂。
实验仪器 ALC-V8 动物呼吸机 (上海奥尔科
特生物科技有限公司 ); SpectraMax M5 酶标仪
(Molecular Devices, USA); BeckMan Allegra X-22R
低温离心机 (Beckman, USA); BL-420S 生物机能试
验系统 (成都泰盟科技有限公司); TBA-420 全自动
生化仪 (Toshiba, 日本)。
动物分组 SD 大鼠随机分为 5 组: 假手术组
(sham)、模型组 (I/R)、牛舌草总黄酮 10 mg·kg−1 组
(BTF10)、牛舌草总黄酮 30 mg·kg−1 组 (BTF30) 和牛
舌草总黄酮 50 mg·kg−1 组 (BTF50), 每组 12 只动物。
心肌缺血/再灌注损伤模型制备 大鼠腹腔注射
3% 戊巴比妥钠 (0.2~0.3 mL·100 g−1 体重, 40~60
mg·kg−1) 麻醉。固定于手术台上, 针状电极插入四肢
皮下记录 II 导联心电图。连接呼吸机, 横向剪开胸部
皮肤, 逐层钝性分离肌肉, 暴露胸骨, 在胸骨左缘旁
0.5 cm 处, 第 4 肋间打开胸腔, 剪开心包, 暴露心脏,
撕开心包膜, 用带线缝合针在肺动脉圆锥和左心耳
之间, 距左冠状动脉根部 2~3 mm处进针, 结扎左冠
徐晓娜等: 牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制 · 877 ·


状动脉左前降支引起缺血, 假手术组大鼠除穿针不
予结扎外其他处理均相同。以 II 导联心电图 J 点弓背
抬高, T 波异常为结扎成功标志。缺血 30 min 后, 松
开结扎线, 同时腹腔注射给予相应剂量牛舌草总黄
酮或生理盐水, 进行再灌注 4 h。
II 导联心电图监测 手术前稳定 10 min 后正式
记录一段大鼠 II 导联心电图作为用药前对照, 手术
中连续记录至再灌注后, 再灌注 4 h 后再次记录大鼠
II 导联心电图, 读取 J 点反映 ST 段变化进行统计。统
计再灌注 30 min内大鼠心律失常评分, 按照 Lambeth
Convention 的规定进行心律失常评分[5]。0 分: 无心
律失常; 1 分: 偶发室性早搏 (3 次·min−1 或以上); 2
分: 频发室性早搏 (3 次·min−1 或以上); 3 分: 偶发
室性心动过速 (3 次·min−1 或以上); 4 分: 频发室性
心动过速 (3 次·min−1 或以上) 或偶发性心室纤颤
(3 次·min−1 以下); 5 分: 频发心室纤颤 (3 次·min−1 或
以上) 或死亡。
血流动力学测定 再灌注 4 h 后, 腹腔注射 3%
戊巴比妥钠麻醉, 连接呼吸机。分离左颈总动脉, 插
管至左心室, 连接压力换能器, 经载波放大器测定左
心室收缩末期压 (left ventricular systolic pressure,
LVSP) 和左心室舒张末期压力 (left ventricular end-
diastolic pressure, LVEDP), 再经微分器计算左心室
最大压力上升速率 [LVdp·(dtmax)−1], 以及左心室最大
压力下降速率 [LVdp·(dtmin)−1]。
血清心肌酶谱测定 完成血流动力学测定后, 腹
主动脉取血 2 mL, 室温凝聚 30 min 后, 5 000 r·min−1,
4 ℃离心 15 min, 取上清液, 全自动生化仪测定 LDH、
AST 的活性, ELISA 试剂盒检测 cTn-T。
心肌梗死指数测定 动物处死前, 部分动物再
次在原位置结扎左冠状动脉左前降支, 经下腔静脉
注射 1% 伊文思蓝 2 mL, 用于区分无蓝染缺血区和蓝
染非缺血区, 其中无蓝染缺血区心肌为危险区。处死
大鼠, 取出心脏, 以生理盐水冲洗干净余血, 在冠脉
结扎线下平行于冠状沟将心室等厚切成 1 mm 厚的 5
片, 放入 1% TTC溶液中, 于 37 ℃恒温避光水浴振摇
染色 30 min。正常心肌染为红色, 梗死区心肌不着色
而呈淡白色, 数码相机拍照, 应用 Imagepro plus软件
计算梗死面积百分比。
心肌组织 IL-1β, IL-6, TNF-α的测定 动物处死
前, 取部分动物左心室心肌组织, 加入 PBS缓冲液制
备 10% 匀浆, 5 000 r·min−1, 4 ℃离心 15 min, 取上清
液, 采用 ELISA 试剂盒检测 IL-1β, IL-6, TNF-α 等炎
性因子。
Western-blotting 分析 提取左心室心肌组织
总蛋白, 测定蛋白浓度, 加入 5 倍上样缓冲液, 沸水
浴 10 min。制备分离凝胶, 每孔上样 20 μg, 经 12%
SDS-PAGE 电泳后, 蛋白条带用半干法转移至 PVDF
膜上。膜用含 5% 脱脂奶粉的 TBS-T 溶液室温封闭
1 h; 根据目的蛋白可能存在的位置剪裁 PVDF 膜,
加入 Akt 抗体、Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) 抗
体、PI3Kinase p85 (19H8) 抗体、Phospho-PI3 Kinase
p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) 抗体、Bcl-2 抗体和 Bax
抗体, 4 ℃过夜; 辣根过氧化物酶标记的二抗 37 ℃作
用 1 h, 经TBS-T洗膜后, 采用ECL法检测蛋白条带。
统计学分析 结果均以 mean ± SEM 表示, 采用
单因素方差分析 (one-way ANOVA), 各组间差异采用
Dunnett’sposthoctest。P < 0.05 认为具有统计学意义。

