全 文 ：　　重复性实验:精密称取酒炖 8 h女贞子饮片 1.0 g,照 “2.2.2”项下方法制备
供试品溶液 , 进样 10 μl, 测定峰面积 , 结果 RSD为 2.73%, 表明该方法重复性
良好。
稳定性实验:精密称取酒炖 8 h女贞子饮片 0.999 5 g, 按 “ 2.2.2”项下方法
制备供试品溶液 , 于配置后 0, 2, 4, 6, 8, 10 h分别进样 10 μl, 测定峰面积 , 计算
RSD为 1.89%, 表明供试品溶液在 10 h内稳定。
回收率实验:精密称取酒炖 8h女贞子饮片 0.5 g,加入浓度为 0.239 2 mg·
ml-1的对照品储备液 100 μl, 按 “ 2.2.2”项下方法制备样品溶液 , 进样 10 μl测
定峰面积 , 重复 6次 ,计算平均回收率为 100.03%, RSD为 2.70%。
2.2.5　炮制品含量测定 将不同蒸制方法制备的女贞子炮制品 , 照 “ 2.2.2”项
下方法制备供试品溶液 , 进样 10 μl, 依法测定峰面积 , 计算含量。色谱图见图
1,结果见表 1。
5-HMF对照品(A)生品(B)酒炖 8h品(C)
图 1　女贞子不同蒸制品的 HPLC图
表 1　女贞子样品 5-HMF含量测定结果
样品名称 收率(%) 5-HMFC/μg· g-1 RSD(%)
生品 100 0 0
清蒸 4 h 91.8 24.35 2.33
清蒸 8 h 83.4 31.87 2.23
酒蒸 4 h 91.0 17.36 1.86
酒蒸 8 h 76.6 23.00 3.37
酒炖 4 h 97.2 29.10 2.62
酒炖 8 h 94.6 54.45 2.84
　　n=3
3　讨论
由实验结果可知 , 女贞子生品不含 5-HMF,
蒸制后产生 , 其含量依次为酒炖 8 h>清蒸 8 h>
酒炖 4 h>清蒸 4h>酒蒸 8 h>酒蒸 4h。即相同
蒸制时间下 , 酒炖品 >清蒸品 >酒蒸品。若蒸制
方法相同 , 则随蒸制时间的延长 5 -HMF含量明
显升高。表明蒸制方法和蒸制时间对女贞子中 5
-HMF含量的影响不同。
酒炖品收率和 5-HMF含量均明显高于清蒸
品和酒蒸品 , 可能与密闭蒸时可防止酒的挥散及
水溶性成分流失有关。表明女贞子传统常采用酒
炖的方法炮制具有一定的科学性。
本文建立了女贞子中 5-HMF的 HPLC含量
测定方法 , 该方法操作简单 , 结果稳定可靠 , 可为
女贞子的质量控制提供科学依据。
女贞子蒸制过程中 5-HMF含量的变化规律
与糖类成分的变化之间的关系以及与补益作用增
强的关系正在进一步研究中。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ部 [ S] .北京:化学
工业出版社 , 2005:31.
[ 2] 　耿　放 ,王喜军.5-羟甲基 -2-糠醛(5-HMF)
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界科学技术 -中医药现代化 , 2005, 7(6):52.
[ 3] 　朱梅芬 ,刘向前 , 吴柱熹 ,等.地黄的炮制对梓醇
和 5-羟甲基糠醛含量的影响 [ J] .中国中药杂
志 , 2007, 32(12):1155.
[ 4] 　杜伟锋 ,丁　霞 ,蔡宝昌.山茱萸炮制前后 5-羟
甲基糠醛的含量变化研究 [ J] .中成药 , 2007, 29
(12):1801.
收稿日期:2009-03-24;　修订日期:2009-08-05
基金项目:国家自然科学基金(No.30870255)
作者简介:韩林涛(1976-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室助理研究员 ,在读博士研究
生 ,硕士学位 ,主要从事中药 、天然药物物质基础及作用机理研究工作.
