全 文 ：收稿日期:2007-10-29;　修订日期:2008-01-17
基金项目:国家茧丝绸发展风险基金第五批发展性项目(国茧协办
〔2003〕40号);
中国农业科学院蚕业研究所科研发展基金项目 (No.
SP200501)
作者简介:刘　利(1973-),男(汉族),四川宣汉人 ,现任中国农业科学院
蚕业研究所副研究员 , 博士学位 ,主要从事桑树种质资源及其利用研究
工作.
＊通讯作者简介:潘一乐(1944-), 男(汉族),浙江长兴人 , 现任中国农业
科学院蚕业研究所研究员 ,主要从事桑树种质资源研究工作.
华桑种质资源桑叶总黄酮含量的分析
刘　利 , 潘一乐＊
(中国农业科学院蚕业研究所 ,江苏 镇江　212018)
摘要:目的 分析不同华桑种质资源桑叶总黄酮含量的差异 , 为桑叶资源的利用提供科学依据。方法 采用甲醇提取 , 分
光光度法测定。结果 测定的 10份华桑种质资源中 , 保靖 4号桑叶总黄酮含量最高 , 为(71.67±2.96)mg/g;德江 15号
桑叶总黄酮含量最低 , 为(44.56±1.66)mg/g。结论 华桑桑叶总黄酮含量较高 ,同属华桑的不同桑种质桑叶总黄酮含量
差异极显著 , 但同一原生境的种质桑叶总黄酮含量相近。
关键词:桑叶;　总黄酮含量;　分光光度法
中图分类号:S284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)08-1833-02
AnalysisoftheTotalFlavonoidContentinFoliumMorifromMoruscathayanaGermplas
mResources
LIULi, PANYi-le＊
(SericulturalResearchInstitute, ChineseAcademyofAgriculturalSciences, Zhenjiang212018, China)
Abstract:ObjectiveToobtainsomebasicdatafortheutilizationofmulberryleaves(FoliumMori), thetotalflavonoidcontent
ofmulberryleavesfromdiferentMoruscathayanagermplasmresourcesweredetermined, andthedifferenceswereanalyzed.
MethodsAfterextractedwithmethanolthetotalflavonoidwasdeterminedandanalyzedbyspectrophotometry.ResultsAmongthe
tenaccessionsofMoruscathayanagermplasmresourcesdetermined, Baojing4 hadthehighestcontent(71.67±2.96)mg/g, and
Dejiang15 hadthelowestcontent(44.56 ±1.66)mg/goftotalflavonoid.ConclusionThetotalflavonoidcontentofMorus
cathayanaisveryhigh.MuchvariationcanbeseenintotalflavonoidcontentofthegermplasmresourcesfromMoruscathayana.
Butthecontentofthegermplasmsresourcesfromthesamehabitatissimilar.
Keywords:FoliumMori;　Totalflavonoidcontent;　Spectrophotometry
　　桑叶为桑科(Moraceae)桑属 MorusL.植物的叶 , 中国大部分
地区均有栽培生产 ,以南方蚕桑主产区产量最多 ,如江苏 、浙江 、
