全 文 ：胞 ［14］等多种免疫细胞及相关细胞产生，与机体免疫密切相关，
它能刺激 T淋巴细胞活化增殖［15］，当大量活化的 T淋巴细胞随
血液进入肝脏与肝细胞接触时，肝细胞就会受到损害，所以当
IL-6 水平升高时，肝脏病理损害程度加重。
本实验设定波棱瓜子多糖三个给药剂量为 0． 71、0． 99、1．
44g /kg( 相当于生药 20、28、40． 8g /kg) 。实验结果表明波棱瓜
子多糖( 0． 71、0． 99、1． 44g /kg) 具有明显的保肝降酶、减少炎症
因子释放、调节免疫以及清除自由基的作用，且呈现一定剂量
依赖趋势，其保肝机制可能与此相关。
参考文献
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Protective effects of Herpetospermum polysaccharide on
immunological liver injury induced by concanavalin A in mice
Li Chunqin，Wang Ziyan，Tang Huijun，Wang Chuandong，Zhang Mei＊＊
( School of Pharmacy，Chengdu University of TCM，Key Laboratory of Standardization
of Chinese Herbal Medicines of Ministry of Education，Chengdu 611137)
Objective: To investigate the protective effects of Herpetospermum polysaccharide on immunologic liver Injury induced by concanavalin
A( ConA) in mice．Methods: After gavaging 8 days continuously，the mouse were injected ConA through tail vein to establish the model of
immunological liver injury． Liver index and spleen index，contents of serum alanine aminotransferase ( ALT ) ，aspartate aminotransferase
( AST) ，latic dehydrogenase( LDH) ，nitrogen monoxidum( NO) and interleukin-6( IL-6) in serum，superoxide dismutase( SOD) ，malondialde-
hyde( MDA) in liver homogenate and pathological morphological changes in liver cells were monitored． Ｒesults: Herpetospermum polysaccha-
ride ( 0． 71，0． 99，1． 44g /kg) could decrease liver index，spleen index，the contents of ALT，AST，LDH，NO，IL-6，MDA and prevented the
reduction of SOD activities． Meanwhile，pathological damage in liver was relieved． Conclusion : The dose group( 1． 44g /kg) of Herpetosper-
mum polysaccharide showed the best effect on immunological liver injury in mice，the mechanism possibly due to its function of anti-inflam-
matory，anti-oxidation，scavenging oxygen free radical and regulating immunity．
Key words Herpetospermum polysaccharide( 波棱瓜子多糖) ; immunologic liver injury
狗肝菜多糖对大鼠酒精性肝损伤的影响*
韦日明，高 雅，钟明利，张可锋＊＊
(桂林医学院，桂林 541004)
摘 要 目的:基于氧化应激和抗炎机制，研究狗肝菜多糖对酒精诱发的大鼠肝损伤的保护作用。方法:将实验用 72 只大鼠
按体重随机分为 6 组，即正常组、模型组、联苯双脂组( 50 mg /kg) 及狗肝菜多糖( 100 mg /kg，200 mg /kg，300 mg /kg) 剂量组 。除正
79中药药理与临床 2015; 31( 4)
