全 文 ：华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(2):126 ～ 128 　　
图 3　改良木本植物 DNA提取法所得 DNA的 ISSR扩增结果
F ig 3　 ISSR resu lt o f the ex tracted genom ic DNA from the wooden
plantmed ium
2　讨论
文中所用的木本植物 DNA提取法 ,在原方法基
础上用 0.4mo l L- 1葡萄糖作为提取缓冲液 ,以维持
细胞核膜内外两侧渗透压的平衡 ,保持核膜的完整
性 。加入 3%PVP、3%β -巯基乙醇抑制酚类物质
的氧化;在细胞裂解液中使用 2%CTAB ,并对细胞
裂解液预保温处理 ,以提高细胞核膜的裂解率 ,增加
DNA产量。此法第一步沉淀细胞核 ,将其与保留在
上清液中的多糖与多酚类次生物质分开。第二步再
加入裂解剂使细胞核膜破裂 ,使 DNA得到释放 。这
种分两步提取的方法比其他 3种提取方法 ,更能从
根本上防止多糖 、多酚等杂质与 DNA接触 ,所得
DNA纯度 、产量均高 ,大大提高了 DNA的质量。可
满足川芎 RAPD、ISSR的 PCR扩增需要 。
在文献[ 2 ～ 5]基础上对 4种 DNA提取方法均有
不同程度的改进 ,方法 1、2、4分别加入了 2%PVP、
1.4% SDS(pH5.5)、0.4mo l L- 1葡萄糖溶液 。但只
有木本植物 DNA提取法取得了较为满意的结果。
试验证明 ,木本植物 DNA提取法适合川芎 DNA的
提取 。
参考文献:
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收稿日期:2006 - 06
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:30472075)
作者简介:梁晓霞(1982),女 ,四川西昌 ,正攻读药物化学专业的硕士学位。
*通讯作者(Correspondent author)
毛苞瓜叶乌头生物碱成分的研究
梁晓霞 , 宋　磊 , 陈东林* , 王锋鹏
(四川大学华西药学院 , 四川 成都 610041)
摘要:目的　研究毛苞瓜叶乌头根中的生物碱化学成分。方法　酸提碱沉提取总碱 , 硅胶层析法分离 , 波谱法鉴定结构。结
果　分离到 6个已知的去用二萜生物碱 ,分别为滇乌碱 (yunaconitine)、塔拉萨敏( talasam ine)、瓜乌定 (hem sleyad ine)、拳乌宁
乙 (circ inan ine B)、黄草乌碱丁 ( schaconitine)和 senbusine A。结论　应用光谱法和与已知物 TLC对照的方法鉴定了所有化
合物的结构。
关键词:毛苞瓜叶乌头;二萜生物碱;酸提碱沉法;硅胶层析法;波谱法
中图分类号:R284.2　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)02 - 0126 -03
The alkaloids ofAconitum hemsleyanum Pritz. Var. hirtibractea tum
LIANG X iao - x ia, SONG Le i, CHEN Dong - lin* , WANG Feng - peng
(West China S chool of Pharmacy, S ichuan University, Chengdu 610041, China)
Abstrac t:OBJECTIVE　To investigate the chem ica l components o f the p lantAconitum hem sleyanum P ritz. Var. hirtibracteatum W.
J. Zhang e.t G. H. Chen, var noe. nom en. METHODS　Acid ic distilla tion and chrom atography on the silica ge l w ere used to ex trac t
and iso la te the to ta l a lkaloids. RESULTS　S ix known C19 -d iterpeno id a lka lo ids:yunaconitine (1), ta lasam ine (2), hem sleyadine
DOI牶牨牥牣牨牫牫牱牭牤j牣cnki牣wcjps牣牪牥牥牱牣牥牪牣牥牥牫
(3), circinanine B(4), schaconitine(5) and senbusine A (6) we re obtained. CONCLU SION　Their structure sw ere identified by
spec tra l da ta and compared w ith the au then tic samp le s.
K ey words:A. hem sleyanum P ritz. Var. h irtibractea tum;Dite rpeno id alka lo ids;Acidic distilla tion;Co lum n chrom atography;Spec-
tra l analysis
CLC num ber:R284. 2　 D ocum ent code:A Article ID:1006 -0103(2007)02 - 0126 - 03
　　毛苞瓜叶乌头 A. hem sleyanum Pritz. V ar. h irti-
bractea tum W. J. Zhang e .t G. H. Chem , var noe.
nomen. 属毛茛科 Ranunculaceae乌头属 Acon itum植
物瓜叶乌头 A. hemsleyanium 的变种 ,分布于四川 、
云南 、贵州[ 1] , 其化学成分未见报道。我们对该植
物根部的生物碱成分进行了较详细的研究 ,从中分
离得到 6个已知的去甲二萜生物碱 (图 1)。
1 2 3 4 5 6
图 1　分离所得去甲二萜生物碱
F ig 1　Known nordierpeno id a lkaloids from hem sleyanum bractea tum
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂
核磁共振谱用 B rukerAC -E 200和 Varian Uni-
ty INOVA 400 /54核磁共振仪测定 (溶剂为 CDC l3 ,
TM S为内标)。硅胶 G和 H (青岛海洋化工厂 );层
析所用溶剂为分析纯;毛苞瓜叶乌头 (1999年 9月
采自四川省汉源县万里乡 )由四川彭州市药检所张
文锦副研究员鉴定为 A. hemsleyanum Pritz. Var.
