全 文 :Antioxidant Activity of 22 Chinese Herbal Medicines for Anti - cancer
ZHANG Xin - guo1,LIU Ying - juan1,CAO Xin - zhang1,ZHANG Chun - sheng1,KUANG Yan - bei2
(1. College of Life Science and Technology,Lanzhou University of Technology,Lanzhou 730050,China;
2. South China Normal University,Guangzhou 510630,China)
Abstract:Objective:In this study,22 Chinese herbal medicines for anti - cancer were developed for the study of its an-
tioxidant activity. Methods:The antioxidant activities of samples were evaluated by DPPH method;phenols,flavonoids
contents and total reducing power were estimated by using the Folin - Ciocalteu reagent,aluminum salt colorimetric
method and ferric - reducing antioxidant power assay (FRAP). Results:The results confirmed that 90. 09% of the medi-
cine had characterized the antioxidant activity with more than 50%,which included eight kinds of plant materials such
as Rhizoma Curcumae,Rhizoma Polygoni Cuspidati,Wild Skullcaps,Radix Paeoniae Alba ,Fern ,Salviamiltiorrhiza,
Radix Dipsaci Asperoidis,Curcuma longa demonstrated better antioxidant activity(activity > 90%). Wild Skullcaps
demonstrated the best antioxidant activity with the lowest IC50 value of 0. 05g /L,the highest phenolic and flavonoid con-
tents of 5240μg /L and 83210μg /L. Conclusion:Each sample for anti - cancer has a strong antioxidant activity except
for the Coix seed and Poria,which confirms natural antioxidant and antitumor effect has a certain correlation,but its
mechanism needs further research. In this study,it is possible to find antioxidants and antioxidant - based anticancer
drugs develop from broad anti - tumor natural resources providing an experimental basis.
Key words:Chinese medicinal herb;Antioxidant activity;DPPH;FRAP;Phenolic content;
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
Flavonoid content
单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠氧自由基代谢
及肺组织病理变化的实验研究
李杨,明海霞*
(甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的:观察单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠肺组织和血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
(MDA)、一氧化氮(NO)水平及肺组织病理变化的影响。方法:Wistar大鼠 100 只随机分为对照组、模型
组、辽细辛组、单叶细辛组,后 3 组采用中医理论制作大鼠寒饮射肺模型,各组分别灌胃给予中药水提取
液及生理盐水,1 次 /天,第 7、14、28 天各组分别随机选取 5 只大鼠,处死,取肺组织行 HE 染色,检测肺
部炎症程度;其余大鼠连续灌胃 28 天,检测比较肺组织、血清 SOD、MDA、NO 含量。结果:与对照组比