结果
1 牛舌草总黄酮对缺血/再灌注 (I/R) 大鼠心电图
的影响
与假手术组比较, I/R 大鼠在心肌缺血期 30 min
内、再灌注 15 min 时, 心电图 ST 段和 T 波显著抬高,
再灌注后虽然有所回落, 但仍然显著高于其他组, 在
再灌注 30 min 内出现严重心律失常, 甚至死亡。牛舌
草总黄酮 10、30 和 50 mg·kg−1 在再灌注 15 min 可显
著抑制心肌 I/R 损伤引起的 ST 段升高, 并显著减少
心律失常发生的次数与严重程度, 高剂量组心律失
常评分在 2~3 分, 与模型对照组比较, 差异具有统
计学意义 (P < 0.05)。结果见图 1。
2 牛舌草总黄酮对 I/R 大鼠心肌梗死指数的影响
各组大鼠心脏伊文思蓝和 TTC 染色的代表见图
2A。结果显示, 缺血危险区 (area at risk, AAR) 占整
个左心室 (left ventricular, LV) 肌面积的比例在各组
间无显著差异, 提示结扎致缺血范围在各个组别间
是平行的, 手术操作一致性较好。I/R 可引起心肌大
面积梗死, I/R 组大鼠心肌梗死面积 (infarct size, IS)
占整个缺血危险区的比例高达 39.07%, 再灌注同时
分别给予牛舌草总黄酮 10、30 和 50 mg·kg−1 可显著
降低梗死范围至 23.69%、24.25% (P < 0.05) 和 18.46%
(P < 0.01)。结果见图 2。
3 牛舌草总黄酮对 I/R 大鼠心肌酶谱的影响
I/R处理大鼠血清中心肌标志酶LDH、AST、cTn-T
显著升高, 分别达到 209.7、1062 和 150.7 U·mL−1, 与
空白对照组比较有显著性差异 (P < 0.01)。再灌注同时
给予牛舌草总黄酮 10、30 和 50 mg·kg−1 能够明显减
少心肌标志酶 LDH、AST、cTn-T 漏出, 其中 LDH
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Figure 1 Typical ECG of different groups and effect of bugloss total flavonoids (BTF) on the change of J point of ECG (A) and arrhythmia
scores (B) in I/R rats. Data are expressed as mean ± SEM, n = 6. △△P < 0.01 vs sham group; *P < 0.05, **P < 0.01 vs I/R group


