全 文 ：［收稿日期］ 20130302(012)
［基金项目］ 中医药公共卫生专项国家基本药物所需中药原料
资源调查和监测项目(财社［2011］76 号) ;中医药
行业科研专项(20127002)
［第一作者］ 潘乔丹，讲师，硕士，从事天然产物化学研究，Tel:
0776-2849498，E-mail:panqiao112@ 163． com
［通讯作者］ * 黄元河，讲师，硕士，从事药用植物学研究，Tel:
0776-2849489，E-mail:gxhyuanhe@ 163． com
王瓜的微波-超声波联合提取工艺优选及抗氧化活性考察
潘乔丹，黄元河* ，董妹灵，唐海燕，王柳念，黄玉亮
( 右江民族医学院，广西 百色 533000)
［摘要］ 目的:优选王瓜的微波-超声波联合提取工艺并考察其抗氧化活性。方法:以总三萜质量分数为指标，通过单因
素试验和正交试验考察乙醇体积分数、提取时间、料液比、微波功率对王瓜提取工艺的影响;采用 DPPH法、水杨酸法、ABTS法
和 FＲAP法测定提取物的抗氧化能力。结果:最佳提取工艺条件为加 50 倍量 90%乙醇于 500 W微波-超声波联合提取6 min;
王瓜提取物清除 DPPH·、清除 ABTS +·和 Fe3 +还原 /抗氧化能力大于茶多酚但小于抗坏血酸，清除 OH·能力均小于二者。结
论:优选的提取工艺简便、快速，王瓜提取物具有一定的抗氧化性能。
［关键词］ 王瓜;总三萜;提取工艺;抗氧化活性;微波-超声波联合提取
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284． 2;Ｒ943 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)18-0030-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013180030
Optimization of Ultrasonic-Microwave Synergistic Extraction Technology
of Trichosanthes cucumeroides and Investigation of Its Antioxidant Activity
PAN Qiao-dan，HUANG Yuan-he* ，DONG Mei-ling，TANG Hai-yan，WANG Liu-nian，HUANG Yu-liang
(Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China)
［Abstract］ Objective: To optimize ultrasonic-microwave synergistic extraction technology of total
triterpenes from Trichosanthes cucumeroides and investigate its antioxidant activity． Method:With the content of
total triterpenes as index，single-factor tests and orthogonal test were adopted to investigate effects of extraction
time，ethanol concentration，solid-liquid ratio and microwave power on extraction technology． Antioxidant activity
of its extract was extimated by DPPH assay，salicylicl acid assay，ABTS assay and FＲAP assay． Ｒesult:The best
extraction conditions for total triterpenes from T． cucumeroides were as follows:extracted 6 min with 50 times the
amount of 90% ethanol，microwave power 500 W． Scavenging DPPH·，scavenging ABTS +·and reducing Fe3 +
of extract from T． cucumeroides were higher than tea polyphenol and lower than Vc，but scavenging OH· was
lower than theirs． Conclusion:This optimized technology was simple and rapid，extract of T． cucumeroides
showed certain antioxidant activity．
［Key words］ Trichosanthes cucumeroides;total triterpenes;extraction technology;antioxidant activity;
