全 文 ：·研究原著 · 文章编号:1000-2790(2008)13-1175-03
反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含量
吴振刚 1 ,王庆伟 2 ,刘雪英3 ,李军昌 4 ,钱晓宏 2 ,路丽华3 ,王巧峰 3 ,李晓晔 3
(1华北煤炭医学院药学系 ,河北 唐山 063000, 2第四军医大学唐都医院药剂科 ,陕西 西安 710038, 第四军医大学:3药学系药物
化学教研室 , 4西京医院中医科 ,陕西 西安 710033)
收稿日期:2008-01-08;　接受日期:2008-03-04
作者简介:吴振刚.硕士 ,讲师.Tel:(0315)3725674　Email:wzgrh@si-
na.com
Determinationofmethyleugenoland
safroleinessentialoilofAsarum by
RP-HPLC
WUZhen-Gang1 , WANGQing-Wei2 , LIUXue-Ying2 , LIJun-
Chang4 , QIANXiao-Hong2 , LULi-Hua3 , WANGQiao-Feng3 , LI
Xiao-Ye3
1DepartmentofPharmacy, NorthChinaCoalMedicalColege,
Tangshan063000, 2DepartmentofPharmacy, Tangduhospital,
FourthMilitaryMedicalUniversity, Xian710038, 3Department
ofMedicinalChemistry, SchoolofPharmacy, 4DepartmentofTra-
ditonalChineseMedicine, Xijinghospital, FourthMilitaryMedi-
calUniversity, Xian710033, China
【Abstract】AIM:Toestablishareversed-phasehighperform-
anceliquidchromatographic(RP-HPLC)methodforsimultaneous
determinationofmethyleugenolandsafroleintheessentialoilof
Asarum.METHODS:Themobilephasewasmethanol-water
(80∶20), withtheflowrateasabout1mL/min.InertsilODS-
3 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)columnwasusedandthede-
tectionwavelengthwas250 nm.RESULTS:Thecalibration
curveswaslinearintheconcentrationrangeof19.28-462.72
μg/mLformethyleugenol. Theregression equation:Y=
46156.59X+32840.02 (r=0.9999, n=5).Thecalibra-
tioncurveswaslinearintheconcentrationrangeof11.75-
471.20 mg/mLforsafrole.Theregressionequation:Y=
29591.52 X-75017.20 (r=0.9999 , n=5).Theaverage
recoveryofmethyleugenolandsafrolewas99.95%and100.03%
respectively.Therelativestandarddeviations(RSD) were
0.97% and0.68% respectively.CONCLUSION:Thismethod
issimple, quickandaccurateforthesimultaneousseparationand
determinationofmethyleugenolandsafrole.
【Keywords】essentialoilofasarum;methyleugenol;safrole;
HPLC
【摘　要】目的:以陕西洛南产北细辛为研究对象 , 采用反相
高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含
量 , 以满足质量控制的要求.方法:以甲醇-水(80∶20)为流动
相 , 流速 1 mL/min, 经 InertsilODS-3(4.6 mm×250 mm,
5μm)色谱柱分离 ,于 250 nm波长检测.结果:甲基丁香
酚及黄樟醚的分离效果良好.甲基丁香酚在 19.28 ～
462.72 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系 , 回归方程为:
Y=46156.59X+32840.02(r=0.9999 , n=5);黄樟醚在
11.78 ～ 471.20 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系 , 回
归方程为:Y=29591.52 X-75017.20(r=0.9999 , n=
5).甲基丁香酚和黄樟醚的平均回收率分别为 99.95%和
100.03%, 相对标准偏差分别为 0.97%和 0.68%.结论:本
法可同时测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚的含量 , 为
质量控制提供依据 , 方法简便 、快速 , 准确.
【关键词】反相高效液相色谱;细辛挥发油;甲基丁香酚;黄樟
醚
【中图号】R284.2 【文献标识码】A
0　引言
细辛主要有效成分为挥发油 ,甲基丁香酚和黄樟
醚是挥发油中的主要成分.甲基丁香酚有麻醉和镇
痛作用 , 黄樟醚为广谱抗霉菌成分.但文献报
道 [ 1 -2] ,两者的代谢产物均可引起大鼠的癌变.为了
控制细辛挥发油的质量 ,我们以陕西洛南产北细辛为
研究对象 ,建立了 HPLC法同时测定细辛挥发油中甲
基丁香酚和黄樟醚的含量.该法简便快速 ,结果准确
可靠.
