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待在炮制方法及工艺方面进一步完善和研究。
3.4　实验结果的分析
本实验结果表明 , 知母炮制后均有利于多糖的溶出 , 以
盐制法最好 , 其余依次为清炒法 、 酒炙法 、 麸炒法 、 知母生
品。多糖广泛的存在于自然界 , 多糖类药物的研制已成为当
今世界新药的发展方向之一[ 10-11] 。本实验为知母不同炮制
方法对多糖含量的影响提供了科学依据 , 为盐炙知母的质量
研究提供了参考。
参考文献
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(收稿日期:2009-12-07;修回日期:2009-12-28)
基于闪式提取的藏药蕨麻中总酚酸含量测定方法研究
邓安刚1 , 2 , 蔡霈1 , 3 , 詹雪晶1 , 2 , 汤芳玲1 , 4 , 蔡光明1＊ , 罗光明2 (1.解放军 302医院 解放军中药研究所 , 北
京　100039;2.江西中医学院 , 南昌　330004;3.湖南中医药大学药学院 , 长沙　410208;4.沈阳药科大学药学院 , 沈阳　
110016)
摘要:目的　建立基于闪式提取的藏药蕨麻中总酚酸含量快速测定方法。方法　采用闪式提取器提取 , 分光光度法
测定其含量。结果　闪式提取法所得蕨麻中总酚酸含量高于回流提取法与超声提取法所得总酚酸含量 , 藏药蕨麻中
总酚酸含量为 0.38 %。结论　该方法简便可行 , 可操作性强 , 灵敏度高 , 为藏药蕨麻中有效部位的进一步开发及
质量控制提供了新的技术手段和科学依据。
关键词:蕨麻;总酚酸;闪式提取;分光光度法
中图分类号:R284.2 , R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)03-0187-03
Determination of the content of total phenolic acids in Tibetan medicine
Potentilla anserine L.by flash-type extracting
DENG An-gang1 ,2 , CAI Pei1 , 3 , CAI Guang-ming 1＊ , TANG Fang-ling 1 , 4 , ZHAN Xue-jing1 , 2 , LUO Guang-ming2
(1.China Mi litary Institute o f Chinese Materia Medica , 302 Military Hospital of China , Bei jing 100039;2.
J iangx i Univ ersity o f T rad itional Chinese Medicine , Nanchang 330004;3.School o f Pharmacy , Hunan Universi-
ty o f T raditional Chinese Medicine , Changsha 410208;4.College o f Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical Uni-
versity , Shenyang 110016)
Abstract:Objective　 To establish a rapid de te rmination method for the the content o f to tal phenolic acids in Tibe tan
medicine Potentilla anserine L.by fla sh-ty pe ex tract.Methods　To tal phenolic acids were ex tracted by f lash- ty pe ,
concentr ated by flash device , purified by macropo rous and determinated by UV spectr opho tometr y.Results　The con-
tent determination of to tal pheno lic acids in Potentilla anserine L.by flash- ty pe ex tract w as be tte r than that o f reflu-
xing me thod and ultra sonic ex traction , and the active components content of total pheno lic acid in Potentilla anserine L.
　　作者简介:邓安刚 , 男 , 硕士研究生 , 主要从事中药及天然药物化学研究 , Tel:(010) 66933324 , E-mai l:dengangang@126.com 　　
＊通讯作者:蔡光明 , 男 , 研究员 , 主要从事中药与天然药物研究及新药开发 , Tel:(010)66933323 , E-mail:cgm 1004@vip.sina.com
中南药学 2010年 3月第 8卷第 3期　Cent ral Sou th Pharmacy.March 2010, Vol.8 No.3
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was 0.38%.Conclusion　This me thod is valid , practicable and reliable fo r the research and deve lopment and quality
contro l o f Potentilla anserine L.
