全 文 ：收稿日期:2015-12-23
基金项目:云南省科技厅面上项目(2013FB059)
作者简介:刘江(1991-)，男，硕士，研究方向:药用植物的药效学研究;Tel:15087288132，E-mail:1104556022@ qq. com。
* 通讯作者:夏从龙，E-mail:long7484@ 126. com。
花叶重楼的生药学研究
刘 江，段志刚，段宝忠，夏从龙*
(大理大学药学与化学学院，云南 大理 671000)
摘要 目的:对重楼药材原植物花叶重楼进行系统的生药学研究。方法:采用原植物形态、性状、显微及理化
鉴定，并用 HPLC测定其主要活性成分的含量，可见分光光度法测定其总皂苷的含量。结果:详细描述了花叶重楼
的形态特征、根茎横切面组织构造及其粉末特征。含量测定结果表明，各重楼皂苷的进样量与峰面积线性关系良
好。结论:通过对花叶重楼进行原植物、根茎横切面、粉末和理化鉴别，可为花叶重楼的鉴定及进一步研究提供科
学依据。
关键词 花叶重楼;性状鉴别;显微鉴别;理化鉴别
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)07-1503-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 07. 014
花叶重楼 Paris marmorata Stearn为百合科重楼
属植物，分布于不丹、尼泊尔和我国西藏南部，在云
南主要分布于漾濞(苍山西坡)〔1，2〕。以根茎入药，
为云南习用药材，有清热解毒、平喘止咳、消炎止疼
等功效，常用于毒蛇咬伤、无名肿痛、跌打伤痛、外伤
出血等的治疗〔3-5〕。现阶段花叶重楼的研究主要集
中于人工种植及化学成分等方面〔6〕，尚未见关于花
叶重楼药材鉴定的研究，基于上述因素，本实验采取
原植物、性状、显微及理化鉴定方法，对花叶重楼进
行了系统的生药学研究，并对其总皂苷和主要活性
成分进行含量分析，旨在为花叶重楼药材的鉴定和
进一步开发利用提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1290 高效液相色谱仪(美国安
捷伦公司);TS-12H 生物组织自动脱水机(上海隆
拓仪器设备有限公司);BM-Ⅵ生物组织冷冻包埋机
(北京佳源兴业科技有限公司);QP-Ⅲ型生物组织
切片机(武汉宏强医疗器械有限公司);CS-Ⅳ型摊
片烤片机(孝感市电子仪器厂);Nikon E-400 显微
镜一套(日本尼康公司);T6 新世纪紫外可见分光光
度计(北京普析通用仪器有限责任公司);SB25-120
型超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公
司)。
1. 2 材料 实验样品共 3 批，于 2014 年 8 月采自
云南大理苍山自然保护区西坡(批号:20140805、
20140816、20140825)，经笔者夏从龙教授鉴定为百
合科重楼属植物花叶重楼 Paris marmorata Stearn 的
根茎。
重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品(贵州迪大生物
科技有限责任公司，批号分别为:GZDD-0605、
GZDD-0606、GZDD-0608、GZDD-0609，质量分数≥
98%);薯蓣皂苷元对照品(中国食品药品检定研究
院，批号:111539-200001，质量分数≥98%)。流动
相用乙腈、甲醇均为 HPLC级色谱纯;其余试剂为分
析纯，水为超纯水。
2 方法
2. 1 鉴别 植物基原鉴别为标本，采用形态鉴别
法;性状鉴别为自然干燥的根茎;显微鉴别部分取花
叶重楼根茎制作石蜡切片，在显微镜下观察组织特
征;粉末特征为自然干燥根茎粉碎后过 80 目筛的粉
末，显微镜下观察组织特征。
2. 2 HPLC测定含量
2. 2. 1 色谱条件及系统适用性:基于 2015 年版中
国药典方法〔7〕进行适当调整，色谱柱为 Agilent C18
柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);检测波长:203 nm;柱
温:25 ℃;流动相:乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0 ～
14 min，30% ～ 40% A;14 ～ 40 min，40% A;40 ～ 70
min，40% ～ 60% A);流速:0. 9 mL /min;进样量:5
μL。理论板数按重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ计算均不低
于10 000，见图 1。
2. 2. 2 对照品溶液的制备:精密称取一定量的重
楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品，溶于甲醇，配制成浓度
分别为 0. 64、0. 46、0. 26、0. 23 mg /mL 的对照品溶
液，按 1∶ 1∶ 1∶ 1 混合，过滤，备用。
2. 2. 3 供试品溶液的制备:精密称取花叶重楼粉
末(过 40 目筛)0. 5 g，加甲醇 5 mL，浸泡过夜后，初
始温度 40 ℃超声(500 W，40 kHz)20 min，过滤，取
滤液，重复提取 2 次，合并滤液，过滤，备用。
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图 1 混合对照品(A)与花叶重楼样品(B)的 HPLC图
1. 重楼皂苷Ⅵ 2. 重楼皂苷Ⅶ 3. 重楼皂苷Ⅱ 4. 重楼
