全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2011)06 － 2246 － 03
收稿日期:2011 － 01 － 07
基金项目:人力资源和社会保障部资助项目(2010-412)
作者简介:潘 俊(1982 －) ，男，云南人，助理研究员，主要从事
药用植物成分方面的研究，* 为通讯作者，E-mail:jiaruili@ hot-
mail． com。
红葱抑制植物病原菌活性成分研究
潘 俊1，张焱珍1，2，李晚谊1，李智敏1，田 浩1，刘 莉1，石 瑶1，王翰墨1，李家瑞1*
(1．云南省农业科学院，云南 昆明 650205;2．昆明理工大学生命科学与技术学院，云南 昆明 650224)
摘 要:采用平皿生长速率法测定了云南特色植物红葱(Eleutherine plicata)对百合炭疽病菌(Colletotrichum liliacearum)、香蕉炭疽
病菌(Colletotrchum musae)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)等几种植物病原菌的抑制作用。结果表明，红葱甲醇提取物在浓度为
200 μg /mL时对百合炭疽病菌有较好的抑制作用，强于阳性对照;并从中分离出其抗菌活性成分为异红葱甲素 isoeleutherol(C14
H12O4)。
关键词:红葱;百合炭疽病菌;抗菌活性;天然产物
中图分类号:S482． 2 + 92 文献标识码:A
Study on the Fungitoxic Active Composition of Eleutherine plicata Extracts
PAN Jun1，ZHANG Yan-zhen1，2，LI Wan-yi1，LI Zhi-min1，TIAN Hao1，LIU Li1，SHI Yao1，WANG Han-mo1，LI Jia-rui1*
(1． Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Yunnan Kunming 650205，China;2． Faculty of Life Science and Technology，Kunming Uni-
versity of Science and Technology，Yunnan Kunming 650224，China)
Abstract:Antibacterial activities of E． plicata extracts against C． liliacearum，C． musae，and B． cinerea and etc． were tested by means of
growth rate method． As a result，the extracts of E． plicata had inhibitive effect on the C． liliacearum mycelia growth at the concentration of
200 μg /mL，Compared with the positive control，it had a stronger inhibiting ratio． Moreover，isoeleutherol(C14H12O4) ，the main active in-
gredient was isolated from E． plicata
Key words:E． plicata;C ． liliacearum;Antibacterial activity;Natural product
植物作为生物活性化合物的天然宝库，可产生
超过 40 万种的次生代谢产物，许多代谢产物具有抗
真菌活性，且来源于自然，对人、畜安全、无污染，成
为当今新型杀菌剂研究的热点。近几年来，国内外
许多学者对一些植物的抗菌、杀菌活性做了深入的
调查和研究，如蝙蝠葛、苍耳、防风和香樟籽等的丙
酮和甲醇提取物对灰霉病菌都表现出了一定的抑制
作用［1 ～ 2］。
荔枝草提取物对几种病菌(如霜疫霉、稻瘟菌
和香蕉炭疽菌)具有良好的抑制作用［3］。国外报道
了一些成分(如香精油［4］、叶精油［5］、β-木兰碱与 α-
木兰碱［6］等)具有潜在的抗真菌作用，可以作为一
种合成杀菌剂来控制一些重要的植物真菌病害。红
葱(Eleutherine plicata)为鸢尾科红葱属植物，广泛分
布于广西、云南。性苦、凉，鳞茎、全草可入药［7］。
本文测定了红葱对几种植物病原菌的抑制作用，为
创制和发展新型杀菌剂提供理论基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试菌株 百合炭疽病菌(Colletotrichum