＊通讯作者简介:方念伯(1949-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室教授 ,博士生导师 , 博士
学位 ,主要从事中药 、天然药物物质基础及作用机理研究工作.
鹅掌草根茎主要皂苷成分的含量测定
韩林涛 ,黄　芳 ,周云云 ,余尚工 ,方念伯＊
(湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室 ,湖北 武汉　430065)
摘要:目的 分析测定鹅掌草中主要皂苷成分之一 anhuienosideE的含量。 方法 采用 C18柱(沃特斯公司 , XterraRP18
3.5μm, 4.6mm×150 mm), 流动相为甲醇 -水(58∶42),流速 1 ml/min, 检测波长 209 nm。结果 皂苷 anhuienosideE在
2.14 ～ 10.70μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为 100.6% , RSD=1.28% (n=6)。
结论 该方法简便 ,灵敏 , 重复性好 ,可作为鹅掌草中主要皂苷成分 anhuienosideE的含量测定方法。
关键词:AnhuienosideE;　鹅掌草;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-2930-02
DeterminationofAnhuienosideEinRhizomeofAnemoneflaccidabyHPLC
HANLin-tao, HUANGFang,ZHOUYun-yun, YUShang-gong, FANGNian-bai＊
(HubeiColegeofTraditionalChineseMedical, Wuhan430065, China)
Abstract:ObjectiveTodetermineanhuienosideEinRhizomeofAnemoneflaccidabyHPLC.MethodsAnhuienosideEwas
separatedonXteraRP18 3.5μmcolumn(4.6mm×150mm)withamobilephaseofmethanol-water(58∶42)anddetectedat
awavelengthof209 nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof2.14 ～ 10.70μg(r=0.999 6).Theaveragere-
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12
coveryratewas100.6% andRSD=1.28% (n=6).ConclusionThemethodissimple, sensitiveandprecise.Itcanbeused
forthedeterminationofanhuienosideEinRhizomeofAnemoneflaccida.
Keywords:AnhuienosideE;　Anemoneflaccida;　HPLC
　　鹅掌草 AnemoneflaccidaFr.Schmidt系毛茛科银莲花属多年
生植物。该属植物约有 150种 ,世界各大洲均有分布 , 我国有 54
种 , 除海南省外 ,其它各省均有分布 [ 1 , 2] , 其中鹅掌草在湖北省西
部有广泛的分布 [ 1] 。该属植物可作药用的有竹节香附 A.rad-
deana、鹅掌草 A.flaccida、草玉梅 A.rivularis等数种 ,多以根或根
茎入药 , 具有祛风湿 、消肿解毒等功效 [ 1] 。现代药理研究表明 ,
鹅掌草根茎(又名地乌)有抗肿瘤 、抗炎 、解热镇痛 、镇静 、抗惊厥
等作用 , 其有效成分为三萜皂苷类 [ 2～ 4] 。本文建立了 HPLC法
测定鹅掌草中分离得到的主要皂苷成分 anhuienosideE含量 ,以
后将陆续报道其他含量较高皂苷类成分的含量测定 ,目的是为进
一步开发鹅掌草提供理论和实验依据 ,使得湖北省西部地区广泛
分布的这一植物资源得到更科学合理的利用。
1　仪器及试药
美国 Agilent1100serious高效液相色谱仪:四元泵 、在线脱气
机 、柱温箱 、可变波长紫外检测器;上海科导超声仪器有限公司
BD-2型超声波清洗器(功率:450W,频率:59KHz);赛多利斯公
司 BP211D型分析天平。所有试剂均为分析纯 , 水为二次蒸馏
水。对照品由湖北省中药标准化工程技术研究中心提供 [制备
色谱分离得到 , 并经 UV, IR, NMR, MS和文献对照 [ 4] , 检定为 an-
huienosideE, 即 3-O-α-L-吡喃鼠李糖 (1※ 2)-β -D-吡
喃葡萄糖 -齐墩果酸 -28-O-α-L-吡喃鼠李糖 (1※ 4)-β
-D-吡喃葡萄糖 (1※ 6)-β -D-吡喃葡萄糖苷 , 经 HPLC按