皂苷Ⅰ
2. 2. 4 线性关系考察:分别精密吸取混合对照品
溶液 1、2、5、10、15、20 μL 注入高效液相色谱仪，记
录色谱图，测定峰面积。以进样量(X，μg)为横坐
标，峰面积 Y 为纵坐标，进行线性回归。重楼皂苷
Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的回归方程分别为:YⅠ = 366. 44XⅠ +
3. 07，rⅠ = 0. 9999;YⅡ = 377. 60XⅡ + 2. 42，rⅡ =
0. 9999;YⅥ = 340. 35XⅥ + 1. 63，rⅥ = 0. 9999;YⅦ =
344. 22XⅦ + 0. 37，rⅦ = 0. 9999。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、
Ⅵ、Ⅶ进样量分别在 0. 64 ～ 12. 8 μg、0. 46 ～ 9. 2 μg、
0. 26 ～ 5. 2 μg、0. 23 ～ 4. 6 μg 范围内与峰面积线性
关系良好。
2. 2. 5 精密度试验:精密吸取混合对照品溶液 5
μL，按“2. 2. 1”项下色谱条件连续进样 6 次。重楼
皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ峰面积的 ＲSD 分别为 2. 38%、
2. 06%、2. 17%、2. 10%，结果表明仪器精密度良好。
2. 2. 6 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0、
2、4、6、8、12、24 h 进样测定峰面积。重楼皂苷Ⅰ、
Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ峰面积的 ＲSD 分别为 2. 02%、2. 71%、
2. 72%、2. 98%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 2. 7 重复性试验:取同一批号的样品 6 份，按
“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 2. 1”项色
谱条件测定，测得重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。结
果含量的 ＲSD 分别为 0. 54%、2. 15%、1. 91%、
2. 78%，表明方法重复性良好。
2. 2. 8 加样回收率试验:精密称定已知含量的同
一批号的花叶重楼样品 6 份，添加各重楼皂苷对照
品适量，按“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按
“2. 2. 1”项下色谱条件测定并计算重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、
Ⅵ、Ⅶ 的平均加样回收率，分别为 101. 04%、
101. 73%、98. 69%、101. 17%;ＲSD 分别为 1. 33%、
2. 34%、1. 64%、2. 17%。
2. 3 总皂苷测定〔8-11〕
2. 3. 1 对照品溶液的制备:精密称定薯蓣皂苷元
对照品，溶于甲醇配制成质量浓度为 0. 205 mg /mL
的对照品溶液。
2. 3. 2 供试品溶液的制备:同“2. 2. 3”项下供试品
溶液。
2. 3. 3 线性关系考察:精密吸取对照品溶液 0. 2、
0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7 mL，置具塞试管内，水浴挥干
溶剂，精密加入高氯酸 5 mL，密闭，60 ℃恒温水浴中
加热 15 min，取出冰浴冷却至室温;同时精密吸取
0. 4 mL甲醇溶液按同样的方法处理作为空白溶液，
迅速在 408 nm波长处测定吸光度。以总皂苷质量
(X，mg)为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，进行线性回
归，薯蓣皂苷元的回归方程为:A = 7. 6808X －
0. 1221，r = 0. 9997。结果表明薯蓣皂苷元质量在
0. 0205 ～ 0. 1435 mg 范围内与吸光度线性关系良
好。
2. 3. 4 精密度试验:精密吸取对照品溶液 0. 4 mL，
按“2. 3. 3”项下显色条件测定 6 次，吸光度的 ＲSD
为 0. 11%。结果表明仪器精密度良好。
2. 3. 5 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0、
4、8、16、24 h 按“2. 3. 3”项下显色条件测定。吸光
度的 ＲSD为 1. 52%。结果表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2. 3. 6 重复性试验:取同一批号的花叶重楼样品 6
份，按“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按
“2. 3. 3”项下显色条件测定，测得总皂苷的含量，其
含量的 ＲSD为 0. 76%。结果表明该方法重复性良
好。
2. 3. 7 加样回收率试验:精密称定已知含量的同
一批号的样品 6 份，添加薯蓣皂苷元对照品适量，按
“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 3. 3”项下
显色条件测定，总皂苷的平均加样回收率为
