全 文 ：收稿日期:2004-09-13
作者简介:徐金钟(1977-), 男(汉族),江西高安人 , 硕士研究生;邱峰(1967-),男(汉族), 辽宁大连人 , 博士 , 教授 ,
博士生导师 , 主要从事天然活性成分及其代谢转化的研究 , Tel:(024)23986515 , E-mail:fengqiu2000 @
tom.com。
文章编号:1005-0108(2005)03-0157-05
红葱抗稻瘟霉活性成分研究
徐金钟 ,邱 峰 ,曲戈霞 ,王乃利 ,姚新生
(沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘　要:目的 阐明红葱抗稻瘟霉活性的物质基础。方法 利用稻瘟霉筛选体系对红葱的 60%(φ)乙醇提取物
及其氯仿 、正丁醇和水的萃取部分进行活性筛选 , 并对活性部位的化学成分进行分离鉴定。结果与结论 从活
性部位中分离得到 10个化合物 , 通过理化性质和波谱数据鉴定它们的结构分别为:异红葱甲素(1)、异红葱乙
素(2)、红葱乙素(3)、β-谷甾醇(4)、8-羟基-3 , 4-二甲氧基-1-甲基-蒽醌-2-羧酸甲酯(5)、4-羟基红葱乙素(6)、
hongconin(7)、4 , 8-二羟基-3-甲氧基-1-甲基-蒽醌-2-羧酸甲酯(8)、dihydro-eleutherinol(9)、1 , 3 , 6-三羟基-8-甲基蒽
醌(10)。其中 , 9和 10 为首次从该属植物中分得。化合物2 、3、5、6、7、9 、10具有较好的诱导稻瘟霉菌丝变形的
活性 ,它们的最小变形浓度(minimum morphological deformation concentrate ,MMDC)分别为 30 、30 、170、130、55、60、
150 μmol·L-1 。用MTT法测定 10 个化合物的抗肿瘤活性 ,发现化合物 2 、3、5、6、7、9 有较强的抑制人类红白血
病细胞株K562 细胞生长的活性 , 它们的 IC50值分别为 33、49 、266、35、174 、154 μmol·L-1 。
关键词:药物化学;结构鉴定;核磁共振波谱;红葱;生物活性成分;稻瘟霉;人体红白血病细胞株
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A
Studies on the antifungal constituents isolated
from Eleutherine americana
XU Jin-zhong ,QIU Feng ,QU Ge-xia ,WANG Nai-li ,YAO Xin-sheng
(School of Traditional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016 , China)
Abstract:Aim To search antifungal and anticancer constituents of Eleutherine americana Merr.et K.Heyne(Hong-
cong).Method Pyricularia oryzae bioassa guided isolation was used for screening bioactive constituents of Eleutherine
americana.Results and conclusion Ten compounds were obtained and identified as isoeleutherol(1), isoeleutherin
(2), eleutherin(3), β-sitosterol(4), 8-hydroxy-3 ,4-dimethoxy-1-methyl-anthraquinone-2-carboxylic acid methyl ester
(5),4-hydroxyeleutherin(6),hongconin(7),4 ,8-dihydroxy-3-methoxy-1-methyl-anthraquinone-2-carboxylic acid meth-
yl ester(8),dihydro-eleutherinol(9), and 1 ,3 ,6-trihydroxy-8-methyl anthraquinone(10), respectively by physico-chem-
ical properties and spectral data.These compounds belong to either naphthoquinones ,naphthols , or anthraquinones.
Compounds 9 and 10 are reported from Eleutherine genus for the first time.Their activities against the growth of Pyric-
ularia oryzae were tested.Some of them showed potential activities on Pyricularia oryzae with MMDC(minimum mor-
phological deformation concentration)value of 30μmol·L-1(2),30μmol·L-1(3),170μmol·L-1(5),130 μmol·L-1
(6),55μmol·L-1(7),60 μmol·L-1(9)and 150μmol·L-1(10), respectively.Additionally ,MTT method showed some
of these compounds could inhibit the proliferation of K562(human erythroleukemia)with IC50 value of 33μmol·L-1
(2),49μmol·L-1(3),266μmol·L-1(5),35μmol·L-1(6),174μmol·L-1(7)and 154 μmol·L-1(9).