ultrasonic-microwave synergistic extraction
王瓜种子具有润肺化痰、润肠通便的作用，种子 提取物还具有显著的血细胞凝集活性。曾从王瓜果
实和种子中分离得到三萜类物质，探讨该类物质的
提取工艺具有较大的实用价值［1-2］。本实验以王瓜
总三萜含量为指标，通过单因素试验和正交试验优
选王瓜的提取工艺，采用 DPPH 法、水杨酸法、ABTS
法和 FＲAP法对提取物的抗氧化性能进行考察，为
王瓜药物制剂和保健食品的研制提供参考。
1 材料
FA1104 型电子天平(上海良平仪器仪表有限
·03·
第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013
公司) ，TU-1800 型紫外-可见分光光度计(北京普析
通用仪器有限责任公司) ，XH-300A 型微波超声波
组合合成萃取仪(北京祥鹄科技发展有限公司)。
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号
110709-200505) ，1，1-二苯基-2-苦基肼 自 由 基
(DPPH，上海楷洋生物技术有限公司) ，三吡啶三吖
嗪(TPTZ，Aladdin公司) ，2 2-联氨-(3-乙基苯并噻
唑林-6-磺酸)二氨盐(ABTS，生工生物公司) ，奎诺
二甲基丙烯酸酯(Trolox，Sigma公司) ，抗坏血酸(天
津博迪化工股份有限公司) ，茶多酚(广州食品添加
剂公司) ，其他试剂均为分析纯。王瓜采于广西百
色，经本院生物教研室黄元河讲师鉴定为葫芦科植
物王瓜 Trichosanthes cucumeroides (Ser．)Maxim． 的
果实。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 称取王瓜干燥粉末
0. 5 g，按一定条件进行提取(固定超声波功率
500 W，温度 70 ℃) ，浓缩蒸干后得浸膏，用 80%乙
醇定容至 25 mL量瓶中，即得供试品溶液。含量测
定前，采用试管预试法［3］和 TLC 检验，结果均显阳
性，表明王瓜中含有三萜类化合物。
2. 2 总三萜的含量测定 采用香草醛-高氯酸显色
法［4-5］。称取齐墩果酸对照品适量，配制不同质量
浓度的对照品溶液，于 300 ～ 900 nm 进行全波长扫
描，确定最大吸收波长 549 nm，以吸光度(A)为纵坐
标，质量浓度为横坐标，得回归方程 Y = 73. 543C －
0. 015 6(r = 0. 999 8) ，线性范围 2. 33 ～ 11. 67 mg·
L －1。精密量取供试样品溶液 150 μL，水浴挥发至
干，测定 A，计算总三萜含量。
2. 3 单因素试验考察
2. 3. 1 乙醇体积分数 固定微波功率 400 W，料液
比 1 ∶ 30，提取时间 3 min，分别考察体积分数为
50%，60%，70%，80%，90%的乙醇对提取效果的影
响，结果乙醇体积分数约 80% 时总三萜提取率
最高。
2. 3. 2 提取时间 分别加 30倍量 80%乙醇于 400 W
提取 1，2，3，4，5，6，7 min 对提取效果的影响，结果
总三萜提取率在 6 min后变化不大。
2. 3. 3 微波功率 固定乙醇体积分数 80%，料液
比 1∶ 30，提取时间 5 min的条件下，考察微波功率分
别为 200，300，400，500，600，700，800 W对提取效果
的影响，结果微波功率约 600 W 时总三萜提取率
最高。
2. 3. 4 料液比 在乙醇体积分数 80%，微波功率
600 W，提取时间 5 min 的条件下，考察不同料液比
对提取效果的影响，结果总三萜提取率在料液比达
1∶ 50 后变化不大。
2. 4 正交试验 在单因素试验基础上，选取乙醇体
积分数、提取时间、料液比、微波功率为考察因素，以
总三萜提取率为指标，按 L9(3
4)正交表安排试验，
试验安排及结果见表 1，方差分析见表 2。
表 1 王瓜微波-超声波联合提取工艺优选正交试验安排
No．
A乙醇
体积分数
/%
B提取时间
/min
C料液比
/ g·mL －1
D微波功率
/W
总三萜
提取率
/%
1 70 4 1∶ 30 500 1. 185
2 70 5 1∶ 40 600 1. 117
3 70 6 1∶ 50 700 1. 253
4 80 4 1∶ 40 700 1. 195
5 80 5 1∶ 50 500 1. 269
6 80 6 1∶ 30 600 1. 152
7 90 4 1∶ 50 600 1. 568
8 90 5 1∶ 30 700 1. 359
9 90 6 1∶ 40 500 1. 609
K1 1. 185 1. 316 1. 232 1. 354
K2 1. 205 1. 248 1. 307 1. 279
K3 1. 512 1. 338 1. 363 1. 269
Ｒ 0. 327 0. 090 0. 131 0. 085
表 2 提取工艺方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 0. 201 2 0. 101 15. 424 ＞ 0. 05
B 0. 013 2 0. 007 1. 004 ＞ 0. 05
