全 文 :2013 年 4 月 第 15 卷 第 4 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Apr. 2013 Vol. 15 No. 4
△ [基金项目] 江西省卫生厅中医药科研基金重点课题(2009Z11)
* [通讯作者] 王小平,Tel: (0794)8239328,E-mail:jxrcwxp@ 163. com
薯莨中鞣质类成分的含量测定
△
王小平* ,陈建章,王进
(江西中医药高等专科学校,江西 抚州 344000)
[摘要] 目的:测定黎川岩泉自然保护区中薯莨的总鞣质和缩合鞣质含量。方法:采用《中国药典》(2010
年版)比色法测定总鞣质,采用香草醛硫酸法测定缩合鞣质。结果:薯莨中总鞣质与缩合鞣质平均质量分数分别
为(501. 81 ± 8. 62)mg·g -1,(421. 78 ± 11. 65)mg·g -1。结论:薯莨鞣质含量高,鞣质类型主要为缩合鞣质,具有
良好的开发前景。
[关键词] 薯莨;总鞣质;缩合鞣质;比色法;香草醛硫酸法
妇科经、带、胎、产、杂等病的出血证为临床
常见病,是导致妇女慢性贫血、继发性感染和不孕
不育症的重要原因,而采取有效的药物治疗对出血
病症有着积极的作用。目前临床可用的止血药品种
虽然较多,鉴于妇科出血与内分泌功能等多种因素
有关,单纯应用化学止血药并不能止住其出血状况,
且往往易多发,副作用多。因此,选用具有多靶点、
多成分、多环节作用特点的中药制剂治疗妇科出血
病症存在着巨大的市场需求。薯莨为薯蓣科植物薯
莨 Diascoreo cirrhosa Lour. 的块茎。味甘、酸,性
平;有小毒。具有补血活血,收敛止血,通络止痛
的功能。在民间,薯莨有悠久的应用历史,其止血
作用突出,广泛用于治疗内伤吐血、外伤出血、痢
疾、失血性贫血、月经过多、血崩等症。薯莨中主
要含鞣质、酚类、苷类、蛋白质、糖类、黏液等成
分,其中生物活性成分为缩合鞣质[1-2]。目前,尚无
同时测定薯莨中主要生物活性成分总鞣质与缩合鞣
质的文献报道。本实验分别采用 《中国药典》2010
年版一部磷钼钨酸比色法及香草醛硫酸法测定其总
鞣质及缩合鞣质含量,为薯莨质量控制及临床应用
提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器
Tu-1901 型紫外可见分光光度计(北京普析) ;
METTLER-TOLEDD AB265-S 型电子分析天平(瑞士
梅特勒) ;KQ3200 超声波清洗器(中国昆山) ;FST-
Ⅲ-10 精密型超纯水机(上海富诗特)。
1. 2 材料
薯莨采集于江西省黎川县岩泉自然保护区,经
我校李秀英副教授鉴定为薯蓣科植物薯莨 Diascoreo
cirrhosa Lour. ;没食子酸对照品(批号:110831-
200302)、儿茶素对照品(批号:110877-200001)购
自中国食品药品检定研究院;干酪素(上海精细化
工科技有限公司,批号:20091011) ;化学试剂均为
分析纯。
磷钼钨酸试剂:依《中国药典》2010 版一部附
录ⅩⅤB项下方法配制。
2 方法
2. 1 总鞣质含量测定[3]
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照
品 51. 36 mg,置 100 mL 棕色容量瓶中,加水溶解
并稀释至刻度。精密量取 5 mL,置 50 mL棕色容量
瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得。
2. 1. 2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0. 5,
1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0 mL,分别置于 25 mL 棕
色容量瓶中,各加入磷钼钨酸试剂 1 mL,再分别加
水 11. 5,11,10,9,8,7 mL,用 29%碳酸钠溶液
稀释至刻度,摇匀,放置 30 min,以相应的试剂为
空白,照紫外 -可见分光光度法,在 760 nm的波长
处测定吸光度。以吸光度(Y)为纵坐标,浓度(X)
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2013.04.013
2013 年 4 月 第 15 卷 第 4 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Apr. 2013 Vol. 15 No. 4
为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为 Y =0. 074 8X -
0. 034 7,r = 0. 999 8,表明没食子酸浓度在 1. 03 ~
