全 文 :China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 23 中国药房 2012年第23卷第23期
乌头属植物松潘乌头(Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.)
分布在甘肃、四川、青海等广大地区,民间常用于治疗跌打损
伤、风湿性和类风湿性关节炎等疾病。其化学成分主要为多
种生物碱,以二萜类生物碱为主[1]。药理实验结果证明,松潘
乌头总碱(TAS)有镇痛、抗炎、解热的作用[2,3]。笔者将主要研
究TAS的抗炎机制,为其开发、利用提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
751型分光光度计、UV/VIS-731型紫外分光光度计(上海
分析仪器厂)。
1.2 试药
TAS(兰州大学药学院药物分析教研室提供,含量:
1.14%);消炎痛(兰州制药厂,批号:20101106);角叉菜胶
(Car,辽宁药物研究所);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶
(SOD)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 动物
普通级昆明种小鼠,♀♂兼用,体重(22.0±2.0)g(动物生
产合格证号:医动字第14-005);普通级Wistar大鼠,♀♂兼用,
体重(185.0±25.0)g(动物生产合格证号:医动字第 14-006),
均由兰州大学实验动物中心提供。
2 方法
2.1 明胶致炎小鼠多形核白细胞游走实验[4]
♂小鼠 40只随机均分为 4组,即对照(等容量生理盐水,
ig)、消炎痛(2.0 mg·kg-1,sc)和TAS高、低剂量(3.0、1.5 mg·
kg-1,ig)组,每天给药 1次,连续 3 d。于末次给药 1 h后 ip 1%
明胶0.8 mL,3 h后处死小鼠,取腹液1滴涂片,瑞氏染色,油镜
下计100个多形核白细胞、淋巴细胞、组织细胞,从中计算出多
形核白细胞的百分比。
2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性测试[5]
♀小鼠40只均分为4组,即对照(等容量生理盐水,ig)、消
炎痛(20 mg·kg-1,sc)和TAS高、低剂量(3.0、1.5 mg·kg-1,ig)
组。给药前禁食不禁水 12 h。给药 30 min后,每鼠尾 iv 0.5%
伊文斯蓝溶液 5 mL·kg-1,5 min后 ip 0.7%乙酸溶液 10 mL·
kg-1,30 min后处死小鼠,用蒸馏水反复冲洗腹腔内伊文思蓝
溶液,将冲洗液稀释至 5 mL,加 0.1 mol·L-1NaH 0.1 mL,于
590 nm波长处测吸光度(A)值。
2.3 大鼠足跖炎症组织PGE含量测定[6]
♂大鼠40只均分为4组,即对照(等容量生理盐水,ig)、消
炎痛(1.5 mg·kg-1,sc)和TAS高、低剂量(2.0、1.0 mg·kg-1,ig)
组。给药30 min后,每鼠左后足跖 sc 1% Car 0.1 mL致炎,4 h
*主管药师。研究方向:医院药学。电话:0931-8942624。
E-mail:ldeylimin@126.com
松潘乌头总碱的抗炎机制研究
李 敏*,李晓强,焦海胜,王建治(兰州大学第二医院,兰州 730030)
中图分类号 R285.5;R96 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2012)23-2130-02
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.23.07
摘 要 目的:研究松潘乌头总碱(TAS)的抗炎机制。方法:采用不同致炎剂复制大鼠、小鼠炎症模型,检测其毛细血管通透性、
多形核白细胞百分比和炎症组织前列腺素 E(PGE)、丙二醛(MDA)含量及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:3.0、1.5
mg·kg-1TAS对乙酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加与明胶诱发的多形核白细胞游走均有明显抑制作用;2.0、1.0 mg·kg-1TAS
可使角叉菜胶致炎大鼠炎症组织中PGE、气囊灌洗液中MDA含量降低,同时提高血清SOD活性。结论:TAS的抗炎机制与其降
低毛细血管通透性、抑制多形核白细胞游走与抑制炎症介质PGE的释放和清除自由基、抑制脂质过氧化有关。
关键词 松潘乌头总碱;抗炎机制;前列腺素E;丙二醛;超氧化物歧化酶
Study on the Anti-inflammatory Mechanism of Total Alkaloids of Aconitum sungpanense
LI Min,LI Xiao-qiang,JIAO Hai-sheng,WANG Jian-zhi(The Second Hospital of Lanzhou University,Lan-
zhou 730030,China)
ABSTRACT OBJICTIVE:To study anti-inflammatory mechanism of total alkaloids of Aconitum sungpanense(TAS). METH-
ODS:The inflammatory models were induced by different inflammatory agents in mice and rats. The vascular permeability,leuco-
cyte migratory response and the content of PGE and MDA in inflammatory tissue,and the activity of SOD in serum were mea-
sured. RESULTS:TAS(3.0,1.5 mg·kg-1)inhibited the increase of vascular permeability induced by HAC and the leucocyte mi-
gratory response caused by gelatin in mice. TAS(2.0、1.0 mg·kg-1)also decreased the contents of PGE and MDA in inflammatory
tissue induced by carrageenin,and increased the activity of SOD in serum in rats. CONCLUSION:The anti-inflammatory mecha-
nism of TAS are related to the reduction of vascular permeability,leucocyte migratory response and PGE release,the clearing of
free radicals and inhibition of lipid peroxidation.