安徽 、四川等 ,现全国桑树栽植面积约 80万 ha。桑叶不仅是家
蚕的唯一饲料 , 而且也是重要的传统中药 , 桑叶入药首见于 《神
农本草经》 ,被列为中品 [ 1]。 作为一种发散风热药 , 桑叶在中国
及其它一些国家被广泛应用。桑叶苦 、甘 、寒 , 归肺 、肝经 , 常用于
治疗风热感冒 、温病初起 , 肺热燥咳 , 喉痧 、咽喉红肿 、牙痛 , 目赤
肿痛 、风眼下泪 , 肝阳眩晕 、眼目昏花 , 出血 , 自汗 、盗汗 , 风痧等
症 [ 2] 。桑叶具有降糖降脂 [ 3, 4] 、抗氧化 [ 5] 、抗肿瘤等 [ 6]多种活性。
近年来对桑叶化学成分的研究表明 , 桑叶中含有黄酮类 、生物碱
类 、苯丙素类 、有机酸类 、甾体及三萜类等多种化合物。黄酮类化
合物是桑叶的重要活性成分之一。
中国的桑属植物有 15个种 4个变种 [ 7] , 其中入药者多为白
桑 Morusalba[ 1 , 8] 。笔者通过对不同桑种桑叶总黄酮的含量的测
定分析 , 发现华桑 MoruscathayanaHemsl., 长穗桑 Moruswitio-
rumHand-Mazz.等野生种质资源的桑叶总黄酮含量较高 , 进一
步选取不同原生境的 10份华桑种质资源 , 采用分光光度法测定
了桑叶总黄酮含量 , 为野生资源的合理利用提供科学依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器 ThermoSpectronicHeλiosα紫外可见分光光度计 , 索
氏提取器 ,电热恒温水浴锅 , 电热恒温干燥箱 ,电子天平。
1.2　试剂 石油醚(60 ～ 90℃)、甲醇均为分析纯。 5%亚硝酸钠
溶液 、 10%硝酸铝溶液 、1 mol/L氢氧化钠溶液采用分析纯试剂自
配。芦丁标准品购自中国医药上海化学试剂公司。
1.3　材料 桑叶材料采自国家种质镇江桑树圃 , 共计 10份材料 ,
均属于华桑 MoruscathayanaHensl.,经中国农业科学院蚕业研究
所潘一乐研究员鉴定。
2　方法与结果
2.1　标准品溶液制备 精密称取 120℃常压干燥至恒重的芦丁
30 mg, 以少量甲醇溶解 ,置 100ml量瓶中 , 用甲醇定容至 100ml,
摇匀静置 ,配成含芦丁 0.3 mg/ml的标准溶液。
2.2　供试品溶液制备 干燥桑叶 , 揉碎 , 称取 5 g,置索氏提取器
中 , 加甲醇 100ml, 于恒温水浴锅上 90℃ 提取 3 h, 过滤定容于
100 ml量瓶中 ,得供试品溶液。
2.3　测定液制备 取供试液 1 ml, 置于 25 ml量瓶中 , 加水至 6
ml, 加 5%亚硝酸钠溶液 1ml, 混匀 ,放置 6 min;加 10%硝酸铝溶
液 1ml, 混匀 ,放置 6min;加 1mol/L氢氧化钠溶液 10ml, 以甲醇
定容至 25ml, 混匀 ,放置 15min,得测定液。
2.4 　标准曲线绘制 精密量取标准品溶液 0.0, 1.0, 2.0, 3.0,
4.0, 5.0, 6.0 ml,分别置于 25ml量瓶中 , 按 “ 2.3”项的方法制成
测定液 。以不加标准溶液的相应溶液为空白 ,在波长 505 nm处
测定吸光度值 , 得到标准液浓度(Y)与吸光度(X)之间的回归
方程。
2.5　测定波长选择 取标准溶液和供试液各 1 ml, 分别置于 25
ml量瓶中 ,按 “ 2.3”项的方法平行制备标准溶液及供试液的测定
液。以不加标准溶液或供试液的相应溶液为空白 , 在 200 ～ 800
nm波长范围内进行不断缩小范围的反复连续波长扫瞄 , 结果表
明标准液及供试液均在 505 nm有最大吸收 , 并且不受桑叶中色
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素等脂溶性成分的影响 ,故选择 505nm为测定波长。
2.6　提取溶剂及提取方法选择 分别以乙醇 、甲醇为提取溶剂 ,