10. 27 μg·mL -1与吸光度呈良好线性关系。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取薯莨粉末约 0. 25 g,
精密称定,置 250 mL棕色容量瓶中,加水 150 mL,
放置过夜,超声处理 25 min,用水稀释至刻度,摇
匀,静置,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液 20
mL,置 100 mL 棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,
摇匀,即得。
2. 1. 4 精密度考察 取供试品溶液适量,照标准曲
线制备项下方法,连续测定吸光度 6 次。结果吸光
度 RSD =0. 01%,表明仪器精密度良好。
2. 1. 5 稳定性考察 称取薯莨粉末 0. 25 g,精密称
定,依法制备供试品溶液,照标准曲线制备项下方
法,每隔 20 min测定 1 次吸光度,测定时间为 2 h。
结果吸光度 RSD = 2. 63%,表明供试品溶液在 2 h
内是稳定的。
2. 1. 6 重复性试验 分别称取同一批次薯莨粉末 6
份,每份 0. 25 g,精密称定,依法制备供试品溶液
并测定总酚量与不被吸附的多酚量。结果总鞣质平
均质量分数为 494. 37 mg·g -1,RSD = 2. 64%,表明
样品测定方法重复性好。
2. 1. 7 加样回收率试验 分别称取已知总酚含量的
薯莨粉末 6 份,每份 0. 1 g,精密称定,各加入精密
称定的没食子酸对照品 10 mg,依法制备供试品溶
液并测定总酚量,计算加样回收率,结果见表 1。
表 1 薯莨中没食子酸加样回收率试验
序
号
取样量
/ g
样品中的
量 /mg
对照品加
入量 /mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
1 0. 101 2 50. 03 10. 04 59. 57 95. 02 96. 71 2. 90
2 0. 102 6 50. 72 10. 26 60. 52 95. 49
3 0. 100 7 49. 78 10. 18 59. 69 97. 32
4 0. 115 4 57. 05 10. 60 67. 88 102. 17
5 0. 102 9 50. 87 10. 37 60. 73 95. 08
6 0. 104 4 51. 61 10. 29 61. 41 95. 22
2. 1. 8 含量测定
2. 1. 8. 1 总酚 精密量取供试品溶液 2 mL,置 25
mL棕色容量瓶中,照标准曲线制备项下,自 “加
入磷钼钨酸试液 1 mL”起同法操作,加水 10 mL,
测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食
子酸的浓度,计算即得。
2. 1. 8. 2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液 25
mL,加至已盛有干酪素 0. 6 g的 100 mL具塞锥形瓶
中,密塞,置 30 ℃水浴中保温 1 h,时时振摇,取
出放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,续滤液备用。
另称取干酪素 0. 6 g,置 100 mL 具塞锥形瓶,加水
25 mL,密塞,同法随行制备干酪素空白溶液。精密
量取续滤液各 2 mL,分别置于 25 mL 棕色容量瓶
中,照标准曲线制备项下的方法,自 “加入磷钼钨
酸试液 1 mL”开始,加水 10 mL,测定吸光度,从
标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的浓度,按
公式计算不被吸附的多酚量,不被吸附的多酚量 =
溶液中游离多酚的含量 -干酪素空白溶液中多酚的
含量。
按公式计算总鞣质含量:鞣质含量 =总酚量 -
不被吸附的多酚量
2. 2 缩合鞣质含量测定[4]
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取儿茶素对照品
16. 71 mg,置 25 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并稀释
至刻度,摇匀,即得儿茶素贮备液。
2. 2. 2 标准曲线的绘制 精密称取儿茶素贮备液
0. 5,1,2,3,4,5 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,
加入甲醇稀释定容至刻度,摇匀。精密量取各溶液
0. 5 mL,分别加至包有锡箔的试管中,加入 2. 5 mL
3%香草醛甲醇溶液和 2. 5 mL 30%浓硫酸甲醇溶液,
摇匀,避光显色 20 min。以相应的试剂为空白,照
紫外 -可见分光光度法,在 500 nm波长处测定吸光