* 基金项目:国家自然科学基金 ( 81360685 ) ，广西科技攻关项目 ( 桂科攻 14124004 － 2 － 13 ) ，广西自然科学基金 ( 2013GXNFBA019179、
2014GXNSFBA118149) ＊＊通讯作者
常组外，其余组大鼠每天均灌胃给与 53%白酒 10 ml /kg 复制酒精性肝损伤模型，连续造模 30 天，造模的同时按相应剂量每日给药 1
次。苏木素-伊红( HE) 染色法观察肝脏组织病理学变化; 比色法检测血清谷丙转氨酶( ALT) 、谷草转氨酶( AST) 以及丙二醛
( MDA) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 和超氧化物歧化酶( SOD) 活性的影响; ELISA 法检测肝组织肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 和白
介素-6( IL-6) 含量。结果:与模型组比较，狗肝菜多糖( 100 mg /kg、200 mg /kg、300 mg /kg) 能显著降低大鼠血清中 ALT、AST 以及
MDA活性，升高 GSH-Px和 SOD活性，同时降低肝组织中 TNF-α、IL-6 含量;并减轻肝损伤病理病变。结论:狗肝菜多糖能够减轻酒
精所致的大鼠肝损伤，其机制可能与降低氧化应激和抗炎作用有关。
关键词 狗肝菜多糖( DCP) ;酒精性肝损伤;氧化应激;抗炎
狗肝菜 Dicliptera chinensis ( L． ) Nees． 是爵床科华九头狮
子草属狗肝菜的全草。实验前期发现狗肝菜多糖对化学性肝
损伤具有良好的保护作用，实验结果显示狗肝菜多糖成分能够
降低肝损伤大鼠血清中的转氨酶升高［1 ～ 3］，本研究基于前期实
验的药效基础和中药成分作用的多靶点的理论，以酒精性肝损
伤为模型，拟从氧化应激和抗炎两方面探讨其对酒精性肝损伤
的保肝作用和机制，为其今后的药理研究和开发应用奠定理论
基础。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 狗肝菜经广西中医药大学韦松基教授鉴定为
爵床科狗肝菜 Dicliptera chinensis ( L． ) Nees．的全草。称取干
燥的狗肝菜全草粗粉 2000 g，加入 20000 ml石油醚回流脱脂提
取 2 h。药渣挥尽石油醚后，沸水提取 2 次，每次 1． 5 h，合并提
取液，浓缩至 200 ml，用氯仿-正丁醇 ( 4: 1) 多次萃取( 即 Sevag
法) ，得到除去蛋白质的上清液，加 95% 乙醇使醇含量达到
80%，于 4℃冰箱中醇沉 12 h。抽滤，弃去上清液，滤渣依次用
乙醚、无水乙醇、丙酮洗涤，即得狗肝菜粗多糖。将狗肝菜粗多
糖溶于水，加样到经 pH = 8 的磷酸盐缓冲液前处理的 DE52 型
树脂层析柱中，静止 12h，用蒸馏水，流速以 2 ml /min洗脱，合并
洗脱液，真空干燥得粉末状狗肝菜多糖，多糖得率 3． 26%。采
用 DE52 型树脂层析柱，上样量 0． 5 g，上样体积 50 ml，先以蒸
馏水进行洗脱，然后用 0． 05，0． 1，0． 2，0． 3，0． 4 mol /ml NaCl 溶
液进行梯度洗脱。洗脱液以苯酚-硫酸试剂显色后，在 λ485nm
处测其吸光度，测吸光度。依吸光度对洗脱液体积作图，得到狗
肝菜多糖洗脱曲线图主要为一个单峰，见图 1; 按峰面积计算，
其纯度≥91． 37%。
图 1 狗肝菜多糖洗脱曲线图
1． 2 动物 SPF级 SD大鼠 72 只，体重 180 ～ 220g，雌雄各半，
由桂林医学院 SPF 实验动物中心提供，许可证号: SCXK2007-
0001。
1． 3 试剂 ALT、AST、MDA、GSH-Px、SOD试剂盒购于南京建
成生物工程研究所; TNF-α和 IL-6 购于北京北方生物技术研究
所，批号分别为: 20130826，20130616，灵敏度可测 4pg /ml; 联苯
双酯滴丸，广州星群( 药业) 股份有限公司; 53%白酒，桂林三花
酒厂。
1． 4 仪器 Epoch酶标仪，美国 Bio-tek; Image-Pro Express 6． 0
病理图 CX I像分析系统，美国 Media Cybernetics公司。
1． 5 方法 72 只大鼠按体重随机分为 6 组，即正常组、模型
组、联苯双脂组( 50 mg /kg) 及狗肝菜多糖 ( 100 mg /kg、200 mg /
kg、300 mg /kg) 剂量组，除正常组外，其余组大鼠每天均灌胃给
与 53%白酒 10 ml /kg复制酒精性肝损伤模型，连续造模 30 天，
造模的同时按相应剂量每日给药 1 次。最后一次造模 16 h 后
摘眼球取血和收取肝脏，比色法检测血清谷丙转氨酶( ALT) 、
谷草转氨酶( AST) 以及丙二醛( MDA) 、谷胱甘肽过氧化物酶
( GSH-Px) 和超氧化物歧化酶 ( SOD) 活性的影响; ELISA 法检
测肝组织肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 和白介素-6 ( IL-6 ) 含量，按