Key words:medicinal chemistry;structural identification;NMR;Eleutherine americana;bioactive constituents;
Pyricularia oryzae;human erythroleukemia
第 15 卷　第 3 期
2005年6月　总65期
中 国 药 物 化 学 杂 志
Chinese Journal of Medicinal Chemistry
Vol.15　No.3　p.157
Jun.2005 Sum 65
DOI :10.14142/j.cnki.cn21-1313/r.2005.03.007
　　红葱为鸢尾科红葱属植物红葱(Eleutherine
americana Merr.et K.Heyne)的全草或鳞茎 ,味苦性
凉 ,主治风湿性关节痛 、跌打肿痛 、疮毒 、吐血 、咯
血 、痢疾 、闭经腹痛等症。已从该属植物中分离出
萘酚类 、萘醌类 、蒽醌类和葡萄糖苷类等十几个化
合物[ 1 ～ 5] ,它们是红葱属植物的主要活性成分。
其中的一些成分具有抗菌[ 1] 、增加冠状动脉血流
量[ 3] 、抑制 HIV 、抑制人体拓扑异构酶 Ⅱ[ 4] 等多种
药理活性。本研究在稻瘟霉筛选体系的指导下 ,
对红葱的化学成分进行活性跟踪分离 ,从中得到
10个化合物 ,利用光谱学方法鉴定它们的结构 ,
其中 ,化合物 9和 10为首次从该属植物中分得。
对这些化合物进行体外抗人体肿瘤细胞的活性测
试 ,结果表明:多数单体具有强度不同的抗人体肿
瘤细胞活性。
1　仪器与材料
熔点用 Yanagimoto 熔点测定仪测定 ,温度未
校正 。紫外光谱用UV 2401PC仪(岛津)测定 。红
外光谱用 FTIR 8900(岛津)红外光谱仪测定。旋
光度用 JASCOP 1020 旋光仪 , 采用钠灯测定。
MPLC 采用东京理化株式会社的 MPLC色谱系统。
HPLC采用 LC-8A(岛津)半制备型高效液相色谱
仪 ,色谱柱为 AQUSAIL SS4251(120)10 mm×250
mm ,检测器为紫外检测器(SPD-10Avp detector ,
日本岛津公司)。薄层色谱采用自制薄层硅胶板
(青岛海洋化工厂硅胶G ,10 ～ 40μm)和 Rp-18高
效薄层预制板(Merck公司)。柱色谱采用硅胶 G
(青岛海洋化工厂 , 50 ～ 71μm)及 Rp-18柱色谱材
料(Merck公司)。活性测试用显微镜为OLYMPUS
B202型。药材由沈阳药科大学孙启时教授采自
广西 并 鉴 定 为 Eleutherine americana Merr.et
K.Heyne 。
2　提取与分离
取红葱 4 kg ,用60%(φ)的乙醇回流提取 2 h
(20 L×2),合并提取液 ,减压浓缩至干(300 g ,抗
稻瘟霉活性 MMDC:40μg·mL-1),然后分散于3 L
的水中 ,分别用氯仿 、正丁醇萃取 , 得到氯仿层
96 g(MMDC:20 μg·mL-1)、正丁醇层 98 g(MMDC:
300μg·mL-1)、水层 104 g(MMDC:100μg·mL-1)。
对抗稻瘟霉活性较好的氯仿层采用硅胶柱色谱 、
中低压柱色谱及高效液相色谱分离得到化合物 1
(3 g)、化合物2(5 g)、化合物 3(4 g)、化合物 4(500
mg)、化合物 5(20 mg)、化合物 6(35 mg)、化合物 7
(25 mg)、化合物 8(6 mg)、化合物 9(22 mg)及化合
物 10(12 mg)。
3　结构鉴定
化合物 1 无色 针状 结晶 , mp 207.0 ～
208.0 ℃。IR(KBr)σ:3352 , 1759 ,1604 ,1519 ,1458 ,
1238 ,1112 , 1087 cm-1 。1H-NMR(CDCl3 , 400 MHz)
δ:9.66(1H , s , 9-OH),7.95(1H , s , 4-H), 7.58(1H ,
d , J =8.0 Hz , 6-H),7.41(1H , t , J =8.0 Hz , 7-H),
6.94(1H , d , J =8.0 Hz , 5-H), 5.73(1H , q ,
J =6.8 Hz ,1-H), 1.75(3H , d , J =6.8 Hz , 1-CH3),