度。以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准
曲线,回归方程为 Y = 0. 029 9X - 0. 039, r =
0. 999 3,表明儿茶素浓度在 3. 0 ~ 30. 4 μg·mL -1与
吸光度呈良好线性关系。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 取薯莨粉末约 0. 1 g,精
密称定,置 50 mL 棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,
超声处理 30 min,滤过,弃去初滤液,精密量取续
滤液 1 mL,置 10 mL棕色容量瓶中,用甲醇稀释至
刻度,摇匀,即得。
2. 2. 4 精密度试验 取供试品溶液适量,依法连续
测定 6 次,结果吸光度 RSD = 0. 10%,表明仪器精
密度良好。
2. 2. 5 稳定性试验 称取薯莨粉末 0. 1 g,精密称
定,依法制备供试品溶液,照标准曲线制备项下方
法,分别于第 0,10,20,30,40,50,60 min 测
定吸光度,结果吸光度 RSD = 1. 09%,表明样品溶
液在 1 h内稳定性良好。
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2. 2. 6 重复性试验 分别称取同一批次薯莨粉末 6
份,每份 0. 1 g,精密称定,依法制备供试品溶液并
测定吸光度,计算缩合鞣质平均质量分数为 418. 63
mg·g -1,RSD =2. 52%,表明该方法重复性良好。
2. 2. 7 加样回收率试验 分别称取已知缩合鞣质含
量的薯莨粉末 6 份,每份 0. 06 g,精密称定,各加
入浓度为 1. 128 mg·mL -1儿茶素对照品溶液 4 mL,
依法制备供试品溶液并测定含量,计算回收率,结
果见表 2。
表 2 薯莨中儿茶素加样回收率试验
序
号
取样量
/mg
样品中的
量 /mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
1 60. 35 25. 264 29. 58 95. 65 97. 06 2. 29
2 60. 28 25. 235 29. 56 95. 86
3 60. 01 25. 122 29. 69 101. 21
4 60. 13 25. 172 29. 56 97. 25
5 60. 22 25. 21 29. 60 97. 29
6 60. 17 25. 189 29. 48 95. 10
注:儿茶素对照品加入量均为 4. 512 mg
2. 2. 8 含量测定 精密量取供试品溶液 0. 5 mL,置
包有锡箔的试管中,分别加入 2. 5 mL 3%香草醛甲
醇溶液和 2. 5 mL 30%浓硫酸甲醇溶液,摇匀,避光
显色 20 min,依法测定吸光度,从标准曲线中读出
供试品溶液中儿茶素的浓度,计算即得。
2. 3 含量测定结果
分别称取薯莨药材粉末 3 批,依法测定其中总
鞣质与缩合鞣质含量,结果见表 3。
表 3 薯莨中总鞣质与缩合鞣质含量测定
/mg·g - 1
批次 采集时间 总鞣质含量 缩合鞣质含量
1 2010 年 10 月 494. 37 410. 56
2 2011 年 10 月 511. 26 433. 81
3 2011 年 11 月 499. 81 420. 97
平均(珋x ± s) 501. 81 ± 8. 62 421. 78 ± 11. 65
3 讨论
鞣质是一类广泛存在于植物中比较复杂的具有
沉淀蛋白质性质的水溶性多元酚类化合物,具有广
泛的药理作用。薯莨中主要活性指标成分为鞣质,
具有抗菌、抗溃疡、抗病毒、抗菌、止血及降压等
作用[5-6]。根据薯莨中所含鞣质类成分性质,本实验
采用《中国药典》比色法及香草醛硫酸法分别测定
其中总鞣质与缩合鞣质含量,结果表明采自黎川岩
泉自然保护区内的野生薯莨中主要含缩合鞣质,开
发前景良好。
采用《中国药典》法测定鞣质过程中,干酪素
可能会干扰试验结果。经试验验证,结果表明与文
献报道[7]一致。因此,本文在测定不被吸附的多酚
含量时,随行干酪素空白试验。
采用《中国药典》2010 年版附录ⅩB 鞣质测定
法测定鞣质时,需加入 29%碳酸钠溶液。由于碳酸
钠溶解度受温度影响,在室温较低的冬季进行实验
时,碳酸钠较易析出晶体而影响测定,而在气温较
高的夏天进行本项实验时,测定方法的可操作性良
好。因此,采用本法测定鞣质时是否应加高浓度的
碳酸钠溶液值得商榷。
参考文献
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海:上海科学技术出版社,2006: 3722.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].
