全 文 ：要是由于心纳素(ANP)是鸟苷酸环化酶的激活剂 , 腺苷酸环化
酶的抑制剂 , 当脾虚出现 ANP水平下降时 , 就有可能导致 cAMP
和 cGMP的浓度水平出现明显的变化 [ 8] 。同时 , 过往的研究发
现 , 脾虚时动物胸腺组织中 DNA含量比正常对照组明显下降 ,
说明胸腺细胞在正常增殖过程中受到了阻抑所致 [ 9] 。而细胞功
能的损伤与环核苷酸有关系如何呢? 研究显示 , 凡能降低细胞
内 cAMP含量的因素均能促进 DNA的合成和细胞的分裂增
殖 [ 10] 。而应用补中益气丸后 , 降低了脾虚大鼠 cAMP含量及
cAMP/cGMP比值 , 胸腺质量和指数也与正常组无差异 (P>
0.05), 提示该方药通过调节环核苷酸水平 , 促进组织的细胞分
裂增殖和营养物质的合成 ,使机体免疫功能有了提高 , 表明补中
益气丸具有免疫增强的作用。
综上所述 , 补中益气丸能降低脾虚证大鼠 cAMP含量及
cAMP/cGMP比值 , 提高胸腺质量及指数 , 提示益气健脾方药的
作用机理与调节环核苷酸水平有关 , 并为防治脾虚证的研究提
供了理论依据。
参考文献:
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科大学联合出版社 , 1998:176.
(收稿日期:2009-03-09　编辑:林飞)
　　基金项目:国家自然科学基金资助项目 , 〔No.30870255〕。
作者简介:韩林涛(1976-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室助理研究员 ,学术秘书 ,硕
士学位 ,在读博士生 ,主要从事中药 、天然药物物质基础及作用机理研究 ,电话:027-62029728, E-MAIL:hanlt711@163.com。
　＊通讯作者:方念伯(1949-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室主任 ,博士学位 ,教授 ,博士生导师 ,主要
从事中药 、天然药物物质基础及作用机理研究 , 电话:027-68890247, E-MAIL:fangyushang@hotmail.com。
【药学研究】
鹅掌草根茎主要皂苷成分的含量测定(Ⅱ)
韩林涛 ,周云云 ,柳冬月 ,余尚工 ,方念伯＊
(湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室 , 湖北 武汉 430065)
　　摘要:目的　分析测定鹅掌草中主要皂苷成分之一鹅掌草皂甘 I的含量。方法　采用 C18柱(沃特斯公司 , Xterra
RP18 3.5μm, 4.6mm×150mm),流动相为甲醇 -水(52:48), 流速 1.0 mL/min, 检测波长 206 nm。结果　鹅掌草皂苷Ⅰ
在 2.04μg-10.20μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.99985), 平均回收率为 100.86%, RSD=2.56%(n
=6)。结论　该方法简便 , 灵敏 ,重复性好 , 可作为鹅掌草中主要皂苷成分鹅掌草皂苷 I的含量测定方法。
　　关键词:鹅掌草皂苷 I;鹅掌草;高效液相色谱;含量测定
中图分类号:R284.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1008-978X(2009)04-0024-03
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DeterminationofmainsaponincontentinRhizomeofAnemoneflaccid
HANLin-tao, ZHOUYun-yun, LIUDong-yue, YuShang-gong, FANGNian-bo＊
(Provincial-ministryco-establishedKeyLaboratoryofResourcesandCompoundofChineseMedicine
ofMinistryofEducation, HubeiUniversityofChineseMedicine, Wuhan430065, China)
Abstract:Objective　TodetermineanemoneflaccidasaponinIcontent.Methods　AnemoneflaccidasaponinIwasseparatedonXterra
RP18 3.5μmcolumn(4.6mm×150mm)withamobilephaseofmethanol-water(52:48)andavelocityof1.0 mL/minanddetectedata
wavelengthof206 nm.Result　Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof2.04-10.20μg(r=0.99985).Theaveragerecoveryratewas
100.86% andRSD=2.56% (n=6).Conclusion　ThismethodcanbeusedforthedeterminationofanemoneflaccidasaponinIinRhizome
ofAnemoneflaccidaduetoitssimplicity, sensitivityandprecision.
