全 文 ：收稿日期:2013-07-31; 修订日期:2013-12-12
基金项目:国家自然科学基金( No． 31000158; 30870255)
作者简介:李明明( 1989-) ，女( 汉族) ，湖北荆门人，湖北中医药大学药学
院硕士研究生，主要从事中药的品种、质量及资源开发研究工作．
* 通讯作者简介:韩林涛 ( 1976-) ，男( 汉族) ，湖北武汉人，湖北中医药大
学中药资源与中药复方教育部重点实验室副研究员，博士学位，主要从事
中药及其复方物质基础与作用机理研究工作．
鹅掌草近缘种鹤峰银莲花中
有效成分五加苷 K的含量测定
李明明，韩林涛* ，黄 芳，杨红兵
(湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室，湖北 武汉 430065)
摘要:目的 分析测定鹤峰银莲花中特征性皂苷成分五加苷 K 的含量。方法 采 C18 ( Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB － C18
4． 6 mm × 150 mm) 分析柱，流动相为甲醇 －水( 65∶ 35) ，流速 1． 0 ml /min，检测波长 210 nm。结果 五加苷 K在 2． 01 ～
10． 05 μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系( r = 0． 999 2) ，平均回收率为 98． 9%，ＲSD = 1． 11% ( n = 5) 。结论 该
方法简便，灵敏，重复性好，可用于对鹤峰银莲花的质量控制，为鹅掌草近缘种质量评价及开发提供实验依据。
关键词:鹅掌草; 鹤峰银莲花; 五加苷 K; 高效液相色谱
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 05． 006
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 05-1041-02
Content Determination of Eleutheroside K in Anemone hofengensis related to Anemone
flaccida
LI Ming-ming，HAN Lin-tao* ，HUANG Fang，YANG Hong-bing
( Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Ｒesource and Compound Prescription，Ministry of Education，
Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)
Abstract: Objective To determine Eleutheroside K in Anemone hofengensis by HPLC． Methods Eleutheroside K was separated
on Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB － C18 column( 4． 6mm × 150mm) with a mobile phase of methanol － water( 65∶ 35) and detec-
ted at a wavelength of 210 nm． Ｒesults The calibration curve was linear in the range of 2． 01μg ～ 10． 05μg( r = 0． 999 2) ． The av-
erage recovery rate was 98． 9% and ＲSD = 1． 11% ( n = 5) ． Conclusion The method is simple，sensitive and precise． It can be
used for the quality control of Anemone and provide experimental evidence for the quality evaluation and development of the relat-
ed plants of Anemone flaccida．
Key words: Anemone flaccida; Anemone hofengensis; Eleutheroside K; HPLC
鹤峰银莲花 Anemone hofengensis 在植物分类学上属毛茛科
(Ｒanunculacae)银莲花属(Anemone L．)鹅掌草组(Sect． Stolonif-
era (Ulbr．)Juz)多年生植物，为鹅掌草组广布种鹅掌草 A． flacci-
da Fr． Schmidt的近缘种，分布于长江中下游地区［1］。本实验前
期研究发现，鹅掌草皂苷可抑制 4 种肿瘤细胞环氧合酶 － 2(COX
－2)mＲNA及蛋白的高表达，从而发挥抗肿瘤细胞增殖作用。
考虑到抑制环氧合酶 － 2 活性为该类皂苷抗肿瘤作用机理，很有
希望从鹅掌草及近缘种中继续筛选出具有更强抗肿瘤活性的单
体皂苷及特征性皂苷类成分。五加苷 K是鹅掌草近缘种中具有
抗癌作用的重要活性成分之一［2］。为了更好地开发鹅掌草近缘
种，规范其质量控制标准，本文建立了 HPLC 法测定鹤峰银莲花
中五加苷 K的含量。
1 仪器与试药
DIONEX Ultimate 3000 高效液相色谱仪:四元泵、在线脱气
机、柱温箱、Ultimate 3000Variable wavelength detector 可变波长紫
外检测器，C － Ｒ4A数据处理机;昆山市超声仪器有限公司 KQ －
300B型超声波清洗器(功率:300 W，频率 40 KHz);赛多利斯公
司 BP211D型分析天平。甲醇:色谱醇、水:二次蒸馏水。其它试
剂均为分析纯。五加苷 K:从鹤峰银莲花中提取分离制备，经波
谱鉴定，并经 HPLC分析为单一峰，纯度为 99． 0%;鹤峰银莲花采