hirtibractea tum 。
1. 2　提取与分离
毛苞瓜叶乌头根部粗粉 3.3 kg,以约 25 L 0.05
mo l L- 1盐酸浸泡过夜后渗滤至无生物碱反应 ,加氨
水碱化至 pH >10, 加约 30 L乙酸乙酯分次萃取至
水层无生物碱反应 ,合并上清液减压浓缩得 120 g
总碱。总生物碱经硅胶柱层析 (100 ～ 200目 , 1 kg
粗硅胶 ), 环己烷 -丙酮 (5：1 ～ 2：1)梯度洗脱 ,
洗脱液合并 ,减压浓缩得 24 g A、48 g B、40 g C。 A
部分经反复硅胶柱层析得 150 mg化合物 1、200 mg
化合物 2、1.02 g化合物 3、50mg化合物 4、30mg化
合物 5、60 mg化合物 6。
1. 3　结构鉴定
1. 3. 1　化合物 1　白色无定型粉末 ,分子式为
C35H49NO 11 , 1HNMR (200MHz, CDC l3):δ1.09 (3H ,
t, J =7.0 Hz, NCH2CH 3), 1.30 (3H , s, OCOCH3),
3.14, 3.24, 3.28, 3.52 (各 3H , s, 4 ×OCH 3), 3.85
(3H , s, A r -OCH3), 4.02 (1H , d, J =6.0 Hz, H -
6β ), 4.85 (1H , d, J =5.0Hz, H - 14β ), 6.90 ～ 7.99
(4H , AA′BB′, J =9.0 H z, A r -H )。氢谱数据与文
献[ 2]报道一致。与滇乌碱标准品 TLC对照 [ (S1:氯
仿 -甲醇 (95：5)、S2:石油醚 -丙酮 (1：1)、S3:乙
醚 -丙酮 (9：1)] , R f值相同 ,鉴定为滇乌碱 (yu-
naconitine)。
1. 3. 2　化合物 2　白色无定型粉末 , 分子式为
C24H39NO5 , 1HNMR (200MHz, CDC l3):δ1.06 (3H ,
t, J =7.2H z, NCH2CH3), 3.27, 3.30, 3.35 (各 3H ,
s, 3×OCH3 ), 3.63 (1H , s, 加 D2O后消失 , OH ),
4.13 (1H , t, J =4.8H z, H -14β ),以上氢谱数据与
文献 [ 3] 报道一致。与塔拉萨敏标准品 TLC对照
[ (S1:氯仿 -甲醇 (95：5);S2:石油醚 -丙酮 (2：
1);S3:乙醚 -丙酮(9：1)] , Rf值相同 ,鉴定为塔拉
萨敏 ( talasam ine)。
1. 3. 3　化合物 3　白色无定型粉末 , 分子式为
C32H45NO9 , 1HNMR (200MHz, CDC l3):δ0.92 (3H ,
t, J =7.2H z, NCH2CH3), 3.12, 3.20, 3.17 (各 3H ,
s, 3×OCH3), 3.68 (3H , s, A r - OCH3), 5.03 (1H ,
d, J =4.8 Hz, H - 14β ), 6.78 , 7.80 (各 2H , d, A r -
H)。 13 CNMR (50MHz, CDC l3):δ83.4 (d, 1), 26.1
( t, 2), 27.9 ( t, 3), 40.8 (s, 4), 83.7 (s, 5), 34.8
( t, 6), 45.4 (d, 7), 73.4 (s, 8), 46.9 (d, 9), 36.3
(d, 10), 50.2 (s, 11), 35.7 ( t, 12), 76.3 (s, 13),
80.3 (d , 14), 41.0 (t, 15), 83.5 (d, 16), 63.2 (d,
17), 78.4 ( t, 18), 55.0 ( t, 19), 48.5 ( t, 21), 13.2
(q, 22), 56.0 (q, 1 -OCH3), 57.9 (q, 16 -OCH3),
59.1 (q, 18 -OCH 3), 166.8 (s, OCOA r), 122.3 (s,
1′), 131.3 (d, 2′), 113.2 (d, 3′), 162.9 (s, 4′),
113.2 (d, 5′), 131.3 (d, 6′), 54.9 (q, 4 -OCH3)。
氢 、碳谱数据与文献[ 4] 基本一致 , 鉴定为瓜乌定
127第 2期 梁晓霞 , 等。毛苞瓜叶乌头生物碱成分的研究 　　　
(hem sleyad ine)。
1. 3. 4　化合物 4　白色无定型粉末 ,分子式为
C24H39NO 7 , 1HNMR (400MHz, CDC l3)δ:0.98 (3H ,
t, J =7.2 Hz, NCH2CH3), 3.18, 3.27, 3.27 (各 3H ,
s, 3×OCH3), 4.05 (1H , d, J =4.8 Hz, H - 14β )。
13
CNMR(100MH z, CDC l3):δ84.8 (d, 1), 25.7 ( t,