KEY WORDS Total alkaloids of Aconitum sungpanense;Anti-inflanmatory mechanism;PGE;MDA;SOD
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中国药房 2012年第23卷第23期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 23
后处死大鼠,将致炎足自踝关节上 1 cm处剪下,称重,浸泡于
5 mL生理盐水中 45 min后,于 50℃水浴异构化 20 min,加甲
醇溶液 5 mL,于 278 nm波长处测定 A值,计算前列腺素 E
(PGE)含量。
2.4 Car致炎大鼠气囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性
测定
分组与给药同“2.3”项下方法。于Car致炎前给药,每天1
次,连续4 d;致炎后6 h再给药1次。第4天给药1 h后,于大鼠
背部气囊内注射Car 25 mg·kg-1诱发炎症,致炎后12 h处死大
鼠,取血、离心、制备血清,待测 SOD活性;气囊内注射 4 mL
Hank’s液进行灌洗,收集灌洗液于试管内,于 4℃离心,取上
清液,待测MDA含量。SOD活性和MDA含量测定按试剂盒
说明书进行。
2.5 统计学方法
实验数据均用x±s表示,采用 t检验进行统计分析。P<
0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 TAS对明胶致炎小鼠多形核白细胞游走的影响
对照、消炎痛和TAS高、低剂量组小鼠腹腔液中多形核白
细胞百分比分别为(42.50± 15.34)%、(21.87± 16.92)%、
(20.58±17.34)%、(23.16±12.09)%。与对照组比较,TAS
高、低剂量组有显著性差异(P<0.01),表明TAS能明显抑制明
胶诱发的多形核白细胞的游走,使其百分比降低。
3.2 TAS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
对照、消炎痛和 TAS 高、低剂量组 A值分别为(0.250±
0.045)、(0.139±0.033)、(0.125±0.026)、(0.138±0.031)。与
对照组比较,TAS高、低剂量组有显著性差异(P<0.01),表明
TAS能使伊文思蓝渗出量明显减少,即降低了乙酸所致毛细血
管通透性增加。
3.3 TAS对Car诱发的大鼠足跖炎症组织PGE含量的影响
对照、消炎痛和TAS高、低剂量组大鼠足跖炎症组织PGE
的含量分别为(232.71±39.62)、(103.68±27.25)、(109.42±
28.15)、(118.24±31.52)mg·g-1。与对照组比较,TAS高、低剂
量组有显著性差异(P<0.01),表明TAS能使大鼠炎症组织中
PGE的含量明显减少。
3.4 TAS 对 Car 致炎大鼠气囊灌洗液中 MDA 含量和血清
SOD活性的影响
与对照组比较,TAS高、低剂量组MDA含量显著减少,
SOD活性显著增强(P<0.01或P<0.05)。TAS对模型大鼠气
囊灌洗液中MDA含量与血清SOD活性的影响见表1。
4 讨论
先前的药理实验结果表明,TAS对二甲苯致小鼠耳肿,蛋
清、Car、甲醛性大鼠足肿与大鼠琼脂性肉芽增生均有明显抑制
作用,说明TAS具有显著的抗急、慢性炎症作用[3]。从本研究
结果观察到,TAS能降低乙酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增
加;使明胶诱发的小鼠腹腔炎性渗出液中多形核白细胞百分
比降低;使大鼠足跖炎症组织 PGE的含量明显减少。提示
TAS的抗炎作用机制可能与其降低毛细血管通透性、减少渗
出,抑制白细胞游走,降低其向炎症部位的聚集(趋化),以及
抑制炎症介质PGE的释放有关。
氧自由基在疾病中所起的作用日益被人们所重视。据报
道,类风湿性关节炎患者病灶中氧自由基明显增多,可能是其
病理机制之一;大鼠佐剂性关节炎局部炎症与脂质过氧化程
度密切相关[7]。本研究结果表明,Car致炎大鼠气囊灌洗液中
MDA水平明显增高、血清SOD活力明显降低,与上述报道相
一致。而TAS使大鼠炎性灌洗液中MDA含量降低、血清SOD
活性升高,提示抑制脂质过氧化反应、减少氧自由基的生成,
可能是TAS抗炎作用的又一重要机制。
参考文献
[ 1 ] 李洪刚,李广义.松潘乌头二萜生物碱的研究[J].药学学
报,1988,3(23):460.
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体依赖性的实验研究[J].中国药物依赖性通报,1993,3
(2):242.
[ 3 ] 杨军英,党月兰.松潘乌头总碱的抗炎解热作用[J].中国
临床药理学与治疗学,2003,8(4):441.
[ 4 ] 党月兰,骆 勤,李淑玉.红毛五加总甙的抗炎作用[J].中
药药理与临床,2000,16(1):14.
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实验研究[J].中药药理与临床,2005,21(3):49.
[ 6 ] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].第 1版.上海:上海科
学技术出版社,1991:307.
[ 7 ] 丁长海,陈敏珠,魏 伟,等.抗氧自由基药物研究进展
[J].中国药理学通报,1992,8(5):332.
(收稿日期:2011-10-13 修回日期:2012-04-16)
表 1 TAS对模型大鼠气囊灌洗液中MDA含量与血清 SOD
活性的影响(x±s,n=10)
Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in
air sac irrigating solution of model rats(x±s,n=10)
组别
对照组
消炎痛组
TAS高剂量组
TAS低剂量组
剂量/mg·kg-1
-
1.5
2.0
1.0
MDA/nmol·mL-1
11.28±1.13
7.81±0.97**
7.52±0.88**
8.11±0.97**
SOD/U·mL-1
98.26±27.02
128.06±21.92**
130.32±26.21**
123.82±24.15*
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
vs.control group:*P<0.05,**P<0.01
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