照试剂盒说明书，其步骤主要包括 标准品的稀释与加样、样品
的加样、温育、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止和测定; 苏木
素-伊红( HE) 染色法观察肝脏组织病理学变化。
2 结果
2． 1 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠 ALT和 AST水平的影响 由表
1 结果可见，肝炎模型组与正常对照组相比较，ALT和 AST活性
明显升高。与模型组比较，大鼠口服狗肝菜多糖用药组能明显
的抑制 ALT和 AST活性，且成量效关系。
表 1 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠血清中 ALT和 AST的影响( 珋x ± s，n = 12)
组别 剂量( mg /kg) ALT( U /L) AST( U /L)
正常对照 39． 8 ± 5． 8＊＊ 30． 4 ± 3． 6＊＊
模型对照 227． 1 ± 22． 0 313． 5 ± 30． 8
联苯双脂 50 126． 5 ± 18． 1＊＊ 157． 7 ± 19． 3＊＊
狗肝菜多糖 300 107． 1 ± 16． 7＊＊ 119． 9 ± 13． 0＊＊
200 115． 5 ± 16． 7＊＊ 145． 7 ± 19． 0＊＊
100 137． 6 ± 16． 9* 181． 8 ± 30． 4*
与模型组比较 * P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01( 下同)
2． 2 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠 MDA、SOD 和 GSH-Px 水平的
影响 造模后，模型组大鼠血清中 SOD和 GSH-Px 活性显著降
低，MDA 含量增高。经狗肝菜多糖干预后，大鼠肝 SOD和 GSH-
Px活性升高，降低 MDA 水平，提示狗肝菜多糖对受损的大鼠肝
脏的氧化应激状况得以改善，见表 2。
表 2 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠血清中 MDA、SOD 和 GSH-PX 的
影响( 珋x ± s，n = 12)
组别
剂量
( mg /kg)
MDA
( nmol /ml)
SOD
( U /ml)
GSH-Px
( μmol /L)
正常对照 12． 73 ± 1． 10＊＊ 146． 1 ± 6． 9＊＊ 544． 1 ± 98． 7＊＊
模型对照 14． 64 ± 0． 97 109． 0 ± 12． 2 301． 5 ± 67． 9
联苯双脂 50 11． 55 ± 1． 96＊＊ 122． 1 ± 17． 2＊＊ 449． 6 ± 102． 3＊＊
狗肝菜多糖 300 10． 10 ± 1． 57＊＊ 134． 6 ± 16． 6＊＊ 468． 1 ± 121． 3＊＊
200 10． 47 ± 2． 76＊＊ 142． 0 ± 14． 1＊＊ 401． 6 ± 88． 3＊＊
100 11． 29 ± 2． 47＊＊ 144． 9 ± 10． 2* 380． 0 ± 81． 3*
2． 3 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠肝组织炎症介质 TNF-α 和 IL-6
89 中药药理与临床 2015; 31( 4)
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.04.030
水平的影响 由表 3 中结果提示，模型组肝损伤大鼠肝组织中
TNF-α和 IL-6 水平较正常组比较明显升高。经狗肝菜多糖药
物干预后，受损肝组织中 TNF-α 和 IL-6 的水平降低，且与模型
组比较差别有统计学意义。
表 3 狗肝菜多糖对肝损伤大鼠肝组织中 TNF-α和 IL-6 的影响( 珋x
± s，n = 12)
组别 剂量( mg /kg) TNF-α( pg /mg) IL-6( pg /mg)
空白对照 30． 1 ± 7． 0＊＊ 29． 5 ± 8． 3＊＊
模型对照 130． 6 ± 18． 3 123． 2 ± 17． 7
联苯双脂 50 69． 7 ± 14． 5＊＊ 64． 4 ± 13． 6＊＊
狗肝菜多糖 300 68． 1 ± 13． 2＊＊ 67． 6 ± 11． 2＊＊
200 76． 3 ± 16． 4＊＊ 81． 1 ± 19． 1＊＊
100 91． 3 ± 23． 6* 86． 4 ± 18． 7*
2． 4 肝组织病理变化 经 HE 染色，光镜下观察，正常大鼠肝
细胞均匀排列，胞浆丰富，肝小叶结构完整，肝索及肝窦清晰可
辨，汇管区未出现炎症浸润。模型组肝组织损伤严重，镜下见肝
小叶结构被破坏，肝细胞数量减少，小叶内肝细胞出现不同程
