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藏药蕨麻对实验性酒精肝损伤小鼠的保护作用研究



全 文 :◇ 基础研究 ◇
中国临床药理学与治疗学
中国药理学会主办
CN 34-1206/R,ISSN 1009-2501
http://www.cjcpt.com
2014Oct;19(10):1107-1110
2013-11-06收稿 2014-06-27修回
甘肃省教育厅高校科研项目(2013A-078)
罗慧英,女,博士,副教授,硕士生导师,研究方向:保肝与抗肿瘤
药物研究。
Tel:0931-8765395 E-mail:louria@126.com
藏药蕨麻对实验性酒精肝损伤小鼠的保护作用研究
罗慧英,黄亚红,朱丽娟,王丽娟
甘肃中医学院药理教研室,兰州730000,甘肃
摘要 目的:探讨藏药蕨麻对实验性酒精肝损伤
小鼠的保护作用。方法:50只小鼠随机分为5
组:空白组,模型组,小、中、大剂量蕨麻组,50%
酒精灌胃复制实验性酒精肝损伤模型,蕨麻每日
2次 (50、100、200g/kg),酒精每日1次(10mL/
kg),连续4周。小鼠最后1次给药4h后,称重,
眶静脉丛取血,离心取血清,全自动生化仪检测肝
功指标[AST、ALT、碱性磷酸酶(ALP)];摘取肝
脏称重,计算肝脏指数;剪取适量肝脏制成匀浆,
检测肝脏组织中TG、TC、丙二醛(MDA)、脂质过
氧化物(LPO)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶
(CAT)活性;剩余肝脏10%甲醛固定后进行病理
学检测。结果:小鼠酒精肝损伤后肝脏指数、
AST、ALT、ALP明显升高(P<0.05);肝脏组织
中TG、TC、MDA、LPO含量明显高于空白组(P
<0.05);SOD、GSH-Px、CAT活性明显降低(P
<0.05);病理学检测发现肝脏组织出现炎性浸润
和脂肪空泡。蕨麻可明显改善这些现象,表现为
降低肝脏指数和肝功指标(P<0.05),减少肝脏
组织中TG、TC、MDA、LPO含量(P<0.05),增
强SOD、GSH-Px和CAT活性(P<0.05),减少
肝脏组织炎性浸润和脂肪空泡的产生。其中大剂
量蕨麻的作用更加明显。结论:蕨麻可能通过减
少自由基的产生,增强对自由基及其代谢产物的
清除能力,从而抑制脂质过氧化,起到对酒精性
肝损伤的保护作用。
关键词 蕨麻;酒精性肝损伤;肝功能;脂质过氧
化;自由基
中图分类号:R965.2
文献标志码:A
文 章 编 号:1009-2501(2014)10-1107-04
酒精性肝损伤是指长期大量饮酒或含有乙醇
的饮料造成的肝脏疾患,包括轻症酒精性肝病、酒
精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、酒精
性肝硬化。近年来,随着人们生活水平的提高,酗
酒有增多趋势,全球酒精消费量快速上升,伴随而
来的是各种与酒精相关的疾病的增加,酒精性肝
损伤是其中一个重要的问题。蕨麻是蔷薇科鹅绒
委陵菜Potentilla anserine L.膨大的块根,又名
人参果,藏语称“戳玛”,是藏医常用草药。《晶珠
本草》记载此物“味甘,性凉。秋天,性变温,故秋
蕨麻质佳,春蕨麻性凉”[1],具有健脾益胃、益气补
血、生津止渴、收敛止血、止咳利痰的功效,主治病
后贫血、脾虚泄泻、吐血、崩中、风湿痹痛、营养不
良等症。现代药理学研究表明,蕨麻具有保肝、抗
氧化、抗缺氧、抗疲劳、抗寒等药理作用[2]。本文
旨在探讨蕨麻对实验性酒精肝损伤小鼠的保护作
用,为这一藏药的进一步开发利用提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂 藏药蕨麻500g购于兰州惠
仁堂药业股份有限公司,水煎两次,合并滤液,浓
缩至250mL(相当于2g生药/mL),临用前用
蒸馏水稀释为所需浓度。NS、50%酒精,由甘肃
中医学院实验中心提供;相关检测试剂盒均购自
南京建成生物工程研究所,批号分别为:丙二醛
(MDA,20130812)、脂 质 过 氧 化 物 (LPO,
20131523)、超氧化物歧化酶(SOD,20130322)、谷
胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,20130212)、过氧化
氢酶(CAT,20130325)。
1.2 动物与主要仪器 昆明种小鼠50只,雌雄
·7011·
各半,体质量18~22g,由兰州大学医学院动物