峰面积归一化法检查纯度为 99.5%] 。 鹅掌草根茎采集自湖北
省五峰县 , 中国科学院武汉植物园袁晓博士鉴定 , 凭证标本保存
于湖北中医学院中药标本馆(No.20075321)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 C18柱(Waters公司 , XterraRP18 3.5 μm, 4.6 mm×150mm),流动相:甲醇 -水(58∶42), 流速:1 ml/min, 柱温:
40℃, 检测波长:209 nm。进样量:对照品溶液和供试品溶液各 5
μl。理论塔板数以 anhuienosideE峰计不低于 2 000。结果见图 1
～ 2。
图 1　皂苷 anhuienosideE的 HPLC图谱
图 2　鹅掌草根茎的 HPLC图谱
2.2　对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的
皂苷 anhuienosideE对照品 10.70mg,置 10ml量瓶中 , 加入甲醇
溶解并定容至刻度 ,摇匀 , 即得。
2.3　供试品溶液的制备 取鹅掌草根茎粉末 0.15 g, 精密称定 ,
置 10 ml量瓶中 ,加入 60%甲醇 8ml超声提取 30min,放冷 , 并稀
释至刻度 ,摇匀 , 用微孔滤膜(0.22 μm)滤过 , 即得。
2.4　线性关系考察 取对照品溶液 2, 4, 6, 8, 10 μl分别进样 , 按
“ 2.1”项下色谱条件测定峰面积 ,以峰面积 A对进样量 m(μg)进
行回归 , 标准曲线为:A=148.640 6m-1.375 41, r=0.999 6 , 其
线性范围为 2.14 ～ 10.70μg。
2.5　精密度实验 取第 1批次本品粉末 0.15 g, 按 “ 2.3”项下的
方法制备供试品溶液 ,取该供试品溶液 , 连续进样 5次 ,对峰面积
进行考察 ,峰面积的 RSD为 1.17%, 结果表明其精密度良好。
2.6　稳定性实验 取同一份供试品溶液 , 分别于 0, 1, 2, 4, 8 h不
同时间间隔点样进样分析 ,对峰面积进行考察 ,峰面积的 RSD为
1.22%,结果表明样品溶液在 8h稳定。
2.7　重复性实验 取同一批次鹅掌草根茎粉末 5份精密称定 , 分
别按 “ 2.3”项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液 , 在上述色
谱条件下分别测定其色谱图 , 并计算其皂苷 anhuienosideE的含
量 , 结果其平均含量为 83.1 mg/g, RSD为 1.03%, 说明该法重复
性较好 。
2.8　加样回收率实验 精密称取已知皂苷 anhuienosideE含量的
鹅掌草根茎粉末 6份各 0.075 g, 分别加入干燥至恒重的对照品
适量 , 其余操作同 “ 2.3”项中的方法 , 精密吸取 5 μl注入高效液
相色谱仪 ,按所设定的 HPLC条件进行测定 , 结果表明平均回收
率为 100.6%, RSD=1.28% (n=6), 说明本方法准确度较好。
结果见表 1。
表 1　皂苷 anhuienosideE加样回收率实验结果
序号 原有量m/mg
加入量
m/mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
平均
(%)
RSD
(%)
1 6.24 4.97 11.14 98.59
2 6.23 4.99 11.24 100.40
3 6.23 6.20 12.48 100.81 100.6 1.28
4 6.23 6.23 12.56 101.60
5 6.22 7.45 13.65 99.73
6 6.24 7.42 13.82 102.16
2.9　样品测定 取鹅掌草根茎粉末 ,按 “ 2.3”项下方法制备各供
试品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各 5μl, 注入高效液相色
谱仪 , 按所设定的 HPLC条件进行测定 , 每个样品重复测定 3次 ,
按外标法计算各样品中皂苷 anhuienosideE的含量。结果见
表 2。
表 2　样品含量测定结果
批次 取样量 m/g含量 m/mg· g-1 平均含量 m/mg· g-1 RSD(%)
1 0.150 1 83.0
1 0.150 9 82.8
2 0.150 3 86.4 84.5 1.72
2 0.151 0 85.8
3 0.150 2 84.4
3 0.150 4 84.8
　　n=3
3　讨论
皂苷 anhuienosideE为鹅掌草根茎中含量较高的皂苷成分之
一 , 该皂苷的结构经制备色谱分离纯化 , 并用紫外光谱 、红外光
谱 、核磁共振波谱 、质谱等方法结合文献数据确定其结构 ,本文笔
者研究发现其具有诱导人宫颈癌 HeLa细胞凋亡的作用 , 研究结
果另文发表。在了解其活性的基础上 , 建立 anhuienosideE含量