4.12(3H , s , 8-OCH3)。 13 C-NMR(100 MHz , CDCl3)
δ:170.3(C-3), 156.3(C-8), 148.9(C-9),136.9(C-
4a),127.2(C-9a), 126.3(C-6), 125.7(C-3a),123.4
(C-5),117.3(C-8a),116.3(C-4),106.0(C-7),76.5
(C-1),56.3(8-OCH3), 19.1(1-CH3)。通过理化性
质及波谱数据分析 ,并与文献[ 4]的氢谱数据对
照 ,鉴定该化合物为异红葱甲素(isoeleutherol)。
化合物 2黄色针状结晶 ,mp 175 ～ 177 ℃。 IR
(KBr)σ:1658 , 1585 , 1473 , 1288 , 1257 , 1203 , 779 , 740
cm
-1 。1H-NMR(400MHz ,CDCl3)δ:7.74(1H , d , J =
8.0 Hz ,6-H), 7.64(1H , t , J =8.0 Hz , 7-H), 7.28
(1H ,d , J =8.0 Hz , 8-H),4.86(1H , q , J =6.7 Hz ,
1-H),4.00(3H , s ,9-OCH3),3.58(1H ,m , 3-H),2.75
(1H , m , J =18.4 Hz , 4-H), 2.20(1H , m , J =18.4
Hz , 4-H), 1.54(3H , d , J =6.5 Hz , 1-CH3), 1.36
(3H , d , J =6.5 Hz , 3-CH3)。 13 C-NMR(100 MHz ,
CDCl3)δ:183.4(C-5 、10), 159.1(C-9), 148.4(C-
10a), 139.7(C-4a), 134.3(C-5a), 133.7(C-7),
118.8(C-9a),118.1(C-6),117.5(C-8),68.6(C-1),
56.4(9-CH3),56.3(C-3),29.9(C-4),21.2(3-CH3),
20.7(1-CH3)。通过理化性质及波谱数据分析 ,并
与文献[ 3]的氢谱数据对照 ,鉴定该化合物为异红
葱乙素(isoeleutherin)。
化合物 3黄色针状结晶 ,mp 177 ～ 179 ℃。 IR
(KBr)σ:1658 , 1585 , 1473 , 1288 , 1257 , 1203 , 779 , 740
158 中 国 药 物 化 学 杂 志 第 15 卷
cm
-1 。1H-NMR(400MHz ,CDCl3)δ:7.75(1H ,d , J =
8.0 Hz ,6-H), 7.65(1H , t , J =8.0 Hz , 7-H), 7.29
(1H ,d , J =8.0 Hz , 8-H),5.02(1H , q , J =6.7 Hz ,
1-H),4.02(3H , s ,9-OCH3),3.96(1H ,m , 3-H),2.69
(1H , m , J =18.4 Hz , 4-H), 2.24(1H , m , J =18.4
Hz , 4-H), 1.55(3H , d , J =6.5 Hz , 1-CH3), 1.34
(3H , d , J =6.5 Hz , 3-CH3)。 13 C-NMR(100 MHz ,
CDCl3)δ:183.9(C-10), 182.4(C-5), 159.4(C-9),
147.7(C-10a), 139.1(C-4a), 134.5(C-5a), 133.8
(C-7),119.4(C-9a),118.9(C-6),117.5(C-8),67.3
(C-1), 62.3(C-3), 56.3(9-CH3), 29.4(C-4), 21.5
(3-CH3),19.7(1-CH3)。通过理化性质及波谱数
据分析 ,并与文献[ 3]的氢谱数据对照 ,鉴定该化
合物为红葱乙素 eleutherin 。
化合物 4白色针状结晶 ,mp 135 ℃。遇 10%
(φ)H2SO4 显紫红色。 IR(KBr)σ:3437(OH),
2935 ,2889 , 2866 , 1462 ,1380(CH3 、CH2), 1061(C—
O)cm-1 。与 β-谷甾醇标准品进行对照 ,TLC上的
