全 文 ：!#$郝博慧，杨! 鑫，马! 莺! （哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江哈尔滨 !###!） 摘$ 要：实验选用 %&’()&法进行蕨麻粗多糖脱蛋白研究，采用正交实验研究了料液比、静置时间、摇振时间、氯仿*正丁
醇（’ + ’）对蕨麻粗多糖脱蛋白工艺的影响。最佳脱蛋白条件是料液比 !*!、静置时间 ,-./、摇振时间 0#-./、氯仿*正
丁醇（’ + ’）*!。
关键词：蕨麻多糖，脱蛋白
#$%& ’( %)*+’#),(,-.#,’( ,( )/#+.0#,’( ’1 *’2&3.004.+,%)3 1+’5 !#$%#&’’(%)$*&% 6& )7.8) !#$%1&’(，)*+ ,(-，. )(-/!
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中图分类号：A%,#!D! 文献标识码：E 文 章 编 号：!##,1#0#F（,#!!）#,1#,G1#0
收稿日期：,#!#1#!1#G$!通讯联系人 作者简介：郝博慧（!HI,1），女，在读硕士研究生，研究方向：天然产物 化学。$ $蕨麻（!#$%#&’’(%)$*&%）属蔷薇科鹅绒委陵菜属 植物的块根，又名人参果，蕨麻藏语称“卓老沙僧”， 是一种常用藏药，具有健脾益肾、生津止渴、益气补 血等功效［!］。蕨麻粗多糖的研究主要集中于多糖提 取工艺以及多糖理化性质的研究，对于蕨麻粗多糖 %&’()&法脱蛋白工艺的研究目前还未见报道。实验 选取了主要影响蛋白质脱除效果的料液比、氯仿*正 丁醇（’ + ’）、静置时间和摇振时间进行了单因素实 验。在此基础上，设计正交实验，确定了最佳的脱蛋 白工艺条件。通过本研究不仅为蕨麻粗多糖的进一 步纯化提供了科学依据，而且为合理地开发和利用 蕨麻资源奠定了理论基础。 材料与方法<br<= 材料与设备<br蕨麻$ 采自青海；重蒸酚，葡萄糖，IJ磷酸，小
牛血清，氯仿，正丁醇。
AF 新世纪紫外可见分光光度计$北京谱析通用 仪器有限公司；旋转蒸发仪 K91,###$ 上海亚荣生
化仪器厂；低速离心机 LM 1 ,N $北京医用离心 机厂。 <=>! 实验方法 !D,D!$ 粗多糖制备$参见文献［,］。 !D,D,$ 蛋白质含量测定$参见文献［0］。 !D,D0$ 多糖含量测定$苯酚硫酸法，参见文献［G］。 !D,DG$ %&’()&法脱蛋白工艺流程$蕨麻粗多糖#%&’()& 法脱蛋白#静置#摇振#过滤#醇沉#蕨麻脱蛋白多糖 !D,D$ %&’()&法脱蛋白工艺的研究
!D,DD!$单因素实验$ 取蕨麻粗多糖 ,) 配成浓度
为 #DJ 的蕨麻粗多糖溶液，选取了料液比、氯
仿*正丁醇、静置时间和摇振时间为实验单因素条
件（/ O 0）。
(D不同料液比对于脱蛋白效果的影响：#DJ蕨
麻粗多糖溶液 0#-L，配成氯仿*正丁醇 *! 的 %&’()&
试剂，静置时间 ,#-./，摇振时间 0#-./，料液比分别
为 !*!、,*!、0*!、G*!、*!，然后按照脱蛋白工艺进行实
验（/ O 0）。响：#DJ蕨麻粗多糖溶液 0#-L，配成氯仿*正丁醇*!