1　材料和方法
1.1　材料　SHIMADZULC-2010ATH高效液相色谱
仪及其色谱工作站;挥发油提取器(容量 2 L,西安远
志公贸有限责任公司);电子分析天平 (梅特勒公
司);北细辛(购于陕西西安市药材公司 ,产地陕西洛
南);甲基丁香酚对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号:130555-200501);黄樟醚对照品(四川宜宾香料
厂 ,含量:98.8%);甲醇(色谱纯 , Fisher公司),色谱
用水为双蒸水.
1.2　方法
1.2.1　色谱条件　色谱柱:IinertsilODS-3(4.6 mm×
250mm, 5 μm);流动相:甲醇-水 (80∶20);流速:
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1 mL/min;检测波长:250 nm,进样量:20 μL,温度:
室温.
1.2.2　对照品储备液及供试品溶液的制备　精密称
量甲基丁香酚对照品约 19.28 mg,黄樟醚对照品
23.56 mg,分别置 25 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,制成对照品溶液 ,避光保存备用.精
密量取细辛挥发油 100.05mg置 25 mL的量瓶中 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量取 2mL置 10mL的量
瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液.
2　结果
2.1　甲基丁香酚及黄樟醚含量测定方法建立
2.1.1　方法专属性　分别取适当浓度的甲基丁香酚
对照品溶液 、黄樟醚对照品溶液 、供试品溶液 ,在上述
色谱条件下分别进样 ,记录色谱图(图 1).从图中可
以看出甲基丁香酚的保留时间为 7.55min,黄樟醚的
保留时间为 11.65 min,其他组分对测定无干扰.
A:甲基丁香酚对照品;B:黄樟醚对照品;C:细辛挥发油甲醇溶液.
图 1　色谱图
2.1.2　标准曲线制备与线性考察　精密量取甲基丁
香酚对照品储备液 0.25, 0.5, 1, 3和 6mL,分别置于
10 mL的容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀.分别吸取
上述溶液 20 μL注入液相色谱仪 ,记录峰面积 ,以峰
面积 Y对浓度 X作图 ,甲基丁香酚峰面积在 19.28 ～
462.72 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系 ,回归方
程为:Y=46156.59 X+32840.02(r=0.9999 , n=5).
精密量取黄樟醚对照品储备液 0.125, 0.25, 0.5 , 1, 3
和 5 mL,分别置 10mL的容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀.分别吸取上述溶液 20 μL进样 ,记录峰面
积 ,以峰面积 Y对浓度 X作图 , 黄樟醚峰面积在
11.78 ～ 471.20 mg/L浓度范围内呈良好的线性关
系 ,回归方程为:Y=29591.52 X-75017.20(r=
0.9999, n=5).
2.1.3　精密度考察　取混合对照品溶液(含甲基丁
香酚 77.12 mg/L,黄樟醚 94.24 mg/L)同一天连续
进样 5次 ,进样量 20μL,测定峰面积 ,计算甲基丁香
酚黄和樟醚的 1d内 RSD值分别为 0.22%, 0.28%.
连续 3 d进样 5次 ,进样量 20 μL,测定峰面积 ,计算
甲基丁香酚黄和樟醚的 3d间 RSD值分别为 0.26%,
0.34%.结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密
度.
2.1.4　稳定性试验　取供试品溶液 ,在配制后 0, 4,
8和 24 h于同一色谱条件下分别进样 ,甲基丁香酚 、
黄樟醚峰面积的 RSD分别为 0.32%, 0.41%.结果
表明样品溶液在室温下 24h内稳定.
2.1.5　回收率实验 　精密称量同一批 (批号
20070912)已知含量的挥发油 10 mg平行 6份 ,分成
3组 ,每组 2份 ,分别加入对照品溶液(甲基丁香酚
308.48 mg/L,黄樟醚 282.72mg/L)0.25, 0.5及 1.0
mL.甲醇溶解定量至 25 mL,摇匀 ,分别进样 20 mL,
记录色谱图 ,计算甲基丁香酚和黄樟醚的回收率(表
1, 2).