2), 28.2 ( t, 3), 41.0 (s, 4), 84.3 (s, 5), 34.4 ( t,
6), 44.5 (d , 7), 73.2 (s, 8), 49.0 (d, 9), 36.3 (d,
10), 50.3 (s, 11), 35.7 ( t, 12), 77.0 (s, 13), 79.4
(d, 14), 39.8 ( t, 15), 83.5 (d, 16), 63.0 (d, 17),
78.3 ( t, 18), 55.1 ( t, 19), 49.0 ( t, 21), 13.3 (q,
22), 57.7 (q, 1 - OCH3 ), 56.4 (q, 16 - OCH3),
59.4 (q, 18 -OCH3)。氢 、碳谱数据与文献 [ 5] 基本
一致 ,鉴定为拳乌宁乙 (c ircinanine B)。
1. 3. 5　化合物 5　白色无定型粉末 ,分子式为
C23H37NO 4 , 1HNMR (50 MH z, CDC l3):δ0.77 (3H ,
s, H - 18), 1.05 (3H , t, J =7.2 Hz, NCH2CH3),
3.26, 3.34 (各 3H , s, 2×OCH3), 4.13 (1H , q, J =
4.8 H z, H - 14β ), 4.79 (1H , d, J =4.4 H z, 14 -
OH)。以上氢谱数据与文献[ 6]报道一致。与黄草
乌碱丁标准品 TLC对照 [ (S1:氯仿 -甲醇 (95：5)、
S2:石油醚 -丙酮 (10：1)、S3:乙醚 -丙酮 (3：
1)] , Rf值一致 ,鉴定为黄草乌碱丁 (schacon itine)。
1. 3. 6　化合物 6　白色无定型粉末 ,分子式为
C23H37NO 6 , 1HNMR (200MH z, CDC l3):δ1.08 (3H ,
t, J =7.2 H z, NCH2CH3), 3.32 (6H , s, 2 ×OCH3),
4.19 (1H , d, J =4.8H z, H - 14β), 4.75 (1H , d , J =
6.6Hz, H - 6β )。 13CNMR (50MH z, CDC l3)δ:72.3
(d, 1), 29.3 ( t, 2), 29.9 ( t, 3), 37.8 (s, 4), 48.3
(s, 5), 72.5 ( t, 6), 55.6 (d, 7), 76.4 (s, 8), 45.6
(d, 9), 40.3 (d, 10), 49.8 (s, 11), 29.7 ( t, 12),
44.6 (s, 13), 75.8 (d, 14), 42.6 ( t, 15), 82.1 (d,
16), 63.4 (d, 17), 80.1 ( t, 18), 56.8 ( t, 19), 48.6
( t, 21), 13.3 (q, 22), 56.7 (q, 16 -OCH3 ), 59.6
(q, 18 -OCH3)。以上氢 、碳谱数据与文献 [ 7] 基本
一致 ,鉴定为 senbusine A。
2　讨论
从毛苞瓜叶乌头中首次分离得到 6个已知的乌
头碱型 C19 -二萜生物碱。瓜叶乌头是国产乌头属
植物中分布较广 、极为多型的一个种 ,因其重要的分
布特征 ,如花梗的毛被 、上萼片的形状 、花瓣的形状
多变 ,雄蕊 、花瓣 、心皮等的毛被变化难于把握 ,近年
来屡有新变种发表 ,其数目已达十余个 。通过对植
物中生物碱成分的研究 ,发现毛苞瓜叶乌头中的 C19
-二萜生物碱与拳距瓜叶乌头 A. hemsleyanum var.
circinacum中的生物碱主成分 [ 8]基本相同 ,可从植物
化学分类学的角度支持两个变种合并。
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收稿日期:2006 - 02
第六届全国药物流行病学学术会议征文通知
　　第六届全国药物流行病学学术会议定于 2007年 7月 5 ～ 7日在浙江温州市召开。主题为 “加强上市药品评价 ,促进
临床合理用药”。会议论文经审后将在《药物流行病学杂志》正刊或增刊上公开发表。参会者可获得中国药学会授予的
继续教育一类学分。会议征文内容:1.国家药物政策与药品管理 、监督管理措施;2.上市后药品的有效性和安全性再评
价研究(特别是防治心脑血管病和癫痫药物上市后的临床评价);3. 药物不良反应监测与药源性疾病研究;4. 上市后药
品的风险管理;5.临床合理用药与用药决策研究;6. 临床药物治疗指南 、专家共识与循证医学;7. 新药开发和新药临床试
验;8.药物流行病学研究方法拓展;9. 中药上市前及上市后的管理与评价;10. 与上市药品评价和临床合理用药相关的其
他内容。稿件格式请参照《药物流行病学杂志》投稿须知。详情请登录网站 www. cnjpe. org查询。
128 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 22卷