度的水肿，部分区域出现明显点灶状坏死和淤血，病变以环中
央静脉分布为主。而狗肝菜多糖( 300 mg /kg、200 mg /kg) 用药
组的肝细胞坏死程度较模型组都有明显改善，肝小叶结构基本
正常，细胞索状排列较整齐，肝内淤血及细胞肿胀明显减轻，点
灶状坏死偶见，肝细胞数量也得到逐渐增加。从 HE 组织病理
学检查提示狗肝菜多糖能够有效改善药物性肝损伤大鼠的肝
功能，见图 2。
图 2 狗肝菜多糖对酒精性大鼠肝损伤病理学变化( × 100)
A:正常对照; B:模型对照; C:联苯双酯( 50 mg /kg) ; D :狗肝菜多糖( 300 mg /kg) ; E: 狗肝菜多糖( 200 mg /kg) ; F:狗肝菜多糖( 100 mg /kg )
3 讨论
本实验结果发现，狗肝菜多糖防治组大鼠血清中 ALT、AST
的活性低于模型组。光镜下显示，模型组肝组织损伤严重，镜下
见肝小叶结构被破坏，肝细胞数量减少，小叶内肝细胞出现不
同程度的水肿，部分区域出现明显点灶状坏死和淤血，病变以
环中央静脉分布为主。而狗肝菜多糖用药组的肝细胞坏死程
度较模型组都有明显改善，提示狗肝菜多糖能够有效改善药物
性肝损伤大鼠的肝功能。
动物肝损伤后会释放出一些毒性介质，该介质通过氧化细
胞蛋白质 DNA及生物膜脂质，可形成脂质过氧化产物MDA，而
MDA和自由基均能损伤生物膜，具有细胞毒性作用，导致肝细
胞坏死［4］。当化学药物致肝损伤后，可引起活性氧 ( ＲOS) 增
加，其抗氧化酶 SOD和非酶自由基清除剂 GSH-Px 活性改变，并
进一步刺激脂质过氧化反应，引起肝细胞膜损伤和破坏［5］。本
研究结果发现，狗肝菜多糖能明显改善肝损伤大鼠引起的 MDA
活性增加，SOD 和 GSH-Px 活性降低，其机制可能与线粒体氧化
应激在酒精性肝损伤中起到了极其重要的作用。
TNF-α和 IL-6 是由肝 Kupffer细胞表达和分泌的产生炎性
细胞因子，这些细胞因子可进一步刺激相邻的肝细胞和附近的
Kupffer 细胞 TNF-α、IL -6 的表达［6］。TNF-α在参与机体免疫防
御机能的同时又介导炎症反应、组织损伤等病理生理变化［7］;
本研究结果提示当酒精诱导肝损伤时，导致 Kupffer 细胞释放
大量的炎性细胞因子，从而使肝组织中 TNF-α 和 IL-6 的含量
明显升高，而狗肝菜多糖能抑制由 TNF-α 和 IL-6 所介导的肝
细胞炎性反应，有效地保护肝细胞。
综上所述，狗肝菜多糖保肝作用从氧化应激和抗炎两方面
来体现，也说明了中药成分药效作用的多靶点，但其具体的作用
机制还有待今后的深入研究。
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Study on the protective effect of Dicliptera chinensis polysaccharide on rats liver induced by alcohol
Wei Ｒiming，Gao Ya，Zhong Mingli，Zhang Kefeng＊＊
( Guilin Medical University，Guilin 541004)
Objective: To investigate the protective of Dicliptera chinensis polysaccharide induced liver injury by alcohol in rat based on oxidative
stress and inflammation ． Methods: The experimental 72 rat were randomly divided into six groups，namely the normal group，model group，
positive control group ( 50 mg / kg ) and Dicliptera chinensis polysaccharide dose group ( 300，200，100 mg /kg ) ． Except the normal
group，the other groups of 53% alcohol were gavage in rat ( 10 ml / kg /d ) to copy the model of liver injury in the 30 days of administration．
Hematoxylin -eosin ( HE) staining of liver histopathological changes． Colorimetric detection of ALT，AST，MDA，GSH-Px and SOD; Using
the elisa to assay TNF-α and IL-6 levels of liver tissue． Ｒesults: Compared with model group，Dicliptera chinensis polysaccharide( 100 mg /