Figure 2 BTF decreased the infarct size in rats subjected I/R injury. Representative illustrations of heart sections stained by Evans
Blue and TTC (A). The AAR normalized to LV area (%) (B). The infarct size normalized to the AAR (%) (C). The results are
represented as mean ± SEM, n = 7. *P < 0.05, **P < 0.01 vs I/R group. IS: Infarct size; AAR: Area at risk; LV: Left ventricular

分别减少至 128.4, 105.7 及 96.8 U·mL−1 (P < 0.01);
AST 分别减少至 673.6, 445.1 及 518.1 U·mL−1 (P <
0.01); cTn-T 分别减少至 104.0, 61.73 (P < 0.05) 及
31.29 U·mL−1 (P < 0.01)。可见, 牛舌草总黄酮可明显
保护 I/R 大鼠心肌, 降低血清酶水平。结果见图 3。
4 牛舌草总黄酮对 I/R 大鼠血流动力学的影响
血流动力学测定结果显示, 缺血再灌注4 h后, I/R
组 LVSP 降至 90.53 mmHg (P < 0.01)、LVdp·(dtmax)−1
降至 472.3 mmHg·s−1 (P < 0.01), 提示缺血再灌注损伤
会导致大鼠左心室收缩功能严重受损; 再灌注同时
给予牛舌草总黄酮 30 和 50 mg·kg−1 能够明显改善左
心室的收缩功能, LVSP分别升至 116.1及 114.4 mmHg
(P < 0.01, P < 0.05), LVdp·(dtmax)−1 分别升至 697.6 和
717.1 mmHg·s−1 (P < 0.01)。同时, I/R 组 LVEDP 上升
至 10.53 mmHg (P < 0.01), LVdp/dtmin 上升至 −329.8
mmHg·s−1 (P < 0.01), 提示缺血再灌注损伤会导致大
鼠左心室舒张功能障碍, 再灌注同时给予牛舌草总
黄酮 30 和 50 mg·kg−1 能够使 I/R 大鼠的 LVEDP 分别
降至 4.844 和 4.842 mmHg (P < 0.01), LVdp·(dtmix)−1 分
别降至−521.7 和−481.0mmHg·s−1 (P < 0.01, P < 0.05),
明显改善左心室的舒张功能。结果见图 4。
5 牛舌草总黄酮对 I/R大鼠心肌 IL-1β, IL-6, TNF-α
的影响
I/R 组大鼠心肌组织每微克蛋白中炎症因子 IL-1β、
IL-6、TNF-α 含量分别达到 349.9、190.8 及 624.9 pg,
与空白对照组相比显著升高 (P < 0.01); 牛舌草总黄
酮 30 mg·kg−1 可使 I/R 大鼠心肌组织每毫克蛋白中
IL-1β 含量降至 223.6 pg (P < 0.01); 牛舌草总黄酮
徐晓娜等: 牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制 · 879 ·


50 mg·kg−1可使 I/R大鼠心肌组织每毫克蛋白中 IL-6、
TNF-α的含量分别降至 109.4和 328.6 pg (P < 0.05, P <
0.01), 提示其可减轻 I/R 损伤导致的大鼠心肌的炎症
反应。结果见图 5。


Figure 3 BTF reduced biochemical marker enzymes in serum of I/R rats. Effects of BTF on serum levels of LDH (A), AST (B),
cTn-T (C) in rat subjected to I/R injury. Data are expressed as mean ± SEM, n = 6. △△P < 0.01 vs sham group; *P < 0.05, **P < 0.01 vs
I/R group. LDH: Lactic dehydrogenase; AST: Aspartate transaminase; cTn-T: Cardiac Troponin-T