C 0. 026 2 0. 013 1. 995 ＞ 0. 05
D(误差) 0. 013 2 0. 007 1. 000
注:F0. 05(2，2)= 19。
由直观分析可知，各因素中对王瓜总三萜提取
率的影响顺序为乙醇体积分数 ＞料液比 ＞提取时
间 ＞微波功率。以极值最小的 D 因素为误差项进
行方差分析，结果发现 A，B，C 因素均对总三萜提取
率无显著性影响，确定最佳提取条件为 A3B3C3D1，
即加 50 倍量 90%乙醇于 500 W 提取 6 min。按最
佳提取工艺进行 3 次验证试验，结果王瓜总三萜提
取率 1. 671%，ＲSD 1. 01%。
2. 5 抗氧化活性测定 按最佳提取工艺制备供试
品溶液，蒸干，用 80% 乙醇配成 0. 005，0. 010，
0. 015，0. 020，0. 025 g·L －1的受试溶液。
2. 5. 1 清除 DPPH·作用(DPPH 法)［6］ 分别移取
不同质量浓度的受试溶液各 3. 0 mL，加 0. 04 g·L －1
的 DPPH无水乙醇溶液 3. 0 mL，混合摇匀后室温避
光静置 30 min，于 515 nm 处测定吸光度(A) ，平行
操作 3 次，结果表明王瓜提取物具有一定的清除
·13·
潘乔丹，等:王瓜的微波-超声波联合提取工艺优选及抗氧化活性考察
DPPH·能力，IC50 = 0. 174 g·L
－1(IC50与清除能力大
小呈负相关) ，清除 DPPH·能力的顺序依次为抗坏
血酸(IC50 = 0. 118 g·L
－1)＞王瓜提取物 ＞茶多酚
(IC50 = 1. 22 g·L
－1)。
DPPH·清除率 = A0 －(A1 － A1 )/A0 × 100%
式中 A0 为以溶剂代替样品液的吸光度，A1 为
样品组的吸光度，A1 为无水乙醇代替 DPPH 的空白
对照组吸光度。
2. 5. 2 清除 OH·作用(水杨酸法) 采用 Fenton 反
应法［7-8］。移取受试溶液各 2. 0 mL于试管中，各加入
1. 0 ×10 －2 mol·L －1 FeSO4 1. 0 mL，1. 0 × 10
－2mol·L －1
水杨酸-乙醇溶液 2. 0 mL，加 30% H2O2 2. 0 mL 启
动反应，于室温下反应 1 h，在 510 nm 处测定
A(n = 3) ，计算 IC50 = 0. 104 g·L
－1，清除 OH·能力依
次为茶多酚(IC50 = 0. 032 g·L
－1)＞ 抗坏血酸
(IC50 = 0. 044 g·L
－1)＞王瓜提取物。
OH·清除率 = A0 －(A1 － A1 )/A0 × 100%
式中 A0 为溶剂代替样品液的吸光度，A1 为样
品组的吸光度，A1 为水代替 H2O2 的空白对照组吸
光度。
2. 5. 3 清除 ABTS +·作用(ABTS 法)［9-10］ 移取各
受试溶液 30 μL 于试管中，加 ABTS +·测定液
3. 0 mL，准确振荡 30 s，于 734 nm处测定 A(n = 3) ，
计算 IC50 = 0. 222 g·L
－1，表明对 ABTS +·的清除能
力顺序为抗坏血酸(IC50 = 0. 037 g·L
－1)＞王瓜提
取物 ＞茶多酚(IC50 = 0. 416 g·L
－1)。
ABTS +·清除率 =(A测定液 － A样品)/A0 × 100%
2. 5. 4 总抗氧化能力的测定(FＲAP 法)［11］ 移取
受试溶液各 1. 0 mL，加入 TPTZ 工作液 2. 0 mL，混
匀，37 ℃水浴 1 h后于 593 nm 处测定 A(n = 3) ，计
算清除率，以 Trolox当量 (即每克样品的自由基清除
能力相当于 Trolox 的自由基清除能力的毫摩尔数)
表示。当 Trolox摩尔浓度为 0. 15 ～0. 9 mmol·L －1时，
与自由基清除率呈良好的线性关系，Y = 0. 335 4X +
0. 042 6(r = 0. 995 6) ，表明王瓜提取物的 Fe3 + 还
原 /抗氧化能力(FＲAP 9. 18 mmolTE·g －1)弱于抗坏
血酸(FＲAP 92. 37 mmolTE·g －1) ，但强于茶多酚
(FＲAP 3. 74 mmolTE·g －1)。
3 讨论
微波-超声波法克服了常规超声波和微波萃取
之不足，具有速度快、耗能小、溶剂用量小、回收率高
等优点［12］。研究表明自由基和人类多种疾病密切
相关，当机体内自由基产生过多或机体清除自由基
能力下降时，这些自由基会对 DNA、蛋白质和脂质
等生物大分子产生氧化损伤作用，引起机体组织器
官发生各种病变，因此增强机体清除自由基的能力
可预防和治疗与自由基相关的疾病［12］。与抗坏血
酸和茶多酚相比，王瓜提取物清除 DPPH·、清除
ABTS +·和 Fe3 +还原 /抗氧化能力均比抗坏血酸弱
但强于茶多酚，清除 OH·能力均比二者低，说明王
瓜提取物具有较强的抗氧化能力。
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［责任编辑 仝燕］
·23·
第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013