的 %&’()& 试剂，静置时间分别为 !#、,#、0#、G#、
#-./，摇振时间 0#-./，料液比 ,*!，按照脱蛋白工艺
进行脱蛋白实验（/ O 0）。8D不同摇振时间对于脱蛋
白效果的影响：#DJ蕨麻粗多糖溶液 0#-L，配成氯
仿*正丁醇 *! 的 %&’()& 试剂，静置时间 ,#-./，摇振
时间分别为 !#、!、,#、,、0#-./，料液比 ,*!，按照脱
蛋白工艺进行脱蛋白实验（/ O 0）。7D不同氯仿*正丁
醇（’ + ’）对于脱蛋白效果的影响：#DJ蕨麻粗多糖溶
!#
液 !#$，静置时间 %#&’，摇振时间 %(#&’，料液比 %)*，配成氯仿)正丁醇比例分别为 %)*、!)*、+)*、()*、 ,)*、-)* 的 ./012/试剂，按照脱蛋白工艺进行脱蛋白 实验（’ 3 !）。 *4%4(4%5 正交实验5 在单因素实验的基础上，选择料 液比、静置时间、摇振时间和氯仿：正丁醇（0 6 0）进行 正交实验设计，每个因素设 ! 个水平，运用$7（!
+）正
交实验法进行实验，因素水平见表 *。
表 *5 ./012/法脱蛋白正交实验因素水平表
水平
因素
8料液比
（0 6 0）
9氯仿)正丁醇
（0 6 0）
:静置时间
（#&’）
;摇振时间
（#&’）
* *)* ()* * %
% %)* ,)* % %(
! !)* -)* ! !
! 结果与分析
!#$%&’()&法脱蛋白单因素实验结果 %4*4*5 不同料液比（0 6 0）脱蛋白效果5 由图 * 可见， 当料液比（0 6 0）由 *)*增大到 %)* 时，蛋白质去除率逐 渐升高，最高达到 -,<，随着料液比逐渐升高，蛋白质 去除率逐渐下降，同时当料液比为 %)* 时，多糖损失率 达到最低，为 ,%<，所以选取最佳料液比为 %)*。 图 *5 不同料液比对脱蛋白效果的影响 %4*4%5 不同静置时间脱蛋白效果5 由图 % 可见，随着 静置时间的延长，蛋白质去除率的变化是先下降后 上升。蛋白去除率最高是在 +#&’，去除率达到 ,,<，但在 +#&’时多糖损失率较高，达到 (!<。同 时随着时间的延长多糖损失率变化明显，在 %#&’ 时达到最低为 !,<，综合蛋白去除率和多糖损失率 考虑，选取最佳静置时间为 %#&’。 图 %5 不同静置时间对脱蛋白效果的影响 %4*4!5 不同摇振时间脱蛋白效果5 由图 ! 可见，随着 摇振时间的延长，蛋白质去除率变化不明显，同时多 糖损失率变化明显，在 %(#&’ 时的多糖损失率最低 为 !%<，所以实验选取最佳摇振时间 %(#&’。 %4*4+5 不同氯仿)正丁醇（ 0 6 0）脱蛋白效果 5 由图 + 可见，氯仿)正丁醇（ 0 6 0）的变化对蛋白去除率没有 明显影响，而多糖损失率却在氯仿)正丁醇（0 6 0）,)* 图 !5 不同摇振时间对脱蛋白效果的影响 时达到最低，为 !<，所以选取最佳氯仿 )正丁醇 （0 6 0）,)*。 图 +5 不同氯仿)正丁醇（0 6 0）对脱蛋白效果的影响 !#! %&’()&法脱蛋白正交实验结果 从表 % 的正交实验结果和方差分析可知，以蛋 白质的去除率为主要评定指标，影响蕨麻粗多糖脱 蛋白效果因素的顺序为 : = ; = 9 = 8，即静置时间 = 摇振时间 =氯仿)正丁醇（0 6 0）=料液比。最佳脱蛋 白工艺为 :*;!9*8*，即料液比 *)*、氯仿)正丁醇()*、 静置时间 *#&’、摇振时间 !#&’。 表 %5 正交实验结果及分析表 实验号 8 9 : ; 蛋白质 去除率（<） * * * * * +% % * % % % !> ! * ! ! ! !+ + % * % ! +, ( % % ! * !+ , % ! * % %> - ! * ! % %- > ! % * ! !- 7 ! ! % * !- ?* **+4 **(4 *%(4 **!4 ?% *>4 *74 *!4 7!4 ?! **4 774 7(4 **-4 @* %>4( %>4-( !*4%( %>4%( @% %-4 %-4%( %(4-( %!4%( @! %(4%( %+4-( %!4-( %74%( A !4%( +4 -4( ,4 5 5 在最佳工艺条件下，脱蛋白 ( 次，蛋白质的去除 率分别为 %*4!<、!4<、+,4<、(+4<、(>4<，可以 看出在进行脱蛋白实验三次后，蛋白质去除率变化 不明显，所以选取脱蛋白次数为 + 次。 * 结论 ./012/法是一种常用的脱蛋白方法，实验将这 种方法运用于蕨麻粗多糖多蛋白的研究，正交实验 结果表明最佳的脱蛋白工艺为：料液比 *)*、氯仿)正 5 5 5 5 （下转第 %(> 页） !#$