中心提供,动物合格证:41-512。主要仪器有
SFY3-400全自动生化检测仪(天津市金贝尔科技
有限公司)、721可见光分光光度计(上海廷正仪
器科技有限公司)等。
1.3 动物分组及给药 小鼠随机分为5组,即:
空白组(等量NS+等量NS)、模型组(等量NS+
50%酒精10mL/kg)、小剂量组(蕨麻50g/kg+
50%酒精10mL/kg)、中剂量组(蕨麻100g/kg
+50% 酒 精 10 mL/kg),大 剂 量 组 (蕨 麻
200g/kg+50%酒精10mL/kg),灌胃给药,蕨
麻每日2次,酒精每日1次,连续4周。
1.4 组织样采集 小鼠于最后1次给药4h后,
眶静脉丛取血,离心分离血清,全自动生化仪检测
肝功指标;摘取肝脏,称重,计算肝脏指数;剪取适
量肝脏置于生理盐水中,制成匀浆,800r/min离
心5min,取上清,比色法检测 MDA、LPO含量,
以及SOD、GSH-Px、CAT活性;剩余肝脏10%甲
醛固定后进行病理学检测。
1.5 统计学处理 实验数据用SPSS 10.0软件
处理。以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采
用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏指数及肝
功指标的影响 小鼠经酒精损伤后肝脏指数、
ALT、AST、碱性磷酸酶(ALP)明显升高(P<
0.05),提示肝细胞受损,蕨麻给药组相关指标明
显下降,其中大剂量组作用更加明显,见表1。
表1 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏指数及肝功指标的影响(x±s,n=10)
组别 剂量(g/kg) 肝脏指数(%) ALT(U/L) AST(U/L) ALP(U/L)
空白组 - 3.2±1.1  32.0±2.2  39.1±5.0  221.3±18.0
模型组 - 4.9±0.7b  131.5±19.1b  203.5±34.6b  639.9±20.8b
蕨麻小剂量组 50  4.7±1.4  130.0±25.3  187.3±18.5e  556.2±41.2e
蕨麻中剂量组 100  4.0±0.8eh  110.2±13.8eh  165.2±10.9eh  517.0±71.2eh
蕨麻大剂量组 200  3.9±0.4eh  103.8±5.4ehk  136.0±19.6ehk  387.1±83.4ehk
与空白组比较b P<0.05;与模型组比较e P<0.05;与蕨麻小剂量组比较h P<0.05;与蕨麻中剂量组比较k P<0.05。
2.2 蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中TG、TC
含量的影响 小鼠经酒精损伤后肝脏TG和TC
含量明显升高(P<0.05),蕨麻给药组的TG、TC
含量明显低于模型组(P<0.05),其中大剂量组
的作用更加明显(P<0.05)。见表2。
表2 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中TG、TC的
影响(x±s,n=10)
组别
剂量
(g/kg)
TG
(μmol/g)
TC
(μmol/g)
空白组    - 13.20±0.16  1.83±1.44
模型组    - 27.66±1.04b  3.05±2.00b
蕨麻小剂量组 50  27.39±0.01  3.07±0.15
蕨麻中剂量组 100  25.21±2.45e  2.97±2.14eh
蕨麻大剂量组 200  21.31±1.10ehk 2.99±0.18eh
与空白组比较b P<0.05;与模型组比较e P<0.05;与蕨麻小剂
量组比较h P<0.05;与蕨麻中剂量组比较k P<0.05。
2.3 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中
MDA、LPO含量以及SOD、GSH-Px、CAT活性的
影响 从表3、4可以看出小鼠经酒精损伤后
MDA、LPO 含量明显增加(P<0.05);SOD、
GSH-Px、CAT活性明显降低(P<0.05);所有给
药组SOD、GSH-Px、CAT活性都有所增强(P<
0.05)。
表3 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中 MDA、
LPO含量的影响(x±s,n=10)
组别