Rf值及 IR图谱均一致 ,确定该化合物为 β-谷甾
醇。
化合物 5 黄色 针状 结晶 , mp 152.0 ～
153.0 ℃。IR(KBr)σ:3391(OH), 2936 , 1650 , 1632
(C O), 1608 , 1458 , 1380(CH3), 1049(CO), 1108
cm
-1 。1H-NMR(300 MHz ,CDCl3)δ:12.52(1H , s ,8-
OH),7.68(1H ,dd , J =7.2 ,1.2 Hz ,5-H),7.60(1H ,
t , J =7.2 Hz ,6-H),7.25(1H , dd , J =7.2 , 1.2 Hz ,
7-H),4.02(3H , s ,4-OCH3),3.98(3H , s ,15-OCH3),
3.96(3H , s , 3-OCH3), 2.69(3H , s , 1-CH3)。 13 C-
NMR(75 MHz ,CDCl3)δ:189.1(C-9), 181.9(C-10),
166.3(C-15), 161.3(C-8), 154.9(C-4), 151.6(C-
3),136.5(C-1),135.7(C-6),135.7(C-2), 133.8(C-
11),129.4(C-14),127.8(C-13),123.3(C-7),118.2
(C-5), 116.2(C-12), 61.8(4-OCH3), 61.4(3-
OCH3),52.6(15-OCH3), 20.1(1-CH3)。通过理化
性质及波谱数据分析 ,并与文献[ 5]的碳谱 、氢谱数
据对照 ,鉴定该化合物为 8-羟基-3 ,4-二甲氧基-1-
甲基-蒽醌-2-羧酸甲酯。
化合物6棕色针状结晶 ,mp 139 ～ 141 ℃。 IR
(KBr)σ:3526 , 1651 , 1585 , 1450 , 1261 , 1061 cm-1 。
ESI-MS m z 给出 311[ M +Na] + 、327[M +K] + 、
287[M-1] -峰 ,表明该化合物的相对分子质量为
288。1H-NMR 谱中 , δ7.72(1H , dd , J =7.5 , 1.2
Hz)、δ7.66(1H , t , J =7.5 Hz)和 δ7.29(1H , dd , J
=7.5 ,1.2 Hz)为呈 ABC 偶合系统的 3个芳香质
子信号;δ4.93(1H , q , J =6.6 Hz)和 δ1.59(3H ,
d , J =6.6 Hz)在 COSY谱上有相关峰 ,提示存在
OCHCH3结构片段;δ4.45(1H ,m , J =7.8 ,1.8Hz)
和 δ3.88(1H ,m)、δ3.80(1H ,m)在 COSY谱上均
有相关峰 ,而在 HMQC上 δ3.80信号没有碳信号
与之对应 ,推测该氢为醇羟基氢 ,且从HMBC谱可
以看出该羟基所连接的碳原子与 δ4.45氢质子
连接的碳原子相同 ,因此 ,可推测出 HO—CHCH—
O结构片段;另外 ,从 COSY谱上还能看到 δ1.40
(3H)质子与 δ3.88质子相关 ,所以上述片段可加
长为 HO—CH —CH(CH3)—O 。 13 C-NMR 谱中 , δ
185.6 、δ182.1 是 2 个羰基碳信号 , 加上 δC:
159.2 、148.7 、138.2 、134.6 、133.5 、119.3 、118.7 、
117.9 ,共有10个 sp2 杂化碳;δC 67.4 、δC 67.0 、δC
67.2 、δC 56.3为 3个连氧次甲基碳和 1个连氧甲
基碳信号 , δC 19.0和 δC 18.5为 2个甲基碳信号 。
结合 2D-NMR谱确定该化合物的平面结构为 4-羟
基红葱乙素(4-羟基-9-甲氧基-1 , 3-二甲基-3 , 4-二
氢-1H-苯并[ g]异色烯-5 ,10-二酮),对于其立体结
构 ,由 J 3 ,4 =7.8 Hz可以确定 H-3和 H-4分别处
在吡喃环上下两侧 ,又根据 H-1和 H-3之间有弱
的偶合(J 1 , 3=0.9 Hz),推测 H-1和 H-3处于吡喃
环同侧 ,至此 ,该化合物的相对构型得以确定 ,其
绝对构型可能为下述两种情况之一:4α-羟基-9-
甲氧基-1β ,3β-二甲基-3 , 4-二氢-1H-苯并[ g]异色
烯-5 ,10-二酮 ,或者 4β-羟基-9-甲氧基-1α, 3α-二