kg ，200 mg /kg，300 mg /kg) significantly reduced ALT，AST and MDA activity in rat serum，elevated GSH-Px and SOD activity，while re-
ducing liver tissue TNF-α，IL-6 levels and reduce pathological lesions of liver injury． Conclusion: Dicliptera chinensis polysaccharide can
reduce alcohol induced acute liver injury in rat，which may be associated with decreased oxidative stress and anti-inflammatory effects．
Key words Dicliptera chinensis polysaccharide( 狗肝菜多糖) ; alcohol liver injury; oxidative stress; anti inflammation
白芍总苷对急性化学性肝损伤小鼠的保护作用研究
刘 芬
(河北省邯郸市中心医院药学部，邯郸 056001)
摘 要 目的: 研究白芍总苷对 D-半乳糖胺诱导的小鼠急性化学性肝损伤的保护作用。方法:将实验小鼠按体重随机分为 6
组，即正常组、模型组、白芍总苷( 60、120、240mg /kg) 组、联苯双酯( 100mg /kg) 组。每天给药 1 次，连续给药 7 天，末次给药 8 小时
后，采用腹腔注射 D-半乳糖胺诱导建立小鼠急性肝损伤模型，测定白芍总苷对血清中谷丙转氨酶( ALT) 、谷草转氨酶( AST) 水平的
影响，观察白芍总苷对肝匀浆中超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 活性以及丙二醛( MDA) 含量变化的影响，
ELISA法测定白芍总苷对血清中肿瘤坏死因子 α( TNF-α) 含量的影响。结果:与模型组相比，白芍总苷 240 mg /kg 剂量组能显著降
低血清中 ALT、AST、TNF-α水平; 显著降低肝匀浆中 MDA含量; 显著升高 SOD、GSH-Px活性。结论: 白芍总苷对 GalN诱导的小鼠
急性化学性肝损伤具有较好的保护作用。
关键词 白芍总苷;肝损伤; D-半乳糖胺
流行病学调查显示，2004 ～ 2012 年我国病毒性肝炎发病率
为 0． 1%左右，居于传染病第一位，病毒性肝炎年毒性肝炎在传
染病中所占比例在 22． 67 ～ 33． 18%之间［1］。病毒性肝炎传染
性强，不易控制，容易进一步发展肝硬化和肝癌，危害较大［2］。
白芍为我国传统常用中药之一，白芍总苷 ( Total glucosides of
paeony) 为白芍 ( Paeonia lactiflora Pall． ) 的有效部位，其中含有
芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等生
理活性的成分，白芍总苷具有抑制自身免疫反应、抗炎、止痛、保
肝等多种药理作用，临床上主要用于风湿性、免疫性疾病［3］。
白芍总苷对小鼠免疫性肝损伤［4］、CCl4 致小鼠急性肝损伤
［5］具
有一定的保护作用，但白芍总苷对 D-半乳糖胺 ( D-galac-
tosamine，GalN) 所致小鼠急性肝损伤的保护机制未见报道。本
文采用 D-半乳糖胺模拟病毒性急性肝损伤模型，给药后观察血
清转氨酶( ALT、AST) 和肿瘤坏死因子 α( TNF-α) 水平，肝组织
中超氧化物歧化酶( SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 活
性，丙二醛( MDA) 含量变化，探讨白芍总苷对 D-半乳糖胺肝损
伤模型小鼠肝细胞的保护作用，为白芍总苷的临床使用提供一
定的支持。
1 材料和方法
1． 1 试验药物 白芍总苷的制备［6］: 将适量白芍药材加 8 倍
量 70%乙醇浸泡 2 小时，加热回流提取提取三次，每次 1． 5 小
时。提取液浓缩后，以 AB-8 型大孔树脂分离、富集白芍总苷，
采用动态上样方式，现用 10 倍柱体积水冲洗，收集 10 倍量柱体
积 20%乙醇洗脱液，减压回收溶剂、干燥。经 HPLC 法测定( 色
谱条件 固定相: C18 色谱柱( 250 × 4． 6mm，5μm) ;流动相:乙腈-
0． 05%冰醋酸溶液( 17: 83 ) ; 流速: 1ml /min; 检测波长: 230nm;
柱温 35℃ ;理论塔板数以芍药苷计大于 4000 ) ，芍药苷含量为
41． 3%，芍药内酯苷含量为 14． 7% ( 图 1) 。联苯双酯购于北京
001 中药药理与临床 2015; 31( 4)
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