测定方法 , 这对于控制鹅掌草根茎的质量和将鹅掌草根茎中皂苷
类成分进一步开发成抗肿瘤新药具有重要的意义。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12 时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期
本研究预实验比较了超声法和回流提取法 , 皂苷 anhuieno-
sideE测得值无明显差异 , 而超声处理简便快速 , 故确定提取方
法为超声提取。
将对照品溶液在 190 ～ 800 nm进行扫描 ,结果皂苷 anhuieno-
sideE的最大吸收波长为 209 nm,故选择 209 nm作为检测波长。
从分析结果可知 , 3批次鹅掌草根茎中皂苷 anhuienosideE
的含量差别不大 , 原因可能是采集地点较集中且为同一时间段内
采收。今后应考察不同采集地点 、不同采集时间鹅掌草根茎中皂
苷 anhuienosideE的含量 , 为质量标准的制订提供更全面研究
资料。
参考文献:
[ 1 ] 　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 [ M] .北京:人民
卫生出版社 , 1988, 28:1.
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国中药杂志 , 2008, 33(14):1696.
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1997, 14(1):33.
[ 4 ] 　YeWC, ZhangQW, ZhaoSX, etal.Fournewoleananesaponins
fromAnemoneanhuiensis[ J] .ChemPharmBul, 2001, 49(5):632.
收稿日期:2009-01-10;　修订日期:2009-07-08
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划(No.2006BAI09B06-09)
作者简介:黄勤挽(1979-),男(汉族),四川成都人 ,现为成都中医药大学
讲师 ,博士学位 ,主要从事中药炮制学的教学和科研工作.
＊通讯作者简介:胡昌江(1952-), 男(汉族),四川达州人 ,现为成都中医
药大学教授 ,博士研究生导师 ,主要从事中药炮制学的教学和科研工作.
益智仁盐炙对豚鼠膀胱逼尿肌活动影响的研究
黄勤挽1 , 胡昌江 1＊ , 李兴华1 , 李文兵 1 , 余凌英1 , 谢秀琼 1 , 杨　婧 2
(1.成都中医药大学 ,四川 成都　611137;　2.四川省第五人民医院 ,四川 成都　610031)
摘要:目的 观察益智仁盐炙后对豚鼠膀胱逼尿肌收缩活动的影响并探讨其作用机理。方法 将膀胱逼尿肌肌条置于灌
流肌槽内 , 采用分别加兴奋剂和累计加药物的方法 , 观察肌条的收缩活动。结果 益智仁和盐益智仁剂量依赖性对乙酰
胆碱引起的膀胱逼尿肌兴奋具有显著的拮抗作用 , 可降低肌条收缩的平均张力 , 且盐炙品效果优于生品。结论 益智仁
和盐益智仁作用膀胱的靶点可能是膀胱逼尿肌的 M受体 , 具有类似 M受体阻断剂的作用 ,盐炙后作用更强。
关键词:益智仁;　盐炙;　膀胱逼尿肌;　收缩活动
中图分类号:R283.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-2932-02
StudyoftheStir-heatedAlpiniaeoxyphylaeFructusonContractileActivityofIsolated
BladderDetrusorMuscleofGuineaPigs
HUANGQin-wan1 , HU Chang-jiang1＊ , LIXing-hua1 , LIWen-bing1 , YU Ling-ying1 , XIE Xiu-qiong1 ,
YANGJing2
(1.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedcine, Chengdu, Sichuan611137, China;2.TheFifthHospital
ofSichuanProvince, Chengdu, Sichuan610031, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofthecrudeAlpiniaeoxyphyllaeFructus(CAOF)andthestir-heatedAlpiniaeoxyphyl-laeFructus(SAOF)oncontractileactivityofisolatedbladderdetrusormusclestripsofguineapigsanditspossiblemechanism.