甲基-3 , 4-二氢-1H-苯并 [ g] 异色烯-5 , 10-二酮。
1
H-NMR(300 MHz ,CDCl3)δ:7.72(1H , dd , J =7.5 ,
1.2 Hz , H-6), 7.66(1H , t , J =7.5 Hz , H-7), 7.29
(1H , dd , J =7.5 , 1.2 Hz , H-8), 4.93(1H , q ,
J =6.6 Hz , 1-H), 4.45(1H ,m , J =7.8 , 1.8 Hz , 4-
H),4.00(3H , s , 9-OCH3), 3.88(1H , m , 3-H), 3.80
(1H , m , 4-OH), 1.59(3H , d , J =6.6 Hz , 1-CH3),
1.40(3H , d , J =6.6 Hz , 3-CH3)。 13 C-NMR(75
MHz ,CDCl3)δ:185.6(C-5),182.1(C-10), 159.2(C-
9),148.7(C-10a),138.2(C-4a), 134.6(C-7),133.5
(C-5a), 119.3(C-9a), 118.7(C-6), 117.9(C-8),
67.4(C-4),67.0(C-3),67.2(C-1), 56.3(9-OCH3),
19.0(1-CH3),18.5(3-CH3)。
159第 3期 徐金钟等:红葱抗稻瘟霉活性成分研究
化合物 7 棕色 针状 结晶 , mp 137.0 ～
138.0 ℃。UVλ(logε):220(4.5), 267(4.4), 425
(3.8)nm。 IR(KBr)σ:3395(OH), 1650(C O),
1581 , 1458 , 1388 , 1103 , 1049(C —O), 764 cm-1 。
1
H-NMR(300 MHz ,CDCl3)δ:12.78(1H , s , 5-OH),
8.94(1H , s , 10-OH),8.02(1H , dd , J =8.4 , 0.9 Hz ,
6-H),7.36(1H , t , J =8.4 Hz ,7-H), 6.99(1H , dd , J
=8.4 ,0.9 Hz ,8-H),5.47(1H ,q , J =6.6 Hz ,1-H),
4.68(1H , q , J =6.6 Hz , 3-H), 4.06(3H , s , 9-
OCH3),1.64(3H , d , J =6.6 Hz , 1-CH3), 1.53(3H ,
d , J =6.6 Hz , 3-CH3)。13 C-NMR(75 MHz , CDCl3)
δ:202.1(C-4), 155.1(C-9), 153.8(C-5), 138.9(C-
10), 125.5(C-5a), 124.9(C-7), 120.5(C-10a),
119.2(C-9a), 117.7(C-6), 108.7(C-8), 107.4(C-
4a),69.2(C-3),67.1(C-1),56.2(9-OCH3),17.3(1-
CH3),16.2(3-CH3)。经理化及波谱数据分析 ,并
与文献[ 7] 的氢谱数据对照 , 鉴定该化合物为
hongconin。
化合物 8 红色 针状 结晶 , mp 142.0 ～
143.0 ℃。IR(KBr)σ:1732 , 1628(C O), 1577 ,
1458 ,1269 , 1119 , 1053(C —O)cm-1 。UV(logε)λ:
230(4.2),255(4.0), 288(3.6), 443(3.7)nm 。EI-
MS m z:341[ M-1] - , 327[M -CH3 ] -(100%)。
1
H-NMR(400 MHz , CDCl3)δ:7.79(1H , d , J =7.8
Hz ,5-H), 7.63(1H , t , J =7.8 Hz , 6-H), 7.30(1H ,
d , J =7.8 Hz , 7-H), 4.07(3H , s , 15-OCH3), 3.96
(3H , s , 3-OCH3), 2.61(3H , s , 1-CH3)。 13 C-NMR
(150 MHz , CDCl3)δ:189.1(C-9), 189.0(C-10),