Key words:Potentil la anserine L.;total pheno lic acid;flash-type ex tract;spectrophoto gaphy
　　蕨麻为蔷薇科委陵菜属植物鹅绒委陵菜 (Potenti lla an-
serina L.)的根 , 为藏医常用药 , 又名戳玛 、 卓老洒曾 、 延
寿果 、 人参果和仙人果等 , 为西部地区民间常用的传统滋补
品。蕨麻分布很广 , 但据 《新华本草纲要》 记载 “只在青藏
高原 , 本种始有块根发育” [ 1] 。本品作为营养滋补品具有应
用历史悠久 、 民族药特征明显等特点 , 如 《青海高原药物图
鉴》 就记载其为 “常用上药” [2] 。另据文献记载 , 蕨麻中含
有鞣质 、 糖类 、 蛋白质 、 脂肪酸及委陵菜苷等化学成分[3] ,
蔡光明等对藏药蕨麻进行了系统研究 , 提取与纯化了不同部
位并进行了有效部位抗肝炎药效作用的系统筛选与评价 , 并
对有效部位中总皂苷类化合物成分进行了分离纯化与结构鉴
定[ 4-7] , 但有关蕨麻中酚酸类的研究至今未见有文献报道。
近年来 , 闪式提取法[8]具有室温提取 、 无成分破坏 、 操
作简单快速 、 高效节能等优点 , 已被广泛应用于各种原料
(包括植物的根 、 茎 、 叶 、 花 、 果实 、 种子等)中各种成分
的提取 , 且可采用多种溶剂进行提取。袁珂[9]等对 4 种提取
方法进行了比较研究 , 结果表明从提取时间 、 提取完全程
度 、 所用溶剂和能源的多少等方面综合来看 , 闪式提取法明
显优于其他方法;刘振洋[ 10]等通过对几种常用提取方法进
行比较研究发现 , 在相同条件下 , 闪式提取法所提总皂苷含
量均高于其他几种方法;钱桂敏[ 11] 、 邓引梅[ 12] 、 于敏[ 13]等
采用闪式提取法分别对金钗石斛鲜品 、 甘草中总黄酮 、 抗宁
口服液进行提取 , 并确定了最佳提取工艺。本文采用闪式提
取器进行提取 , 并采用分光光度法对蕨麻所含总酚酸类成分
进行含量测定[14] 。
1　仪器与试药
　　Cary50 Bio 可见紫外分光光度计 (Varian Austr alia
PTY LTP);JHBE-50 型闪式提取器 (河南金鼐科技发展
有限公司);闪蒸器 (河南金鼐科技发展有限公司);AL204
电子分析天平 (梅特勒-托利多仪器有限公司);蕨麻 [ 青海
玉树藏族自治州 , 经兰州医学院药学系标本室朱世华教授鉴
定 , 其质量符合 《青海省药品标准》 (1992 年版)] ;原儿茶
酸对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:809-200102 ,
纯度>98%);甲醇 、 无水乙醇 、 十二烷基磺酸钠 、 三氯化
铁 、 铁氰化钾 、 浓盐酸 、 α-萘酚等均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　蕨麻药材的提取
2.1.1　蕨麻药材的提取方法考察　称取 3 份已烘干的蕨麻
粉末 , 各 50 g , 分别加入 3 倍量 50%乙醇浸泡过夜进行回
流提取 、 超声提取与闪式提取。
①　回流提取　沸腾回流提取 2 h , 提取 3 次 , 过滤得滤液 ,
浓缩干燥得浸膏 18.12 g , 浸膏得率为 36.24%。
②　超声提取　每次加入 3 倍量的 50%乙醇 , 提取 3 次 ,
30 min · 次-1 , 合并滤液 , 浓缩并干燥至干总得浸膏
15.51 g , 浸膏得率为 31.02%。
③　闪式提取　每次加入 5 倍量的 50%乙醇 , 提取 2 次 ,
2 min·次-1 , 合并滤液 , 浓缩并干燥 , 得总浸膏 17.08 g ,
浸膏得率为 34.14%。
2.1.2　提取方法及提取工艺的选择　分别比较以上 3 种提
取方法 , 以总酚酸含量为指标 , 考察结果表明闪式提取法所
得总酚酸含量高 , 同时具有用时短 , 常温提取等优点 , 故采
用闪式提取法提取 , 结果见表 1。同时采用正交实验优化闪
式提取工艺 , 以总酚酸含量为指标 , 考察提取时间 、 提取次
数 、 提取溶剂倍数 , 结果表明用 5倍量的溶剂 , 提取2 min ,
提取 2次为最佳提取工艺。
表 1　3种方法提取总酚酸含量比较
Tab 1　3 extraction methods
提取方法(ext raction method) 含量 (con tent)/ %
闪式提取 0.34
回流提取 0.31
超声提取 0.26
2.2　对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的原儿茶酸对照品 5.75 mg 置
50 mL 容量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀。 取
5 mL 置 50 mL 容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 0.45
μm 微孔滤膜滤过 , 即得 (含原儿茶酸 0.011 5 mg·m L-1)。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取按 “2.1.2” 项下最佳提取工艺制得的蕨麻总