MethodsBladderdetrusorstripsweresuspendedintissuechambers, theCAOFandtheSAOFandstimulantdrugofvariedcon-
centrationwereaddedaccumulativelyinthem.Observedthecontractileactivityofbladdermusclestrips.ResultsBothoftheCA-
OFandtheSAOFstimulatedthebladderdetrusorstripsviaacetylcholineantagonismwithanincreasingdosage, whichcouldin-
creasetherestingtension, andSAOFshowedastrongerefect.ConclusionTheCAOFandtheSAOFinfluenceontheM-recep-
torofbladdersmoothmuscleasM-receptorinhibitorthusdecreasingtheconstructionofbladdersmoothmuscle.
Keywords:AlpiniaeoxyphylaeFructus;　Stir-heatedwithsaltsolution;　Bladderdetrusormusclestrips;　Contractileactiv-ity
　　益智为姜科山姜属植物益智 AlpiniaoxyphylaMiq.的干燥成
熟果实 ,药用部位为种仁。临床上常用有生品和盐炙品 , 生品辛
温而燥 , 主要归脾经 , 以温脾止泻 、收摄涎唾力胜 ,多用于腹痛吐
泻 、口涎自流等症;盐炙后可缓和辛燥之性 ,主要归肾经 , 专行下
焦 , 长于固精 、缩尿 , 用于肾气虚寒的遗精 、早泄 、尿频 、遗尿 、白浊
等症 , 如清·张仲岩 《修事指南》指出:“益智仁盐炒 , 止小便频
数” 。益智仁盐炙后增强 “缩尿”作用 , 可能与影响膀胱逼尿肌的
活动有关。本文观察了益智仁生品和盐炙品对豚鼠离体膀胱逼
尿肌活动的影响 , 报道如下。
1　材料与仪器
1.1　动物 豚鼠 , 英国种 ,一级 , 体质量 250 ～ 300 g, 雌雄不拘 ,由
四川省动物专委会饲养场提供。质量合格证:川实动管质第 99
-12号。
1.2　药材 益智 , 产地海南省琼中市 ,购于海南省中药材公司 , 经
本校中药标本中心卢先明教授鉴定 , 为姜科山姜属植物益智 Al-
piniaoxyphylaMiq.的干燥成熟果实。
1.3　仪器与试药 AS-HJ-Ⅱ型恒温平滑肌槽(成都遨生电子
有限公司);JH-2型肌张力传感器(北京航天医学工程研究
所);BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)。
氯化乙酰胆碱(化学纯 , 上海三爱思试剂有限公司 , 批号:
20061130), BaCl2(分析纯 , 成都化学试剂厂 , 批号:721231),磷酸
组胺(生化试剂 ,上海伯奥生物科技有限公司 ,批号:070107)。
2　方法
2.1　预处理 将益智药材去壳制成益智仁饮片 , 并将净益智仁盐
灸后制成盐益智仁饮片。分别粉碎 , 过 2号筛 , 用 75%乙醇回流
提取两次 , 减压回收乙醇 , 制备成 1 g生药 /ml的药液 , 备用。
Krebs液配制:称取 NaCl6.92g, KCl0.35 g, KH2PO4 0.16 g, Mg-SO
4
· 7H
2
O0.29 g, NaHCO
3
2.10 g, CaCl
2
0.28 g和无水葡萄糖
2.00 g, 加水溶解定容至 1 000ml。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12