166.9(C-15), 162.6(C-8), 155.2(C-4), 150.2(C-
3), 137.5(C-1), 136.0(C-6), 132.4(C-11), 132.4
(C-2), 125.4(C-13), 125.4(C-7), 118.8(C-5),
118.0(C-14), 117.0(C-12), 61.6(3-OCH3), 52.8
(15-OCH3), 19.6(1-CH3)。通过理化性质及波谱
数据分析 ,并与文献[ 6]的碳谱 、氢谱数据对照 ,鉴
定该化合物为 4 ,8-二羟基-3-甲氧基-1-甲基-蒽醌-
2羧酸甲酯。
化合物9棕色针状结晶 ,mp 223 ～ 225 ℃。ESI-
MS给出 m z:257[M -1] -和 259[M+1] +(100%)
峰 ,表明该化合物的相对分子质量为 258。在COSY
谱上 ,信号 δ6.93(1H ,d , J =0.8 Hz)、δ6.53(1H ,d ,
J =2.0 Hz)和 δ2.63(3H ,d , J =0.8 Hz)均有相关
点 ,从偶合常数看 ,应为远程相关;δ6.53(1H ,d , J
=2.0 Hz)和 δ6.44(1H ,d , J =2.0 Hz)为 2个互
为间位的芳香质子;在 COSY 谱上 , 信号 δ2.82
(1H ,dd , J =12.0 ,16.8Hz)和 δ2.74(1H , dd , J =
4.0 ,16.8 Hz)相关 ,根据偶合常数确定为偕偶 ,而
且这两个质子所连碳原子为前手性碳;而 δ4.87
(1H ,m)与 δ2.82 、δ2.74及 δ1.66(3H ,d , J =6.4
Hz)均存在很明显的相关峰 ,据此可推断出该化
合物中存在 O—CH(CH3)—CH2 结构片段。从13
C-NMR谱可以看出 , δC 192.9为共轭酮羰基碳信
号;δC :162.8 、160.8 、157.8 、140.6 、122.9(2个碳)、
113.1 、107.8 、102.4 、102.2 为 10个 sp2 杂化碳信
号。结合 2D-NMR谱及文献[ 8] ,确定该化合物平
面结构为 dihydro-eleutherinol(8 , 10-二羟基-2 , 5-二
甲基-2 ,3-二氢苯并[ h] 色原-4-酮)。该化合物为
首次从本属植物中分离 ,而且其13C-NMR谱数据
归属未见文献报道。其1H-NMR(400 MHz , CDCl3)
δ:6.93(1H , d , J =0.8 Hz , 6-H),6.53(1H , d , J =
2.0 Hz , 7-H), 6.44(1H , d , J =2.0 Hz , 9-H), 4.87
(1H , m , 2-H), 2.82(1H , dd , J =12.0 , 16.8 Hz , 3-
H),2.74(1H ,dd , J =4.0 ,16.8 Hz , 3-H),2.63(3H ,
d , J =0.8 Hz , 5-CH3), 1.66(3H , d , J =6.4 Hz , 2-
CH3)。13C-NMR(100 MHz , CDCl3)δ:192.9(C-4),
162.8(C-11), 160.8(C-8), 157.8(C-10), 140.6(C-
6a),136.6(C-5), 122.9(C-6),113.1(C-4a), 107.8
(C-10a),102.4(C-7),102.2(C-9),76.8(C-2),45.5
(C-3),23.2(5-CH3),20.8(2-CH3)。
化合物 10黄色粉末 ,mp>300 ℃。UV(MeOH)
λ(logε):217(4.7), 284(4.7), 436(4.0)nm 。ESI-MS
m z:269[M-1] - ,结合碳谱和氢谱数据推测其分
子式为 C15H10O5 。 IR(KBr)σ:3336 , 1631 , 1573 ,
1480 ,1400 ,1230 ,1176 cm-1 。1H-NMR谱中 δ7.30
(1H ,d , J =2.4 Hz)和 δ6.48(1H , d , J =2.4 Hz)、
δ7.40(1H ,d , J =2.4 Hz)和 δ6.89(1H ,d , J =2.4
Hz)为两对互为间位偶合的芳香质子 , δ2.69(3H ,
s)是芳环上甲基质子信号 ,此甲基的化学位移值