100. 50%;ＲSD为 2. 58%。
3 结果
3. 1 原植物鉴别 多年生草本。茎高 4 ～ 21 cm，
白色或上部淡紫色;叶 4 ～ 6 枚，狭椭圆形或狭披针
形，叶脉沿脉带苍白色，背面绿色，边缘变淡紫或紫
色，无毛，边缘不整齐或呈波齿状。花基数 3 ～ 4，雄
蕊 2 轮。萼片绿色，狭卵状披针形;花瓣狭丝状，淡
绿色，上部紫色，比花萼短;子房绿色，近球形，具 3
～4 棱，1 室，具 3 ～ 4 个侧膜胎座，花柱基紫色，具 3
～ 4 角，下凹，花柱圆锥形，紫色，柱头 3 ～ 4，紫色，
短。果成熟时仍为绿色，不规则的球形，无棱，有凹
槽。种子少数，2 ～ 4 枚，近球形，外种皮橙红色，多
汁〔2〕。见图 2。
3. 2 性状鉴别 根状茎短，长 0. 5 ～ 3. 5 cm，粗 0. 3
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～ 1. 0 cm，药材表面灰棕色，分布有突起的层状环
纹，多环节，结节上可见凹陷的茎痕及须根，结节状
扁圆柱形。根茎稍弯曲，顶端残留有茎基和鳞叶。
质地较硬，断面较整齐，呈浅棕黄色或白色。气微，
味微苦、麻。见图 3。
图 2 花叶重楼原植物图
图 3 花叶重楼药材图
3. 3 根茎横切面鉴别 表皮细胞 1 列，类长方形
或类方形，外壁较平直，或稍向外凸出，排列紧密。
皮层较中柱宽，细胞类圆形或不规则形，细胞中充满
淀粉粒，少数细胞中可见草酸钙针晶束，皮层中可见
根迹维管束和叶迹维管束。内皮层 1 列，细胞小。
维管束为周木型维管束，呈散状排列，木质部细胞
大，内分布有导管，呈断续或连续环列于韧皮部的四
周，韧皮部细胞小，排列紧密。见图 4、5。
3. 4 根茎粉末鉴别 浅黄色。淀粉粒众多，多为
单粒，呈类圆形、椭圆形或不规则形，脐点为点状、一
字形、人字形或星状，直径约为 5. 88 ～ 23. 81 μm;少
为复粒，常由 2 ～ 3 个分粒组成;草酸钙针晶多呈束
状存在，少数散在，长 38. 22 ～ 93. 13 μm，宽为 20. 58
～ 34. 35 μm。薄壁细胞类长圆形或不规则形，内富
含淀粉粒。可见螺纹、梯纹导管，螺纹导管直径约为
7. 62 ～ 20. 65 μm，梯纹导管直径约为 8. 51 ～ 35. 28
μm。见图 6。
3. 5 理化鉴别 取“2. 2. 3”项下供试品溶液，按
“2. 2. 1”项下色谱条件进行测定，样品在该色谱条
件下，能明显分离出 3 个稳定的色谱峰，可作为花叶
图 4 花叶重楼根茎横切面简图(×40)
1. 表皮 2. 叶迹维管束 3. 皮层 4. 根迹维管束 5. 内
皮层 6. 木质部 7. 韧皮部 8. 草酸钙针晶
图 5 花叶重楼根茎横切面详图(×40)
1. 表皮 2. 皮层 3. 叶迹维管束 4. 草酸钙针晶 5. 根
迹维管束 6. 内皮层 7. 韧皮部 8. 木质部 9. 周木型
维管束
图 6 花叶重楼根茎粉末图(×400)
1. 螺纹导管 2. 梯纹导管 3. 淀粉粒 4. 薄壁细胞 5.
草酸钙针晶
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重楼的定性参考，重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ的平均保留时
间分别为 51. 774、49. 704、18. 808 min。
3. 6 HPLC测定结果 样品按“2. 2. 3”项下方法制
备供试品溶液，测定峰面积，外标标准曲线法计算含
量，测得花叶重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ的含量见表
1，未检出重楼皂苷Ⅶ。
表 1 花叶重楼中重楼皂苷含量(%)
批号 重楼皂苷Ⅰ 重楼皂苷Ⅱ 重楼皂苷Ⅵ
20140805 0. 23 0. 19 1. 15
20140816 0. 25 0. 21 1. 18
20140825 0. 21 0. 18 1. 16
3. 7 总皂苷测定结果 样品按“2. 2. 3”项下供试
品溶液制备方法和显色条件测定吸光度，外标标准
曲线法计算含量，测得 3 批花叶重楼(批号:
20140805、20140816、20140825)中总皂苷的含量分
别为:2. 60、2. 92、2. 43 mg /g。
4 结论
花叶重楼原植物茎白色或上部淡紫色，叶脉沿
脉带苍白色，背面绿色，边缘变淡紫或紫色，花瓣狭
丝状，上部紫色，比花萼短;子房绿色，花柱基紫色，
具 3 ～ 4 角，下凹，花柱圆锥形，紫色，柱头 3 ～ 4，紫
色，短。根茎薄壁细胞中针晶束明显，中柱维管束周
木型，呈环状排列。粉末淀粉粒众多，多为单粒，少
为复粒，草酸钙针晶多呈束状存在，少数散在，可见
螺纹、梯纹导管，可作为分类鉴别的依据。本实验采
用 HPLC对花叶重楼的主要活性成分进行含量分
析，采用紫外分光光度法对总皂苷进行含量分析。
从测定结果看，重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ的总含量平均值
为 1. 59%，远高于 2015 年版中国药典规定的
0. 6%，总皂苷含量平均值为 2. 65 mg /g，但未检出
重楼皂苷Ⅶ，可能与生长年限较短或本身该成分含
量很低有关。HPLC 的色谱条件在 2015 年版中国
药典的基础上进行改进，分离度更好，简单易行，可
作为花叶重楼定性、定量分析方法，也可为扩大重楼
属药用植物资源提供科学依据。
参 考 文 献
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