剂量
(g/kg)
MDA
(μmol/g)
LPO
(μmol/g)
空白组    - 1.73±1.01  0.64±1.26
模型组    - 2.96±1.10b  1.53±0.03b
蕨麻小剂量组 50  2.87±2.00  1.44±1.17b
蕨麻中剂量组 100  2.51±0.41eh  1.47±2.14e
蕨麻大剂量组 200  2.51±0.41ehk  1.47±2.14 ehk
与空白组比较b P<0.05;与模型组比较e P<0.05;与蕨麻小剂
量组比较h P<0.05;与蕨麻中剂量组比较k P<0.05。
2.4 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏病理变化
影响 由图1可以看出,正常的小鼠肝脏组织肝
细胞边界清晰,细胞形态完整、整齐(A)。经酒精
损伤后肝细胞形态不再完整、大小不均一,细胞脂
肪变性清晰可见,并伴有炎性浸润(B)。在蕨麻
小剂量及中剂量组中,细胞形态依然不齐,胞内偶
尔可见脂肪变性,但炎性浸润依然明显(C、D)。
·8011· Chin J Clin Pharmacol Ther 2014Oct;19(10)
所有这些病理改变在大剂量组中基本都得到改
善,表现为炎性浸润减轻,细胞边界较为清晰,形
态较完整(E)。
表4 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px、CAT活性的影响(x±s,n=10)
组别 剂量(g/kg) SOD(mkat/g) CAT(mkat/g) GSH-Px(umol/g)
空白组    - 3.27±0.14  5.29±0.40  10.49±1.55
模型组    - 1.23±0.21b  2.28±1.26b  4.47±1.70b
蕨麻小剂量组 50  1.27±0.11  2.24±0.39  5.14±1.26e
蕨麻中剂量组 100  1.75±2.11eh  2.48±0.21eh  6.34±0.37eh
蕨麻大剂量组 200  1.83±1.35eh  2.84±2.41 ehk  7.85±2.61ehk
与空白组比较b P<0.05;与模型组比较e P<0.05;与蕨麻小剂量组比较h P<0.05;与蕨麻中剂量组比较k P<0.05。
图1 藏药蕨麻对酒精肝损伤小鼠肝脏病理变化影响(HE染色,×200)
A:空白组;B:模型组;C:蕨麻小剂量组;D:蕨麻中剂量组;E:蕨麻大剂量组。
3 讨论
《诸病源候论》曰:“酒性有毒,而复大热,饮之
过多,故毒热气渗溢经络,浸溢腑脏,而生诸病
也。”指出酒为有毒之品,性热而质湿。长期大量
饮酒是酒精性肝损伤的发病基础,酒精及其代谢
产物直接或通过免疫机制损害肝细胞,发生酒精
性肝病。中医将其归属于“胁痛”、“症瘕”、“湿
阻”、“痞满”、“肝着”、“肝癖”等范畴[3]。
ALT、AST、ALP主要存在于肝细胞胞浆内,
当肝脏实质性损害时,细胞内转氨酶进入血中,使
血清活性增加 [4-6],因此转氨酶是肝细胞损害的
敏感标志。在本实验中,小鼠经酒精损伤后肝脏
指数增加、肝功能指标(ALT、AST、ALP)升高,
同时出现不同程度的病理改变,蕨麻可以降低肝
脏指数和肝功指标,对酒精引起的肝脏病理损伤
有较好的缓解作用,提示了藏药蕨麻对实验性酒
精肝损伤的保护作用。
正常情况下,酒精进入体内后经胃、小肠吸
收,通过血液进入肝脏,在肝脏内通过乙醇脱氢酶
(ADH)将乙醇氧化成乙醛,乙醛经乙醛脱氢酶
(ALDH)代谢为乙酸而经尿道排出体外。大量一
次性饮酒或长期慢性摄入酒精性饮品,因严重超
过了肝脏解毒能力,导致血液和肝脏内大量酒精
及乙醛蓄积。肝脏中过量乙醛及酒精氧化代谢产
物诱导肝细胞微粒体酶细胞色素 P450系统活
性,细胞色素P450 2E1酶(CYP2E1)活性升高,
产生大量活性氧簇(ROS)及RNS。这些ROS和
RNS等过氧化物,直接攻击细胞器、DNA导致肝
细胞损伤及肝功能紊乱[7]。此外乙醇氧化产生的
乙醛具有毒性作用,可以抑制烷基化核蛋白的修
复,降低关键酶活性和线粒体的氧利用,同时在氧
化过程中可产生大量以氧中心自由基为主的自由
基。过量的自由基对肝脏组织中的大分子物质具
有损害作用,包括对生物膜、蛋白质和核酸的损
害。乙醛也可减少还原型谷胱甘肽(GSH)的浓
度,引起脂质过氧化反应(lipid peroxidation,是指
主要由自由基引起的多不饱和脂肪酸的氧化作用
对生物膜产生的破坏作用),从而增加自由基的毒
性作用,促进细胞凋亡[7-8]。机体自身对氧化损伤