Keywords:anemoneflaccidasaponinI;Anemoneflaccida;HPLC;determinationofcontent
　　鹅掌草(AnemoneflaccidaFr.Schmidt)系毛茛科银莲花属多
年生植物。该属植物约有 150种左右 ,世界各大洲均有分布 , 我
国有 54种 ,除海南省外 , 其它各省均有分布 , 其中鹅掌草在湖北
省西部有广泛的分布 [ 1] 。 该属植物可作药用的有竹节香附(A.
raddeana)、鹅掌草:(A.flaccida)、草玉梅(A.rivularis)等数种 , 多
以根或根茎入药 , 具有祛风湿 、消肿解毒等功效 [ 1] 。现代药理研
究表明 [ 2-4] ,鹅掌草根茎(又名地乌)有抗肿瘤 、抗炎 、解热镇痛 、
镇静 、抗惊厥等作用 , 其有效成分为二萜皂苷类。笔者建立了
HPLC法测定鹅掌草中分离得到的主要皂苷成分鹅掌草皂苷 I含
量的方法 , 以后将陆续报道其他含量较高皂苷类成分的含量测
定 , 目的是为进一步开发鹅掌草提供理论和实验依据 , 使得湖北
省西部地区广泛分布的这一植物资源得到更科学合理的利用。
1　仪器及试药
美国 Agilent1100serious高效液相色谱仪:四元泵 、在线脱气
机 、柱温箱 、可变波长紫外检测器 , 上海科导超声仪器有限公司
BD-2型超声波清洗器(功率:450W,频率:59KHz), 赛多利斯公
司 BP211D型分析天平。所有试剂均为分析纯 , 水为二次蒸馏
水。对照品(由制备色谱分离得到 , 并经 UV, IR, NMR, MS和文
献对照 [ 5] , 检定为鹅掌草皂苷 I, 即 3-O-β -D-吡喃葡萄糖醛
酸 -齐墩果酸 -28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1※ 4)-β -D-吡
喃葡萄糖(1※ 6)-β -D-吡喃葡萄糖苷 , 经 HPLC按峰面积归
一化法检查纯度为 99.5%)。鹅掌草根茎采集自湖北省五峰县 ,
经湖北中医学院陈科力教授鉴定。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
C18柱(Waters公司 , XterraRP18 3.51μm, 4.6mm×150mm),
流动相:甲醇 -水(52:48), 流速:1.0mL/min, 柱温:40℃, 检测波
长:206nm。进样量:对照品溶液和供试品溶液各 5μL。 理论塔
板数以鹅掌草皂苷 I峰计不低于 3000。结果见图 1-图 2。
图 1　鹅掌草皂苷Ⅰ的 HPLC图谱
图 2　鹅掌草根茎 HPLC图谱
2.2　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的鹅掌草皂苷 I对照品
10.2mg,置 10mL量瓶中 , 加入甲醇溶解并定容至刻度 , 摇匀 ,
即得。
2.3　供试品溶液的制备
取鹅掌草根茎粉末 1.5g,精密称定 , 置 100mL量瓶中 ,加入
60%甲醇 80mL超声提取 30min,放冷 , 并稀释至刻度 , 摇匀 , 用微
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孔滤膜(0.22μm)滤过 ,即得。
2.4　线性关系考察
取对照品溶液 2μL、 4μL、 6μL、 8μL、10μL分别进样 , 按 2.1
项下色谱条件测定峰面积 ,以峰面积 A对进样量 m(μg)进行回
归 , 标准曲线为:A=178.85m-8.24, r=0.99985, 其线性范围为
在 2.04μg-10.20μg之间。
2.5　精密度试验
取第 1批次本品粉末 1.5g, 按 2.3项下的方法制备供试品溶
液 , 取该供试品溶液 ,连续进样 5次 , 对峰面积进行考察 ,峰面积