又分别用石油醚脱脂 、不脱脂 , 进行了提取溶剂及提取方法的选
择。结果表明 , 先用石油醚脱脂 ,再用溶剂提取 ,并不能提高桑叶
总黄酮的得率;分别用乙醇和甲醇作提取溶剂 , 总黄酮的提取效
率相当。因此 , 拟以甲醇提取 ,用硝酸铝显色法 ,在 505 nm测定
桑叶总黄酮的含量。
2.7　重复性实验 称取 5份干燥桑叶样品 , 分别按 “ 2.2”及
“ 2.3”项下的方法制成 5份供试液及硝酸铝显色测定液 , 以不加
供试液的相应溶液为空白 ,在波长 505nm处测定吸光度值 ,并计
算总黄酮含量及 RSD值。结果见表 1。
表 1　重复性实验结果
测定液 ABS 样品含量C/mg· g-1
平均值
C/mg· g-1
RSD
(%)
1 0.718 30.368
2 0.723 30.581
3 0.731 30.921 30.564 0.95
4 0.714 30.198
5 0.727 30.751
2.8　稳定性实验 称取干燥桑叶 5 g,按 “ 2.2”及 “ 2.3”项下的方
法制成供试液和测定液 , 首次测定后 ,每隔 10 min测定 1次 , 记
录吸光度值 , 考察其显色后的稳定性。结果见表 2。
表 2　稳定性实验结果Ⅰ
测定时间 吸光度 指数(%)
首次 0.722 100.00
10min后 0.716 99.17
20min后 0.690 95.57
30min后 0.666 92.24
40min后 0.664 91.97
50min后 0.625 86.57
为了考察供试液的稳定性 ,分别于提取 1d及 5d后 ,将提取
液(供试液)中加入显色剂 , 测定其吸光度值。结果如表 3。
表 3　稳定性实验结果Ⅱ
测定时间 吸光度 指数(%)
首次 0.722 100.00
1d后 0.719 99.58
5d后 0.711 98.48
说明提取液不加入显色剂时稳定较好 ,而加入显色剂后稳定
性较差 , 须在 30 min内尽快测定为宜。
2.9　精密度实验 称取干燥桑叶 5 g,按 “ 2.2”及 “ 2.3”项下的方
法制备 5份测定液 , 测定吸光度值 , 并计算总黄酮含量及 RSD
值。结果见表 4。
表 4　精密度实验结果
测定液 ABS 样品含量C/mg· g-1
平均值
C/mg· g-1
RSD
(%)
1 0.716 30.283
2 0.728 30.793
3 0.720 30.453 30.521 0.67
4 0.719 30.410
5 0.725 30.666
2.10　回收率实验 取精密度实验的供试液各 1 ml, 分别置于 5
只 25ml量瓶中 ,分别加入标准液 1 ml,再按 “ 2.3”项的方法制成
测定液 , 测定吸光度值 , 计算测定液总黄酮浓度 、回收率及 RSD,
结果见表 5。
以上重复性实验 、精密度实验 、回收率实验表明 , 以甲醇提
取 、硝酸铝显色 、505nm测定的分光光度法适用于桑叶总黄酮含
量的测定 , 该方法操作简便 、结果可靠 、重现性好。而稳定性实验
表明 , 提取液稳定性较好 , 但加入硝酸铝显色后稳定性较差 ,宜在
30 min内尽早测定。
表 5　回收率实验结果
测定
液 ABS
测得值
C/mg· ml-1
原来值
C/mg· ml-1
加入值
C/mg· ml-1
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.865 0.073 2 101.67
2 0.862 0.073 0 100.00
3 0.860 0.072 8 0.061 0.012 98.33 100 1.32
4 0.863 0.073 1 100.83
5 0.861 0.072 9 99.17
2.11　华桑种质资源桑叶样品测定
2.11.1　标准品溶液制备及标准曲线绘制 按上述标准液制备
及标准曲线绘制方法 ,精密称取 120℃常压干燥至恒重的芦丁 60