表 1　甲基丁香酚的加样回收率
样品取样量
(mg)
样品含量
(μg)
标品加入量
(μg)
测出量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
10.21 5405.17 77.12 78.43 101.70
10.84 5738.70 77.12 76.15 98.74
10.03 5309.88 154.24 153.89 99.77 99.95 0.97
10.07 5331.06 154.24 154.13 99.93
10.33 5468.70 308.48 307.44 99.66
10.74 5685.76 308.48 308.21 99.91
表 2　黄樟醚的加样回收率
样品取样量
(mg)
样品含量
(μg)
标品加入量
(μg)
测出量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
10.21 568.70 70.68 71.18 100.71
10.84 603.79 70.68 70.10 99.18
10.03 558.67 141.36 141.02 99.76 100.03 0.68
10.07 560.90 141.36 142.75 100.98
10.33 575.38 282.72 282.23 99.83
10.74 598.22 282.72 281.97 99.73
2.2　挥发油的提取及含量测定
2.2.1　细辛挥发油的提取　将 1.0 kg北细辛粉碎
后装入挥发油提取器中 ,加适量水浸润 2h,通入温度
为 120℃的水蒸汽 , 蒸汽压力 0.02 kPa,蒸馏 3 h,
25℃冷凝回收油水混合液 ,过滤后经油水分离器分
离 ,无水硫酸钠干燥后得挥发油.挥发油为淡黄色透
明油状液体 ,具有特殊浓郁香味 ,得油率约 2.4%.
2.2.2　挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚的含量测定　
分别取对照品溶液和供试品溶液各 20 μL,注入液相
色谱仪 ,记录峰面积 ,按外标法计算含量(表 3).根
据以上 3批样品的检测结果 ,陕西洛南产北细辛地下
部分的挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚含量分别为
529.92和 5.55 mg/g.
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表 3　挥发油样品中甲基丁香酚和黄樟醚含量测定结果
批号 甲基丁香酚含量(mg/g)
黄樟醚含量
(mg/g)
RSD(%)
甲基丁香酚 黄樟醚
970912 529.42 5.57
970924 532.59 5.45 0.45 1.45
971116 527.74 5.42
3　讨论
细辛虽属常用中药 ,但因其毒性较大 , 中医早
有细辛不过钱的说法 ,我国历版药典也均规定常
用量为 1 ～ 3 g.目前对细辛的毒性大小存在很大争
议 ,但普遍认为细辛的毒性来源于所含挥发油中的主
要成分甲基丁香酚和黄樟醚 [ 3] .现代药理学认为甲
基丁香酚是细辛镇咳祛痰 、镇痛和麻醉的主要成
分 [ 4] ;黄樟醚有良好的抗真菌作用 [ 5] ,并且至今也未
见长期接触(比如种植细辛的员工)或使用细辛而导
致癌症的流行病学的报道 ,因此安全而有效的使用细
辛的前提是建立细辛及其制品的质量控制标准.
细辛在传统的汤剂应用中因其用量小和以挥发
油作为主要药效物质 ,一般在煎煮时后下 ,而在大剂
量应用时为了减小毒性而长时间高温度煎煮以减小
挥发性成分.在现代中药制药工业中 ,一般先提取挥
发油 ,在制剂工艺的最后阶段再加入挥发油 ,这样既
可节省资源又可以保证药物的疗效.此外 ,可入药的
细辛品种和产地不同 ,总挥发油的含量差异较大 ,甲
基丁香酚和黄樟醚的含量也有很大的差异[ 6-7] .细
辛地上部分含用马兜铃酸 , 2005版药典开始规定不
使用地上部分[ 8] ,但是地上部分也含有挥发油 ,为了
充分利用细辛资源 ,利用细辛地上部分提取的挥发油
开始面市.因此建立 HPLC测定细辛挥发油中的主
要成分甲基丁香酚和黄樟醚的含量很有必要.
细辛挥发油中的主要成分甲基丁香酚和黄樟醚
含量的测定主要采用气相色谱法 [ 6, 9] ,我们首次采用
反相高效液相色谱同时测定细辛挥发油中的甲基丁
香酚和黄樟醚.甲基丁香酚的最大吸收波长为 282
nm,黄樟醚的最大吸收波长为 250 nm,因挥发油中黄
樟醚含量相对较低 ,因此在测定时选择 250 nm为测
定波长.结果表明本方法简便 、快速 ,准确.可为建
立细辛挥发油的质量控制标准提供依据.
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编辑　袁天峰
1177第四军医大学学报(JFourthMilMedUniv)2008, 29(13)　http://journal.fmmu.edu.cn