自湖北省五峰县，经本校生药室鉴定为正品。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 C18柱(Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB － C18 4． 6
mm × 150 mm)，流动相:甲醇 －水(65∶ 35) ，流速:1． 0 ml /min，柱
温:30 ℃，检测波长:210 nm。进样量:对照品溶液和供试品溶液
各 10 μl。理论塔板数以五加苷 K 峰计不低于 3 000。结果见
图 1 ～ 2。
图 1 对照品五加苷 K的 HPLC图谱
时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 5
图 2 供试品五加苷 K的 HPLC图谱
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取经提取纯化的单体五加苷 K
10． 05 mg，置 10 ml量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，
即得。
2． 3 供试品溶液的制备 取鹤峰银莲花根茎粉末 1． 0 g(过 3 号
筛)，精密称定，置 100 ml 量瓶中，加入甲醇 80 ml 超声提取 1 h
放冷，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，
即得。
2． 4 线性关系考察 精密移取对照品溶液 0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，2． 5
ml置于 5 ml的容量瓶中，用甲醇定容，分别取 10 μl 按“2． 1”项
下色谱条件测定峰面积，以峰面积 A对进样量(μg)进行回归，标
准曲线为:A = － 0． 362 5，r = 0． 999 2 ，回归方程:Y = 2． 915 2X －
0． 362 5，其线性范围为 2． 01 ～ 10． 05 μg。
2． 5 精密度试验 取该批次本品粉末 1． 0 g，按“2． 3”项下的方
法制备供试品溶液，取该供试品溶液，连续进样 5 次，对峰面积进
行考察，峰面积的 ＲSD为 1． 84% ，结果表明其精密度良好。
2． 6 精密度试验 取该批次本品粉末 1． 0 g，按“2． 3”项下的方
法制备供试品溶液，取该供试品溶液，连续进样 5 次，对峰面积进
行考察，峰面积的 ＲSD为 1． 86% ，结果表明其精密度良好。
2． 7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8h 不
同时间间隔点样进样分析，对峰面积进行考察，峰面积的 ＲSD 为
1． 12% ，结果表明样品溶液在 8 h稳定。
2． 8 重复性试验 取同一批次鹤峰银莲花根茎粉末 5 份精密称
定，分别按“2． 3”项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在
上述色谱条件下分别测定其色谱图，并计算其含五加苷 K 的百
分含量，结果其平均含量为点 4． 27 mg /g，ＲSD 为 1． 25%，说明该
法重复性较好。
2． 9 加样回收率实验 精密量取已知五加苷 K 含量的鹤峰银莲
花根茎粉末 5 份各 0． 075 g，分别加入干至恒重的对照品适量，其
余操作同“2． 3”项中的方法，精密吸取 5 μl注入高效液相色谱
仪，按所设定的 HPLC 条件进行测定，结果表明平均回收率为
98． 9%，ＲSD = 1． 11% (n = 5)，说明本方法准确度较好。结果见
表 1。
表 1 五加苷 K加样回收率实验结果
序号
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
(%)
平均
(%)
ＲSD
(%)
1 2． 42 1． 66 4． 01 97． 5
2 2． 43 1． 65 4． 04 98． 1
3 2． 43 1． 87 4． 28 99． 0 98． 9 1． 11
4 2． 43 2． 12 4． 68 99． 8
5 2． 42 2． 11 4． 65 100． 1
2． 10 样品含量测定 取鹤峰银莲花根茎粉末，按“2． 3”项下方
法制备供试品溶液。取对照品和供试品溶液各 10 μl，注入高效
液相色谱仪，按所设定的 HPLC 条件进行测定，按外标法计算 3
批次样品中五加苷 K的含量，结果分别为 4． 15 mg /g，4． 35 mg /g，
4． 29mg /g，ＲSD = 2． 41%。
3 讨论
随着生存环境、生活水平的变化及医药领域的发展，人类疾
病谱发生了明显的变化，普通传染性疾病逐渐被人们控制，而恶
性肿瘤则成为日益常见、严重威胁人类生命和生活质量的主要疾
病之一，抗肿瘤药物的研发越来越受到医药界的关注。
随着中药现代化的进展，越来越多的民间用药被系统研究，
该属植物含有丰富的五环三萜皂苷，尤其以齐墩果酸糖苷和常春
腾配基糖苷为主，是寻找高效、低毒、消炎、镇痛、抗菌、抗肿瘤类
药物的对象之一［3］。药理学研究表明，毛茛科银莲花属植物鹅
掌草总皂苷有显著的抗炎及抗肿瘤作用。从分析结果可知，鹤峰
银莲花中五加苷 K的含量为 0． 43%。而且不同批次样品间有较
稳定的含量。五加苷 K 是银莲花属主要皂苷成分之一，具有显
著的抗肿瘤、抗炎用，通过这次含量测定发现在鹅掌草近缘种鹤
峰银莲花中有含量较高，可以作为其质量控制标准，且该方法简
便，灵敏，重复性好，可用于对鹤峰银莲花的质量控制。本研究为
鹅掌草近缘种质量评价及开发提供实验依据。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］． 北京:人民
卫生出版社，2005:16．
［2］ 吴凤锷．中药竹节香附化学成分的研究［J］． 科学通报，1984，29
(17) :1047．
［3］ 刘 翔，王昌华，林茂祥，等． 重庆银莲花属药用植物资源研究
［J］．资源开发与市场，2008，24(5) :450．
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 5 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 5 期