mg,配成含芦丁 0.6 mg/ml的标准溶液。得到标准液浓度(Y)与
吸光度(X)之间的回归方程为:Y=0.101 07X+ 0.000 69, r=
0.999 9, 该回归方程在 0 ～ 72 mg/g范围内呈现良好的线性
关系。
2.11.2　华桑种质资源桑叶总黄酮含量差异 按照上述供试液
及测定液制备方法 , 10份华桑种质资源桑叶样品均平行制备 3
份测定液样品 ,以不加供试液的相应溶液为空白 ,在波长 505 nm
处测定吸光度值 ,按回归方程计算测定浓度 ,然后按下式计算样
品中总黄酮的含量(C):C(mg/g)=(Y× 25 ×100) / 5 =
500Y。结果见表 6。
表 6　华桑种质资源桑叶总黄酮含量及多重比较( x±s)
种质
名称
种质原
产地
总黄酮含量及
差异显著性＊ C/mg· g-1
保靖 4号 湖南保靖 71.67±2.96A
保靖 8号 湖南保靖 61.17±0.48B
贵 23号 贵州德江 59.05±2.91BC
雅安 3号 四川雅安 56.98±0.56BCD
雅安 9号 四川雅安 55.93±1.92CD
皮桑 安徽大别山区 55.83±3.82CD
皖皮桑 2号 安徽金寨 53.64±0.52DE
德江岩桑 贵州德江 49.31±0.94EF
道真岩桑 贵州道真 45.67±0.79F
德江 15号 贵州德江 44.56±1.66F
　　上标字母相同表示 SSR法多重比较差异不显著;＊α=0.01
测定结果表明 ,华桑种质资源桑叶总黄酮含量总体较高 , 平
均达到 55.38 mg/g。不同华桑种质资源桑叶总黄酮含量相差较
大 , 含量最高的保靖 4号达(71.67 ±2.96)mg/g, 含量最低的德
江 15号为(44.56±1.66)mg/g。为进一步明确不同种质资源总
黄酮含量差异显著性 , 进行了方差分析和多重比较 , 除保靖 4号
含量特别高以外 ,其余种质总黄酮含量差异都不悬殊。从这些种
质的原产地来看 ,同一原产地的种质桑叶总黄酮含量相近。原产
于湖南的保靖 4号及保靖 8号含量最高 , 原产于四川的雅安 3
号 、雅安 9号含量相近 , 原产于安徽的皮桑及皖皮桑 2号含量相
仿 , 原产于贵州的德江岩桑 、道真岩桑及德江 15号含量也近似。
3　讨论
通过甲醇提取 、硝酸铝显色 、分光光度法测定 ,分析了华桑种
质资源桑叶总黄酮含量。该方法操作简便 、结果可靠 、重复性好 ,
适宜于桑叶总黄酮含量测定。实验结果表明 ,华桑桑叶总黄酮含
量较高 , 同属华桑的不同种质资源总黄酮含量有显著差异 , 其中
原产于湖南的保靖 4号桑叶总黄酮含量最高。
《中国药典》Ⅰ部(2000年版)记载:桑叶为桑科植物桑 Mo-
rusalbaL.的干燥叶 [ 8];《现代中药学大辞典 》记载的桑也是指的
MorusalbaL.[ 1] 。在对不同桑种桑叶总黄酮含量初步分析的基
础上 , 对含量较高的华桑进行了进一步的分析测定 ,确证了华桑
黄酮含量较高 , 提示在桑叶药源的拓展上 , 应该重视华桑等野生
种的利用和开发。进一步分析这些华桑种质资源发现 ,原生境相
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.8　
同的种质资源 , 桑叶总黄酮含量相近。
参考文献:
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2002:244.
收稿日期:2007-09-29;　修订日期:2007-12-29
基金项目:广西壮族自治区自然科学基金(No.0575023)
作者简介:周吴萍(1979-),女(仫佬族), 广西宜州人, 现任广西工学院生
物与化学工程系讲师 , 硕士学位 , 主要从事中药成分分析及质量研究
工作.
＊通讯作者简介:李军生(1963-), 男(汉族),广西临桂人 , 现任广西工学
院生物与化学工程系教授 ,博士学位 ,主要从事生物分子的结构与功能研
究工作.