表 ! 方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 #值 $值 备注 模型 %& %’ %! %&%’ %&%! %’%! %’& %’’ %’! 残差 失拟误差 纯误差 总和 &’()*& ’+),, -)*+ ./)// &)’+ &)(! ()-+ ()(-/ &&)+. -)’’ ’).’ ’)+! ()&- &’!)!! , & & & & & & & & & / ! ’ &+ &!)+& ’+),, -)*+ ./)// &)’+ &)(! ()-+ ()(-/ &&)+. -)’’’ ()/’ ()-& ()(,’ ’/).& +*)*’ &.).- &’/)&* ()*& ()/& ’)/! ()&. ’&)-, &/)*( -)-( ()((&’ ()((&( ()((,/ 0 ()(((& ()&-+( ()’&,* ()’.&- ()’(!( ()((/+ ()(&(* ()&(!- !! !! !! !! !! ! 注：!!$ 0 ()(&；!$0 ()(/。 从表 ! 中可以看出，模型是高度显著的（$ 0
()(&），失拟误差不显著（$1 ()(/），回归方程的相关 系数 2’ 为 (),*--，校正后的 2’ 为 (),+(.，这说明实 验误差小，变量与自变量之间的模型关系显著，回归 方程与实际情况拟合良好，所以该实验设计是可靠 的。数据分析结果表明，34、温度和液料比对水飞蓟 粕蛋白提取率具有极显著的影响，但各因素之间的 交互作用不显著。 ’)’)! 最优提取工艺参数的确定及验证 综合考虑 各种因素的相互作用，根据实验结果和二次多项回 归方程，利用 56789: ;<36=> *)( 软件分析得到了水飞 蓟粕蛋白提取率最高时的工艺条件为：34&&，液料比 &.)&-?&，温度 +,).@，在此条件下蛋白的提取率为 //)(.A。考虑到实际生产情况，将最佳条件修正为 34&&，液料比 &.?&，温度 /(@，在此条件下进行三次 实验，平均值为 /+)/’A。与理论值接近，说明采用 2BC法优化得到的提取工艺参数准确可靠，具有实 用价值。 !#$ %&对水飞蓟粕蛋白沉淀率的影响
由图 / 可知，水飞蓟粕蛋白的沉淀率随 34的增
加呈先增加后降低的趋势，在 34为 /)/ 左右时的沉淀

图 / 34对水飞蓟粕蛋白沉淀率的影响
率最高，因此我们选用蛋白质酸沉淀时的 34为 /)/。
!’$水飞蓟粕及提取蛋白的主要组分分析 对脱脂后的水飞蓟粕和所提取的蛋白进行成分 测定，结果如表 + 所示。由表可见，水飞蓟粕中蛋白 质含量较高，具有较高的利用价值。蛋白提取液经 冷冻干燥得到的蛋白粉，其蛋白含量为 -+)/!A。提 取的蛋白达到了分离蛋白的含量水平，可以作为优 质蛋白利用。 表 + 水飞蓟粕及提取蛋白的各组分含量（A） 成分 蛋白 水分 粗脂肪 总糖 灰分 水飞蓟粕 提取蛋白 +*)’! -+)/! /)’( +).! ’)+. ()-- &!)+’ !)-( ,)+, ’)’- #$ 结论
本研究结合所筛选的关键因素利用响应面实验
设计，拟合了 34、液料比、温度与水飞蓟蛋白提取率
之间的相互关系，并通过响应面分析，得到了提取水
飞蓟粕蛋白的最佳工艺条件：34&&，液料比 &. ?&，温
度 /(@，在该条件下蛋白提取率达到 /+)/’A，所提
取的蛋白含量为 -+)/!A。
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#MMR ;:98:66=8:9，’((*，-’：

/.-T/*.)
（上接第 ’// 页）
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数为 + 次，脱除率为 /+)(A。
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