Figure 4 Effects of BTF on LVSP (A), LVdp·(dtmax)−1 (B), LVEDP (C), LVdp·(dtmix)−1 (D) of rat subjected to I/R injury. Data are ex-
pressed as mean ± SEM, n = 6. △△P < 0.01 vs sham group; *P < 0.05, **P < 0.01 vs I/R group. LVSP: Left ventrieular systolic
pressure; LVEDP: Left ventricular end diastolic pressure; LVdp·(dtmax)−1: The rise velocity of left ventricular; LVdp·(dtmix)−1: The decline
velocity of left ventricular
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Figure 5 BTF suppresses I/R-induced IL-1β (A), IL-6 (B),
TNF-α (C) expression in heart tissue of I/R rats. All values
were expressed as mean ± SEM, n = 6. △△P < 0.01 vs sham
group; *P < 0.05, **P < 0.01 vs I/R group. IL-6: Interleukin-6;
IL-1β: Interleukin-1β; TNF-α: Tumor necrosis factor-α

6 牛舌草总黄酮对 I/R 大鼠心肌 Bcl-2、Bax 表达及
PI3K/Akt 信号通路的影响
免疫印迹结果显示, I/R 大鼠心肌组织凋亡抑制
蛋白 Bcl-2 表达减少, 凋亡促进蛋白 Bax 表达增多,
牛舌草总黄酮各给药组可以剂量依赖性地促进 Bcl-2
表达、降低 Bax 的表达, 提示牛舌草总黄酮能够抑制
I/R 损伤导致的心肌细胞凋亡。另外, 牛舌草总黄酮
可以增加 I/R 大鼠心肌组织 PI3K 和 Akt 的磷酸化水
平, 提示其对 I/R 大鼠心肌的保护作用, 可能是通过
上调 PI3K/Akt 通路而发挥的。结果见图 6。

讨论
本研究采用结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支造
成急性心肌梗死, 并在预定时间内恢复血供予以再

Figure 6 Effects of BTF on I/R induced expressions of
Bax/Bcl-2 (A), P-PI3K/PI3K (B), P-Akt/Akt (C). Results are
presented as mean ± SEM, n = 4. △P < 0.05, △△P < 0.01 vs sham
group; *P < 0.05 vs I/R group

灌注, 这是一种经典的模拟人类心肌梗死及溶栓再
通治疗的实验研究方法。缺血心肌再灌时, 心肌中的
氧张力降低或无氧代谢会加强, 出现了电位差, 即可
徐晓娜等: 牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制 · 881 ·