广西一点红总生物碱的提取和抗菌活性研究
周吴萍 , 韦媛媛 , 李军生＊ , 阎柳娟 , 赖雪芬
(广西工学院 ,广西 柳州　545006)
摘要:目的 考察广西一点红总生物碱的分离提纯及其抗菌活性 。方法 通过 95%乙醇回流提取一点红药材中的生物碱
类物质 , 利用酸水提取法及有机溶剂萃取对其进行分离纯化 , 同时用化学检识法与薄层色谱法进行定性鉴别。采用滤纸
片法研究一点红生物碱类物质的抗菌活性。结果 一点红生物碱浓度在 600 ～ 800 mg/ml时对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌
及枯草杆菌中度敏感 , 随着药物(生物碱)浓度的增大 ,抗菌作用越明显。结论 说明一点红生物碱类物质对供试菌有一
定的抑菌活性。
关键词:一点红;　总生物碱;　提取分离;　抗菌活性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)08-1835-02
StudyontheExtractionandAntibacterialActivitesoftheAlkaloidsinEmiliasonchifolia
fromGuangxi
ZHOUWu-ping,WEIYuan-yuan, LIJun-sheng＊ ,YANLiu-juan,LAIXue-fen
(GuangxiUniversityofTechnology, Liuzhou, 545006 , China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheextractionandseparationmethodsandantibacterialactivitiesofthealkaloidsinEmilia
sonchifoliafromGuangxi.MethodsThealkaloidsinEmiliasonchifoliawererefluxextractedby95% alcohol, andseparatedby
acidwaterextractionandorganicsolventextractionmethod, atthesametimequalitativeidentificationwasperformedbythechem-
icalmethodsandthethinlayerchromatographymethods.TostudytheantibacterialactivitiesofthealkaloidsinEmiliasonchifolia
byfilterpapermethod.ResultsTheresultshoweditwasmediumsensitivetoEscherichiacoli, BacilussubtilisandStaphylococus
aureuswhentheconcentrationsofthealkaloidswereintherangeof600 ～ 800 mg/ml.Theantibacterialfunctionwasmorere-
markablewiththemedicineconcentrationsincreased.ConclusionThealkaloidsofEmiliasonchifoliahascertainantibacterialac-
tivitiesagainsttheselectedmicrobes.
Keywords:Emiliasonchifolia;　Totalalkaloids;　Extraction-Separation;　Antibacterialactivity
　　一点红 Emiliasonchifolia(Linn.)DC属菊科植物一点红的
干燥全草 , 主产于广东 、广西 、福建 、贵州 、江西 ,具有清热解毒 、活
血散瘀的功效 , 用于治疗急性扁桃体炎 、肺炎 、急性阑尾炎 、传染
性肝炎 、痢疾 、尿路感染等疾病 [ 1] 。一点红是妇科临床常用药广
西特产中成药花红片的主要原料药 [ 2] , 其主要含有黄酮类 [ 3] ,生
物碱类 [ 1] , 甾醇类 [ 4]等化学成分。据文献报道 , 一点红提取物有
一定的抗氧化和抗炎作用 [ 5 , 6] , 并且对金黄色葡萄球菌 、绿脓杆
菌和痢疾杆菌有一定抑制作用 [ 1] 。国内外仅对一点红的种植和
临床应用方面有少量研究 , 对活性成分抗菌性能未见有相关报
道 , 而生物碱常常是很多中草药的有效成分 , 具有抗炎抗菌的药
理作用 。故实验分离提纯一点红总生物碱类物质 ,进行体外抗菌
活性研究 , 为寻找一点红抗菌的活性成分提供一定参考 , 为有效
利用广西草药资源提供依据。
1　材料与方法
1.1　材料 中药一点红干燥全草(由广西花红药业提供), 阳性
对照硫酸链霉素粉针剂(购自柳州市中医院), 甲醇 、乙醇 、丙酮 、
氯仿 、醋酸乙酯 、环己烷等试剂均为分析纯。
供试菌种:大肠杆菌 Escherichiacoli, 枯草芽孢杆菌 Bacillus
subtilis, 金黄色葡萄球菌 Staphylococusaureus, 以上菌种由广西工
学院生物与化学工程系微生物实验室提供。培养基:营养琼脂
粉 , 营养肉汤。
1.2 　一点红生物碱的提取分离 称取一点红药粉约 100 g, 加
95%乙醇 1 000ml水浴回流提取 2 h, 减压抽滤得到提取液 , 药渣
加入新溶剂反复提取 3次 ,合并提取液 , 用旋转蒸发仪回收乙醇 ,
挥干溶剂得到生物碱粗提物浸膏。浸膏加 1%盐酸溶解 , 减压过
滤 , 滤液用氯仿萃取至氯仿层无色 , 弃去氯仿层 , 水层用 10%氨
水调节 pH值为 9 ～ 11, 用氯仿萃取 3次 , 合并氯仿层(加入少量
K2CO3 ,脱水),回收氯仿得到总生物碱提取物 , 干燥称重 , 计算提
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.8 时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期