较,模型组大鼠肺部出现明显的炎症改变,肺组织、血清 SOD、NO含量均降低,MDA含量明显升高,差异
有统计学意义(P < 0. 05);与模型组比较,给药组肺部炎症程度较模型组明显减轻,肺组织、血清 SOD、
NO含量均显著升高,MDA含量显著降低,差异有统计学意义(P < 0. 05);两治疗组大鼠各项指标比较
差异无统计学意义(P < 0. 05)。结论:单叶细辛调节 SOD、MDA、NO的表达,提高抗氧化能力,减轻寒饮
射肺模型大鼠肺部炎症,对肺组织具有保护作用。
关键词:细辛;寒饮射肺证;炎症;超氧化物歧化酶;丙二醛;一氧化氮
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2392(2015)05 - 0035 - 03
收稿日期:2014 - 12 - 03 修回日期:2015 - 01 - 09
基金项目:甘肃省教育厅基金资助项目(02B4 - 04)
作者简介:李杨(1979 -),女,硕士,讲师,主要从事中西医结合教学与
科研工作。
* 通讯作者:明海霞(1976 -),女,博士研究生,副教授,主要从事中西
医结合、中药学教学与科研工作。
寒饮射肺证为临床常见的慢性肺部疾患,它进展
迅速、病死率高、治疗效果欠佳。目前,临床上尚无有
效的治疗方法遏制其发生与发展,笔者前期研究[1]表
明,单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠呼吸和血气指标
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有显著的疗效,改善其呼吸功能,本研究在有关文献和
前期实验研究的基础上,通过观察寒饮射肺模型大鼠
肺组织及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
(MDA)、一氧化氮(NO)含量,肺组织病理变化,进一
步探讨单叶细辛对寒饮射肺证作用机制,现将实验方
法及结果报道如下。
1 实验材料
1. 1 动物
SPF 级 7 ~ 8 周龄 Wistar 大鼠 100 只,体质量
(200 ± 20)g,雌雄兼用,实验动物质量合格证号:SCXK
(甘)2013 - 0004,购自甘肃中医学院 SPF 级科研实验
动物中心,并在该实验室饲养。
1. 2 试剂、药品、仪器
SOD、MDA、NO试剂盒均购自南京建成生物工程
研究 所,批 号 (130814、130812、130811、130809、
130804、130805),乌拉坦(25%氨基甲酸乙酯),(中国
医药集团上海化学试剂公司,批号 C20130305),辽细
辛、单叶细辛由甘肃中医学院附属医院中草药房提供,
经甘肃中医学院中药教研室黄世佐教授鉴定,本院中
药化学教研室用水提法模拟临床用药剂型,制备成浓
度为 1g /mL的溶液备用。BioLap420E 生物信号监测
系统,BioLap2000 图像分析系统(成都泰盟生物科技
公司),721 分光光度计(上海安泰分析仪器有限公
司),超速离心机(金坛市恒丰仪器厂),JA1003 型电
子天平(上海天美仪器厂),Nikon YS100 光学显微镜
(日本),JJ - 2 组织捣碎匀浆机(金坛市顺华仪器有限
公司)。
2 实验方法
2. 1 动物分组、给药与模型建立
大鼠在 SPF条件下,普通饲料喂养一周随机分为
对照组、模型组、辽细辛组、单叶细辛组,除对照组外,
其余各组造模,每组 25 只;造模成功后第 2 天分别灌
胃给予生理盐水及中药,对照组、模型组(0. 9% NaCl
溶液 1mL /kg剂量),单叶细辛组与辽细辛组(中药水
提取液 1mL /kg 剂量),1 次 /天,分别于 7、14、28 天各
组随机选取 5 只大鼠处死,其余大鼠连续灌胃 28 天,
按要求进行检测。动物常规消毒,以 25% 乌拉坦
(4mL /kg)腹腔注射麻醉,取仰卧位固定,颈部正中切
开皮肤,钝性分离暴露正中气管、左侧颈总动脉,气管
于环状软骨下方 0. 5cm 处横向切开气管前壁,再向头
端作纵向切口,使切口呈倒“⊥”字形,插“Y”型气管
插管,固定后,吸净血液,右侧管经张力换能器与 Bio-
Lap420E生物信号监测系统相连;分离左侧颈总动脉
备用,用 20 号套管针穿刺置管并结扎固定,以备采血
检测;待呼吸平稳后,左侧管插入软塑料内套管,固定
后按 2. 5mL /kg灌注 7℃冷生理盐水入肺内,保留 30s
后抽出,5min 后重复灌洗 1 次,连续 5 次,按上述方
法,寒饮射肺动物模型复制成功[2]。
2. 2 检测指标
左侧颈总动脉采血,分离血清备用;取肺组织制备
匀浆,上清液备用。竖着切取右肺下叶组织,用 10%
福尔马林固定,常规石蜡包埋切片,HE 染色,参照
Szapie[3]等的方法用 HE 染色评定肺部炎症程度;
SOD、MDA按试剂盒说明书进行化学比色检测,NO 采
用硝酸还原酶法按试剂盒说明书进行化学比色检测。
2. 3 统计学处理
所有数据用 SPSS17. 0 统计软件处理,用均数 ±标
准差(珋x ± s)表示,单因素方差分析统计,以 P < 0. 05
表示差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 动物一般情况观察
对照组大鼠毛发光泽,呼吸平稳,饮食正常,体质
量渐增,活泼好动;模型组大鼠蜷卧、撮毛,鼻分泌物增
多,气促,偶可闻及气道痰鸣音,鼻部、唇周及爪甲紫
绀,饮食减少,活动能力下降;两中药组各症状有所好