出现 ST 段的抬高。缺血再灌注过程中, Na+/H+ 交换
活性加强、心肌细胞内游离脂肪酸增加、血小板激活
因子释放增多、冠脉内皮受损以及肾上腺素浓度升高
等都可能导致心律失常发生[6]。本实验结果显示, 牛
舌草总黄酮明显改善心肌 I/R 大鼠心电图 ST 段的抬
高, 减少心律失常发生的次数和严重程度, 降低心律
失常的评分, 降低心肌梗死指数, 并明显改善左心室
的收缩及舒张功能, 减轻心肌 I/R 损伤。
心肌酶谱是指广泛存在于心肌的多种酶的总称,
一般包括 LDH、AST 和 cTn-T 等。心肌损伤或者坏
死后心肌细胞膜通透性增加或者破裂, 这些酶不同
程度地渗漏到血液中[7]。本实验结果显示, 牛舌草总
黄酮能够降低 I/R 大鼠血清中 AST、LDH 和 cTn-T
水平, 对受损心肌起保护作用。
炎症反应是心肌缺血再灌注损伤的重要因素。在
再灌注期各种炎症因子如 TNF-α、IL-1β、IL-6 释放
能刺激血管内皮细胞和白细胞表达大量黏附分子、趋
化因子, 致使大量白细胞黏附、聚集, 引起微循环障
碍、活性氧类增加, 导致心肌细胞损伤, 还可通过激
活 Bax 和 Bcl-2, 促进心肌细胞凋亡[8]。促炎细胞因
子进一步促进炎症细胞黏附和浸润, 阻塞毛细血管,
产生血管活性物质, 释放细胞毒性物质, 从而导致组
织急性损伤[9]。牛舌草总黄酮可以降低 I/R 大鼠心肌
中炎症因子的水平, 这可能是其发挥抗心肌 I/R 损伤
的保护机制之一。
Bcl-2 家族是于 1984 年由 Nakmaura 等首先在 B
细胞滤泡性淋巴瘤中发现的抗细胞凋亡基因, 按其功
能可分为抗凋亡的 Bcl-2 亚族和促凋亡的 Bax 亚族[10],
心肌 I/R 损伤会导致 Bax 蛋白表达增多。PI3K/Akt
信号通路被认为是细胞内最重要的生存通路, 其能
够抑制细胞凋亡[11]。PI3K 下游有诸多效应分子, Akt
处于这一通路的中心环节, 是其最主要的靶酶, 传递
由 PI3K 始动的信息。Akt 激活后, 能够增加 NOS
的产生; 同时磷酸化 GSK-3β, 使之失活, 丧失其诱
导细胞凋亡的作用; p-Akt 可以抑制促凋亡蛋白 Bax
的形成, 达到抑制凋亡的目的[12]。牛舌草总黄酮上调
了 Bcl-2 和 p-PI3K、p-Akt 蛋白的表达, 抑制 I/R 损伤
过程中心肌细胞的凋亡, 从而发挥保护作用。
综上所述, 维吾尔药牛舌草总黄酮可以减轻大
鼠心肌的 I/R 损伤, 其作用机制可能与上调 PI3K/Akt
信号通路, 抑制炎症因子分泌, 降低心肌细胞凋亡相
关。
References
[1] Hu XM, Zhang WK, Song LR, et al. Chinese material
medica: Uygur medicine volume (中华本草: 维吾尔药卷)
[M]. Shanghai: Shanghai Scientific and Technical Publishers,
2005: 99.
[2] Abudureyimu, Hamulati. ESR study on the antioxidant
effect of abnormal savda munziq mature and cleaning agent [J].
Tradit Chin Drug Res Clin Pharmacol (中药新药与临床药理),
2001, 12: 420−422, 451.
[3] Li L, Harmurat U, Ji YL, et al. The influence of abnormal
savda munziq and mushily on oxidative stress induced damage
and Bcl-2 expression in lymphocyte [J]. Chin J Exp Tradit
Med Form (中国实验方剂学杂志), 2007, 13: 45−49.
[4] Palida A, Cong YY, Mirensha Y, et al. Optimization of
ultrasound extraction process of total flavonoids from Anchusa
italica by response surface methodology [J]. Chin J Exp
Tradit Med Form (中国实验方剂学杂志), 2013, 19: 48−51.
[5] Walker MJ, Curtis MJ, Hearse DJ, et al. The lambeth
conventions: guidelines for the study of arrhythmias in
ischaemia infarction, and reperfusion [J]. Cardiovasc Res,
1988, 22: 447−455.
[6] Mackiewicz U, Gerges JY, Chu S. Ivabradine protects against
ventricular arrhythmia in acute myocardial infarction in the
rat [J]. J Cell Physiol, 2014, 229: 813−823.
[7] Cordwell SJ, Edwards AV, Liddy KA, et al. Release of
tissue-specific proteins into coronary perfusate as a model for
biomarker discovery in myocardial ischemia/reperfusion injury
[J]. J Proteome Res, 2012, 11: 2114−2126.
[8] Ma J, Qiao Z, Xu B. Effects of ischemic precondition on
myocardium Caspase-3, SOCS-1, SOCS-3, TNF-α and IL-6
mRNA expression levels in myocardium IR rats [J]. Mol Biol
Rep, 2013, 40: 5741−5748.
[9] Ahn J, Kim J. Mechanisms and consequences of inflammatory
signaling in the myocardium [J]. Curr Hypertens Rep, 2012,
14: 510−516.
[10] Xia MY, Wang MW, Wang HR, et al. Mechanism of
dracorhodin perchlorate-induced HeLa cell apoptosis [J].
Acta Pharm Sin (药学学报), 2004, 39: 966−970.
[11] Haubner BJ, Neely GG, Voelkl JG, et al. PI3Kgamma
protects from myocardial ischemia and reperfusion injury
through a kinase-independent pathway [J]. PLoS One, 2010,
5: e9350.
[12] Zhang MQ, Zheng YL, Chen H, et al. Sodium tanshinone IIA
sulfonate protects rat myocardium against ischemia-reperfusion
injury via activation of PI3K/Akt/FOXO3A/Bin pathway [J].
Acta Pharmacol Sin, 2013, 34: 1386−1396.