liliacearum)、香蕉炭疽病菌(Colletotrchum musae)、
番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、玉米纹枯病菌(Rhi-
zoctonia solani)。以上 4 个菌株购于中国药品生物
鉴定所。
1． 1． 2 供试植物样品 红葱(E． plicata) ，采自云
南，由中国科学院西双版纳热带植物园崔景云先生
采集并鉴定。
1． 1． 3 培养基 马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养
基) :马铃薯(去皮)200 g，蔗糖 20 g，琼脂 20 g，水
1000 mL，pH值自然。
6422
西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
2011 年 24 卷 6 期
Vol. 24 No. 6
表 1 红葱提取物对 4 种植物病原菌的生长抑制作用
Table 1 The inhibition of E． plicata extracts on 4 pathogens mycelial growth
供试菌
Microbes
抑制率(%)Inhibition
红葱粗提物(200 μg /mL)
E． plicata extracts
阳性对照(200 μg /mL)
Positive control
空白(1 %甲醇)
Black
百合炭疽病菌 C． liliacearum 61． 4 52． 1 0
香蕉炭疽病菌 C． musae 0 57． 9 0
番茄灰霉病菌 B． cinerea 20． 4 69． 75 0
玉米纹枯病菌 R． solani 29． 9 100 0
注:表中数据为 3 次重复平均值。Note:The data in the table indicate mean of three replicates．
1． 1． 4 仪器 超声波清洗器 HS-1026OD，旋转蒸
发仪 R-215(BCHI) ，电子天平 AL204-IC(梅特勒-
托利多仪器有限公司) ，三用紫外分析仪 WFH-203
(上海精科实业有限公司) ，HPLC 分析仪(Waters) ，
超净工作台 SW-CJ-IF(苏净集团安泰公司制造) ，全
自动高压灭菌锅 MLS-2420(SANYO Electric Co，
Ltd．) ，电热恒温培养箱 DHP-360(北京市永光医疗
仪器厂)。
1． 2 方法
1． 2． 1 红葱粗提物活性筛选 植物活性物质的提
取。将红葱全株阴干，粉碎。称取 500 g用甲醇按 1
∶ 5 浸提 2 次，过滤。滤液在 30 ℃以下用旋转蒸发
仪减压浓缩，得浸膏，低温保存备用。
采用平皿生长速率法［8］测定样品对植物病原
菌的抑制作用。将红葱粗提物用甲醇溶解，配制为
20 mg /mL的样品溶液，从中取 1 mL混合于 99 mL、
45 ℃的 PSA培养基中，制成含待测样品的培养基平
板，则样品最终浓度为 200 μg /mL。以含 1 %甲醇
的 PSA平板为空白对照，每个样品设 3 个重复。将
已活化且直径为 7 mm的供试菌株菌饼接种到含毒
PSA平板中央，置于生化培养箱中，适宜温度培养至
空白对照菌落直径达到培养皿的 2 /3 时，用十字交
叉法测量菌落直径，计算抑制率(%) ，并对数据进
行统计分析。按下式计算抑制率:
抑制率(%)=(对照菌落半径 －处理菌落半
径)/对照菌落半径 × 100
半数有效抑制浓度:EC50值通过 DPS 数据处理
系统计算得出。
阳性对照为购自山东大成农药股份有限公司的
75 %百菌清可湿性粉剂(WP) :用水溶解，配制为
20 mg /mL的阳性对照液，再从中取 1 mL混合于 99
mL、45 ℃的 PSA培养基中，制成含对照样品的培养
基平板，则阳性对照的最终浓度为 200 μg /mL。
1． 2． 2 红葱活性成分分析 活性成分分离纯化。
取红葱干粉 9． 7 kg，甲醇浸提，萃取后发现乙酸乙酯
部位有明显活性。然后经硅胶柱色谱柱色谱、薄层
层析(TLC)、重结晶及高效液相色谱仪分析等方法，
得到 1 g的化合物 a。
化合物 a 经1H-NMR、13 C-NMR、MS 等光谱分
析，并与文献对照［7］，确定其化学结构。
活性验证采用平皿生长速率法。
2 结果与分析
2． 1 红葱粗提物活性
如表 1 所示，在 200 μg /mL 的浓度下，红葱粗
提物对百合炭疽病菌、番茄灰霉病菌、玉米纹枯病菌
均有抑制作用，其中对百合炭疽病菌的抑制效果最
好，达到了 61． 4 %，强于阳性对照百菌清的 52． 1 %