转,毛发顺滑,咳嗽气促减轻,饮食增多,体质量有所上
升,活动能力增强。
3. 2 各组大鼠肺组织 SOD、MDA、NO含量的影响(见
表 1)
表 1 各组大鼠肺组织 SOD、MDA、NO含量比较(珋x ± s,n = 10)
组别 SOD(U /mg) MDA(nmol /g) NO(umol /g)
对照组 32. . 401 ± 2. 646 4. 791 ± 0. 521 16. 579 ± 0. 387
模型组 13. 635 ± 0. 754* 14. 067 ± 0. 591* 8. 268 ± 0. 331*
辽细辛组 25. 567 ± 0. 339◇ 7. 787 ± 0. 373◇ 13. 061 ± 0. 577◇
单叶细辛组 24. 328 ± 0. 923 ◇ 8. 377 ± 0. 317◇ 12. 714 ± 0. 276◇
注:与对照组比较,* P < 0. 05;与模型组比较,◇P < 0. 05
3. 3 各组大鼠血清 SOD、MDA、NO 含量的影响(见
表 2)
表 2 各组大鼠血清 SOD、MDA、NO含量比较(珋x ± s,n = 10)
组别 SOD(U /mL) MDA(nmol /mL) NO(umol /g)
对照组 146. 861 ±0. 563 5. 917 ±0. 406 106. 905 ±0. 247
模型组 105. 279 ±0. 741* 16. 905 ±0. 266* 68. 739 ±0. 445*
辽细辛组 138. 319 ±0. 456◇ 10. 976 ±0. 284◇ 88. 182 ±0. 087◇
单叶细辛组 137. 862 ±0. 104◇ 11. 201 ±0. 084◇ 87. 843 ±0. 128◇
注:与对照组比较,* P < 0. 05;与模型组比较,◇P < 0. 05
与对照组比较,模型组大鼠肺组织、血清 SOD、NO
含量明显降低,MDA、含量明显升高,差别有统计学意
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义(P < 0. 05),表明造模成功;与模型组比较,两给药
组大鼠肺组织、血清 SOD、NO 含量均明显升高,MDA
含量明显下降,说明药物治疗有效;两细辛组比较,差
异无统计意义(P > 0. 05),表明单叶细辛药物疗效与
辽细辛相近。
3. 4 肺组织病理学改变
对照组各时间段大鼠肺表面光滑,粉红色,弹性
好,肺内结构清晰;模型组 7 天肺表面有散在出血点,
轻度水肿,14 天出现大小不等的结节,肺泡间隔增宽、
充血、水肿;28 天肺硬度增加,胶原沉积,出现大量结
节,灰白色,肺泡壁明显增厚,部分肺泡腔萎缩、消失,
中药组各时间段均有肺部炎症,较模型组减轻,但比对
照组严重,各组大鼠肺部炎症程度比较见表 3。
表 3 各组大鼠不同时间段肺部炎症程度比较(珋x ± s,n = 5)
组别 7d 14d 28d
对照组 0. 000 ± 0. 000 0. 000 ± 0. 000 0. 000 ± 0. 000
模型组 2. 631 ± 0. 344* 2. 708 ± 0. 232* 2. 852 ± 0. 033*
辽细辛组 1. 645 ± 0. 421◇ 1. 105 ± 0. 034◇ 0. 736 ± 0. 045◇
单叶细辛组 1. 805 ± 0. 149◇ 1. 324 ± 0. 197◇ 0. 821 ± 0. 085◇
注:与对照组比较,* P < 0. 05;与模型组比较,◇P < 0. 05
4 讨论
寒饮射肺证模型大鼠肺组织出现炎性细胞浸润,
炎症过程中释放大量细胞因子、炎性介质、氧自由基
等,促使了肺泡炎的发生,氧自由基与炎症密切相关,
能破坏生物膜和损害细胞功能。SOD 是机体有效清
除活性氧的重要酶类之一,能清除生物氧化过程中产
生的超阴离子,可阻止氧自由基的连锁反应,清除氧自
由基,保护细胞免受损伤,是体内抗氧化酶体系的重要
组成部分,它的测定可间接反映机体清除氧自由基的
能力,细胞受自由基攻击的严重程度[4 - 5];MDA 是氧
自由基攻击生物膜中多不饱和脂肪酸,引起脂质过氧
化反应,而形成的过氧化脂质降解产物,是氧化过程中
最终产物之一,其含量可以反映机体内脂质过氧化程
度,间接反映细胞损伤程度[6];NO 主要来自 L -精氨
酸末端胍基的氮原子,由一氧化氮合酶(NOS)催化左
旋精氨酸(L -精氨酸)与氧分子而成,是一种非常重
要的内皮衍生舒张因子,由肺泡巨噬细胞产生,它能激
活鸟苷酸环化酶,使血管内环磷酸鸟苷水平升高,从而
使血管扩张,而其含量释放减少,又使其舒张支气管和
肺血管平滑肌的因素,以及对血管平滑肌增殖的抑制
作用减弱,从而导致慢性炎症的产生[7 - 8]。
本实验采用中医理论制作大鼠寒饮射肺模型,结
果显示,模型组大鼠一般状况符合寒饮射肺证表现,
SOD、NO含量下降,MDA 含量升高;两细辛给药组可
使寒饮射肺证模型大鼠 SOD、NO含量升高,降低 MDA
含量。提示单叶细辛调节 NO 代谢及提高抗氧化能
力,增加肺组织抗氧化酶的活性,降低氧化应激的损
害,通过调节肺组织氧化 /抗氧化系统的平衡,抑制肺
部炎症反应的发生和发展,缓解肺泡炎,减轻肺组织病
理改变而起到治疗作用,单叶细辛药物疗效与辽细辛
相近。
参考文献:
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