与大黄素 emodin甲基的化学位移值(δ2.35)[ 10]
比较明显处于低场 ,推测该甲基为 α-甲基 。 13 C-
NMR谱中 , δC 189.7和 δC 184.3为两个羰基碳信
号 , δC 166.3 、δC 165.5和 δC 163.2是 3个连氧的
不饱和碳信号 , δC :146.7 、138.4 、136.0 、125.6 、
124.4 、113.3 、111.7 、109.3 、108.3是蒽醌骨架的其
余9 个不饱和碳信号 , δC :24.2 为甲基碳信号。
结合 2D-NMR(HMQC ,HMBC)谱 ,鉴定该化合物结
构为 1 ,3 ,6-三羟基-8-甲基蒽醌 ,该化合物首次从
160 中 国 药 物 化 学 杂 志 第 15 卷
该属植物中分离。 1H-NMR(300 MHz , CD3OD)δ:
7.30(1H , d , J =2.4 Hz , 4-H), 6.48(1H , d , J =
2.4 Hz ,2-H), 7.40(1H , d , J =2.4 Hz , 5-H), 6.89
(1H ,d , J =2.4 Hz ,7-H), 2.69(3H , s ,8-CH3)。13C-
NMR(75 MHz , CD3OD)δ:189.7(C-9), 184.3(C-
10),166.3(C-1), 165.5(C-3), 163.2(C-6), 146.7
(C-8), 138.4(C-11), 136.0(C-14), 125.6(C-7),
124.4(C-12), 113.3(C-5), 111.7(C-13), 109.3(C-
2),108.3(C-4),24.2(8-CH3)。
4　单体化合物的生物活性
单体抗稻瘟霉活性测试参见文献[ 6]报道的
方法。单体体外抑制肿瘤细胞生长的活性测试:
取对数生长期细胞K562(人体红白血病细胞株),
用新鲜的 RPMI-1640培养液稀释至每毫升 1×105
个 ,向 96微孔板中每孔注入 200 μL细胞液 ,于 37
℃、5%(φ)CO2 培养箱中培养 4 h。每孔加入样
品2μL ,每一种样品设 3个复孔 ,同时设空白对照
和溶剂对照 ,于 37 ℃、5%(φ)CO2 培养箱中培养
24 h 。取预冷的80%(w)三氯醋酸向96孔板中每
孔分注 50 μL ,于 4 ℃冰箱放置 1 h ,以固定细胞。
倒掉固定液 ,用去离子水冲洗 96孔板 5次 ,甩干 ,
空气干燥。取 Tris 液向 96 孔板中每孔分注
150 μL ,于微量振荡器上振荡 15 min ,用酶标仪在
520 nm 条件下读取 A值 ,计算药物对细胞增殖抑
制作用的半数抑制浓度 IC50值 ,有关数据见表 1。
Table 1　The bioactivities of the isolated constituents against the growth of Pyricularia oryzae and the proliferation of K562
Compd. Pyricularia oryzae bioassay
MMDC (μmo l·L-1)
Inhibition of K562 proliferation
IC50 (μmol·L-1)
Compd. Pyricularia oryzae bioassay
MMDC (μmo l·L-1)
Inhibition of K562 proliferation
IC50 (μmol·L-1)
1 - - 7 55 174
2 30 33 8 - -
3 30 49 9 60 154
5 170 266 10 150 -
6 130 35
　　MMDC:minimum morphological deformation concentration;“-” means the MMDC or IC50 more than 500 μmol·L-1
　　从表 1数据可见:化合物 2和 3在稻瘟霉和
K562两种活性测试体系中均表现出较强的生物
活性 ,而化合物 7和 9对稻瘟霉菌丝体的生长具
有较强的抑制活性 ,化合物6对 K562的增殖具有
较好的抑制活性 。
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161第 3期 徐金钟等:红葱抗稻瘟霉活性成分研究