具有防御系统,包括非酶性和酶性两种抗氧化系
统。酶性抗氧化系统是清除自由基的主要机制,
主要包括SOD、CAT、GSH-Px和谷胱甘肽还原
酶(CR)等。近年研究发现乙醛可以动员皮下脂
肪酸向肝内转移,造成肝内TG含量的升高,逐渐
形成脂肪肝;LPO可以反映机体脂质过氧化的速
度和强度。MDA是脂质过氧化的代谢产物,因
而测定 MDA、TG、TC的含量常常能够反映机体
脂质过氧化的程度[9-12]。在本实验中,模型组、大
剂量组、小剂量组的小鼠经酒精损伤后肝脏组织
·9011·中国临床药理学与治疗学2014Oct;19(10)
中 MDA、LPO、TG、TC含量的增加说明了自由
基对肝损伤的不同程度,模型组尤为严重;藏药蕨
麻可以降低小鼠肝脏组织中 TG、TC、MDA 和
LPO含量;增强SOD、GSH-Px、CAT的活性,有
效减少自由基的产生,减轻脂质过氧化损伤,从而
实现对酒精损伤肝脏组织的保护作用。
参 考 文 献
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Protective effect of Potentilla anserina on ethanol-induced liver dam-
age in mice
LUO Hui-ying,HUANG Ya-hong,ZHU Li-juan,WANG Li-juan
Department of Pharmacology,Gansu College of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,
Gansu,China
ABSTRACT AIM:To study the protection of
Potentilla anserina on ethanol-induced liver
damage in mice.METHODS:50mice were di-
vided into 5groups in random,and administered
by gavage for 4weeks.Potentillaanserinawas
given twice a day,ethanol once a day.When
time limit arrived,mice were weighted,serum
was afforded to detect liver function index,liver
homogenate were prepared for biochemical de-
tections,liver remained were fixed for pathologi-
cal investigation.RESULTS:When mice damaged
by ethanol,liver index,liver function index,
contents of TG,TC,MDA and LPO increased
distinctly(P<0.05),activities of SOD,GSH-
Px and CAT decreased at the same time(P<
0.05).Inflammatory infiltration and flat vacu-
oles were observed.Potentilla anserina amelio-
rated these changes evidently;the effects were
dose-dependent. CONCLUSION: Protective
effects of Potentilla anserina on ethanol-induced
liver damage in mice were associated with an-
tioxidation,enhancement of clearance of free
radicals and metabolites,and inhibition of lipid
overoxidation reactions.
KEY WORDS Potentilla anserina;ethanol-in-
duced liver damage;liver function;lipid overox-
idation reactions;free radical
本文编辑:余文涛
·0111· Chin J Clin Pharmacol Ther 2014Oct;19(10)