第 22 卷.上海:上海科学技术出版社,1999: 228.
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科技出版社,2010:附录 62.
[4] 程悦,陈嘉升,陈建萍,等.地榆提取物中不同类型鞣质
的测定[J].中成药,2011,33( 5) : 852-857.
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部附录ⅩB) 方法学验证[J].世界科学技术—中医药现
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Determination of Tannins Content in Dioscorea cirrhosa Lour.
WANG Xiao-ping* ,CHEN Jian-zhang,WANG Jin
(Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 344000,China)
[Abstract] Objective:To establish the quantitative assay of total tannins and condensed tannins in
Dioscorea cirrhosa Lour. from the Lichuan Yanquan Nature Reserve of Jiangxi province. Methods:The colorimetry in
Chinese Pharmacopoeia(2010)was used for the determination of total tannins content. The Vanillin-H2SO4 method
was employed for the determination of condensed tannins content. Results:The content of total tannins and condensed
tannins were (501. 81 ± 8. 62)mg·g -1 and (421. 78 ± 11. 65)mg·g -1 respectively. Conclusion:Wild Dioscorea
cirrhosa Lour. collected from the Lichuan Yanquan Nature Reserve of Jiangxi province,contained high content tannins
which was mainly condensed tannin. This implies Dioscorea cirrhosa Lour. has a good exploration prospect.
[Key words] Dioscorea cirrhosa Lour. ; Total tannins; Condensed tannin; Colorimetry; Vanillin-
H2SO4method
( 收稿日期 2012-09-01
)
信息天地 封面介绍———天冬
天冬 Asparagus cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 为百合科植物,以干燥块根入药。
【植物形态】 多年生攀缘草本,全株无毛。块根肉质,簇生,长椭圆形或纺锤形,长 4 ~ 10 cm,
灰黄色。茎细,分枝具棱或狭翅; 叶状枝通常每 3 枚成簇,扁平,长 1 ~ 3 cm,宽 1 ~ 2 mm,先端锐
尖。叶退化成鳞片,先端长尖,基部有木质倒生刺,刺在茎上长 2. 5 ~ 3 mm,在分枝上较短或不明显。
花 1 ~ 3 朵簇生叶腋,单性,雌雄异株,淡绿色; 花梗长 2 ~ 6 mm; 雄花花被片 6,雄蕊花丝不贴生于
花被片上,花药卵形; 雌花与雄花大小相似,具 6 个退化雄蕊。浆果球形,成熟时红色; 具种子 1 颗。
花期 5 ~ 7 月,果期 8 月。
【性味与归经】 甘、苦,寒。归肺、肾经。
【功能与主治】 养阴润燥,清肺生津。用于肺燥干咳,顿咳痰黏,腰膝酸痛,骨蒸潮热,内热消
渴,热病津伤,咽干口渴,肠燥便秘。
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