的 RSD为 1.23%,结果表明其精密度良好。
2.6　稳定性实验
取同一份供试品溶液 , 分别于 0h、 1h、 2h、4h、8h、 12h不同时
间间隔点样进样分析 , 对峰面积进行考察 , 峰面积的 RSD为
1.30%,结果表明样品溶液在 12h内稳定。
2.7　重复性实验
取同一批次鹅掌草根茎粉末 5份精密称定 ,分别按 2.3项供
试品溶液的制备方法制备供试品溶液 , 在上述色谱条件下分别
测定其色谱图 , 并计算其鹅掌草皂苷 I的含量 , 结果其平均含量
为 73.4mg/g, RSD为 1.40%,说明该法重复性较好。
2.8　加样回收率实验
精密称取已知鹅掌草皂苷 I含量的鹅掌草根茎粉末 6份各
0.75g,分别加入干燥至恒重的对照品适量 ,其余操作同 2.3项中
的方法制备供试品溶液 , 精密吸取供试品溶液 5μL注入高效液
相色谱仪 , 按所设定的 HPLC条件进行测定 , 结果表明平均回收
率为 100.86%, RSD=2.56%(n=6), 说明本方法准确度较好。
结果见表 1。
表 1　鹅掌草皂苷Ⅰ加样回收率实验结果
序号 原有量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1
2
3
4
5
6
5.52
5.50
5.51
5.51
5.52
5.50
4.45
4.40
5.49
5.58
6.69
6.74
10.12
9.95
11.23
11.07
12.04
12.18
103.48
101.24
104.13
99.64
97.50
99.14
　
　
100.86
　
　
　
　
　
2.56
　
　
　
2.9　样品测定
取鹅掌草根茎粉末 , 按 2.3项下方法制备供试品溶液。取对
照品溶液和供试品溶液各 5μL, 注入高效液相色谱仪 ,按所设定
的 HPLC条件进行测定 , 每个样品重复测定 3次 , 按外标法计算
各样品中鹅掌草皂苷 Ⅰ的含量。结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
批次 取样量(g)
含量
(mg· g-1)
平均含量
(mg· g-1)
RSD
(%)
1
1
2
2
3
3
1.5013
1.5092
1.5036
1.5107
1.5024
1.5048
73.04
71.64
73.64
73.68
71.90
70.99
　
　
72.48
　
　
　
　
　
1.56
　
　
　
 3　讨论
鹅掌草皂苷Ⅰ 为鹅掌草根茎中含量较高的皂苷成分之一 ,
该皂苷的结构经制备色谱分离纯化 , 并用紫外光 、红外光谱 、核
磁共振波谱 、质谱等方法结合文献数据确定其结构 [ 5] , 笔者研究
发现其具有诱导人宫颈癌 HeLa细胞调亡的作用 , 研究结果另文
发表。在了解其活性的基础上 , 建立鹅掌草皂苷Ⅰ 含量测定方
法 , 这对于控制鹅掌草根茎的质量和将鹅掌草根茎中皂苷类成
分进一步开发成抗肿瘤新药具有重要的意义。
本研究预实验比较了超声法和回流提取法 , 鹅掌草皂苷 Ⅰ
测得值无明显差异 , 而超声处理简便快速 , 故确定提取方法为超
声提取。
将对照品溶液在 190nm-800nm进行扫描 ,结果鹅掌草皂苷
Ⅰ的最大吸收波长为 260nm, 故选择 206nm作为检测波长。
从分析结果可知 , 3批次鹅掌草皂苷 Ⅰ的含量差别不大 , 原
因可能是采集地点较集中且为同一时间段内采收。 今后应考察
不同采集地点 、不同采集时间鹅掌草根茎中鹅掌草皂苷 Ⅰ的含
量 , 为质量标准的制订提供更全面研究依据。
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(收稿日期:2009-03-10　编辑:郑晓屏)
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