(图 1)。
2． 2 活性化合物分离纯化
活性物质经硅胶柱层析分离、结晶后得到 1 个
化合物 a。图 2 为该化合物在检测波长为 248 nm
时的高效液相色谱图。
2． 3 化合物 a的结构确定
化合物 a为无色针状结晶，经仪器测定，波谱数
74226 期 潘 俊等:红葱抑制植物病原菌活性成分研究
图 3 化合物 a (异红葱甲素)
Fig． 3 C14H12O4(isoeleutherol)
据为:1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:1． 74 (3H，d，J
= 6． 5 Hz，1-Me) ，4． 11 (3H，s，8-OMe) ，5． 72
(1H，q，J = 6． 5 Hz，1-H) ，6． 93 (1H，d，J = 7． 7
Hz，7-H) ，7． 40 (1H，t，J = 7． 9 Hz，6-H) ，7． 56
(1H，t，J = 8． 3 Hz，5-H) ，7． 87 (1H，s，4-H) ，9．
65 (1H，s，9-OH) ;13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:
19． 12 (11-C) ，56． 35 (10-C) ，76． 68 (1-C) ，106．
21 (7-C) ，116． 47 (6-C) ，117． 45 (8a-C) ，123． 60
(5-C) ，125． 83 (3a-C) ，126． 56 (4-C) ，127． 86
(9a-C) ，137． 15 (4a-C) ，149． 12 (9-C) ，156． 52
(8-C) ，170． 57 (3-C) ;MS m/z (M + Na)+:267．
0613。
关于此化合物文献中已有报道［7］，与其对照最
终确定为 isoeleutherol(C14H12O4) (图 3)。但其对百
合炭疽病菌的抑制活性此前未见报道。
2． 4 化合物 a的活性验证
抑菌活性结果表明，在 200 μg /mL下，化合物 a
的活性比粗提物的活性弱(图 4)。
3 讨 论
植物拥有丰富的天然活性化合物，目前，国内外
对植物源抑菌剂的研究较多［9 ～ 11］。植物杀菌剂来
源于自然，其安全、无污染的特点已成为当今新型杀
菌剂创制研究的热点。其结构类型涉及萜类、生物
碱类、黄酮类等化合物。
本文采用平皿生长速率法测定了红葱对几种植
物病原菌的抑制作用，发现其甲醇提取物在浓度为
200 μg /mL时对百合炭疽病菌有较好的抑制作用。
对红葱活性成分进行分离，从中得到 1 个活性化合
表 2 化合物 a对百合炭疽病菌的生长抑制作用
Table 2 The inhibition of compound a on C． liliacearum mycelial growth
样品浓度
Concentration
百合炭疽病菌 C． liliacearum
菌落直径(cm)
Diameter
抑制率(%)
Inhibition
100 μg /mL(化合物 a) 4． 30 26． 1
200 μg /mL(化合物 a) 3． 13 46． 5
300 μg /mL(化合物 a) 2． 76 52． 8
400 μg /mL(化合物 a) 2． 68 54． 2
500 μg /mL(化合物 a) 1． 70 70． 9
200 μg /mL(阳性对照) 2． 80 52． 1
1 %甲醇(空白) 5． 85 0
EC50(化合物 a) 284． 91 μg /mL
注:表中数据为 3 次重复平均值。
Note:The data in the table indicate mean of three replicates．
图 4 化合物 a对百合炭疽病菌的抑制作用
Fig． 4 The inhibition of compound a on C． liliacearum
物 a，利用光谱学方法鉴定结构为 isoeleutherol(C14
H12O4)。采用生长速率法抑菌活性进行验证，其活
性仍然存在，但与粗提物相比减弱了，可能是协同作
用的原因。
红葱为鸢尾科红葱属植物，根据文献报道目前
已从红葱属中分离出萘酚类、萘醌类和葡萄糖苷类
等十几个化合物，其中的一些成分具有增加冠状动
脉血流量、抑制人体拓扑异构酶等多种药理活
性［7］，而红葱对百合炭疽病菌的抑制活性此前未见
报道。本文活性筛选只是初期的研究指导，需要跟
踪分离找到其它活性化合物后进一步验证，并对其
构效关系和机理进行深入研究。
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8422 西 南 农 业 学 报 23 卷