提物干浸膏 0.052 3 g 于 25 mL 容量瓶中 , 加入 35%甲醇适
量 , 超声使其完全溶解 , 用 35%甲醇定容至 25 mL ,
0.45 μm 微孔滤膜过滤即得供试品溶液。
2.4　测定方法
精密移取供试品溶液 0.3 m L置于 25 mL容量瓶 , 加无
水乙醇 5 mL , 加 0.3%十二烷基磺酸钠 2 mL 及 1%FeCl3-
0.5%K3 [ Fe (CN)6] (1∶1)混合溶液 1 mL , 混匀 , 暗处
放置 5 min , 加 0.1 mo l· L -1 HCL 至刻度 , 混匀 , 在暗处
放置 20 min[ 15] 。用 Cary50 Bio 型分光光度计 , 在 679 nm 处
测定吸光度 A [ 15] 。
2.5　线性关系的考察
精密 移取对 照品 溶液 0.2 、 0.4、 0.6、 0.8 、 1.0 、
1.2 m L置于 25 mL 容量瓶中 , 按 “2.4” 项下方法配制并测
定 , 以吸光度 A 为纵坐标 , 原儿茶酸的量 (μg)为横坐标 ,
绘制标准曲线 , 回归方程为:A=0.017 3 C+0.100 4 , r=
0.999 5 , 线性范围为:0.092 ～ 0.552 μg·m L-1 。
2.6　精密度试验
精密量取对照品溶液 0.3 m L , 按 “ 2.5” 项下方法 , 连
续测定 6次 , RSD 为 2.85%(n=6)。
2.7　重复性试验
取同一批蕨麻药材粗粉 6 份 , 精密称定 , 按 “ 2.3” 项
方法制备供试品溶液 , 按含量测定方法重复测定 , RSD 为
1.10% (n=6), 表明该试验的重复性良好。
Cen t ral South Pharmacy.March 2010 , Vol.8 No.3　中南药学 2010年 3月第 8卷第 3期
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2.8　稳定性试验
取按 “2.3” 项下方法制得的样品溶液 , 依 “ 2.4” 项下
方法操作 , 每隔 30 min 测定 1 次吸光度 , RSD为 0.01%(n=
6)。结果表明 , 在波长不变的情况下 , 2.5 h 内测定值不变。
2.9　加样回收试验
精密称取已知含量的蕨麻药材粉末 6 份 , 分别加入一定
量的原儿茶酸对照品溶液 , 其后步骤按 “ 2.3” 和 “ 2.4” 项
下方法操作。计算回收率 , 测得平均回收率为 98.0%,
RSD为 0.85% (n=6), 结果见表 2。
表 2　回收试验结果
Tab 2　Recovery
编号
(No.)
样品中量
(sample
amount)
/ mg
加入量
(added
am ount)
/mg
测得量
(detected
am ount)
/ mg
回收率
(recovery)
/ %
平均
回收率
(average
recovery)
/ %
RSD
/ %
1 0.010 3 0.011 5 0.021 4 98.17
2 0.010 5 0.011 5 0.021 6 98.18
3 0.010 6 0.011 5 0.021 8 98.64
4 0.010 8 0.011 5 0.021 5 96.41 98.0 0.85
5 0.010 1 0.011 5 0.021 3 98.61
6 0.010 3 0.011 5 0.021 3 97.71
2.10　样品含量测定
精密移取按 “ 2.3” 项下方法制备的供试品溶液 0.3 mL
置于 25 mL 容量瓶 , 按 “ 2.4” 项下方法测定总酚酸含量 ,
按下式计算 , 结果见表 3。
W1 (%)=(25×C)/ (0.3×m2) ×100 , 式中 W1 (%)
为蕨麻干浸膏中总酚酸含量 , C 为原儿茶酸的含量 (μg),
m2 为蕨麻干浸膏供试品的重量 (μg)。
W (%)=(W1 ×m1)/ M×100 , 式中 W (%)为蕨麻原
药材中总酚酸含量 , M 为蕨麻原药材粉末重量 , m1 为闪式
提取所得蕨麻总浸膏量。
表 3　蕨麻中总酚酸含量测定结果
Tab 3　Content determination of total phenolic acids in Potentilla anserine L
编号
(No.)
含量
(content)/%
平均含量
(average content)/ %
1 0.41
2 0.38 0.38
3 0.36
3　讨论
天然酚酸类化合物具有很强的抗脂质过氧化和清除自由
基作用 , 同时还具有抗肝纤维化 、 抗动脉粥样硬化和改善记
忆功能障碍等作用。本实验中采用闪式提取器进行提取 , 首
次由藏药蕨麻中分离出酚酸类化合物 , 能达到对药材的快
速 、 高效 、 常温的提取 , 减少对有效成分的破坏 , 但闪式提
取器因设备原因提取样品量少 , 仅适于小量样品的分析测
试 , 不能用于工业大生产。分光光度法测定总酚酸含量 , 能
达到快速 、 准确且操作简便 、 可行。研究结果表明 , 蕨麻药
材中总酚酸具有进一步开发利用的前景。
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