全 文 ：中药新药与临床药理 2010年 7月第 21卷第 4期
收稿日期：2010-03-05
作者简介：王美微（1986-），女，研究方向：神经保护。通讯作者：李铭源，教授；研究方向：心血管药理，神经保护，抗病毒，转录组和蛋白
质组学。Email：SimonLee@umac.mo。
基金项目：澳门科技发展基金资助项目（045/2007/A3）；澳门大学研究委员会资助项目（RG. UL017/09-Y1）。
谷精草为谷精草科植物谷精草（Eriocaulon buerge－
rianum Koern.）的干燥带花茎的头状花序。性味辛、
甘、平。归肝、肺经。有疏散风热、明目退翳之功
效，用于治疗风热目赤、肿痛羞明、眼生翳膜、风热
谷精草提取物对6- OHDA所致PC12细胞及斑马鱼神经损伤模型的保护作用
王美微1，张在军1，林志秀2，李铭源1（1. 澳门大学中华医药研究院，澳门 999078，中国；2.香港中文大学中医
学院，香港 999077，中国）
摘要：目的 探讨谷精草乙醇提取物（Eriocaulon buergerianum extract，EBE）对6-羟基多巴胺（6-hydroxy－
dopamine，6-OHDA） 在PC12细胞和斑马鱼上引起的神经损伤的保护作用及其机制。方法 采用4-甲基偶氮唑
蓝比色法（MTT法）和乳酸脱氢酶释放法（LDH法）检测PC12细胞的活力；Hoechst 33324荧光染色观察细胞核形态
的改变分析细胞凋亡；DAF-FM diacetate荧光染色检测细胞内一氧化氮（NO）的含量；采用免疫印迹法检测诱导
型一氧化氮合酶（iNOS蛋白）的表达水平。免疫染色方法观察斑马鱼脑部多巴胺神经元的变化。结果 EBE能够
剂量依赖性的提高6-OHDA损伤的PC12细胞的存活率，减少6-OHDA引起的PC12细胞凋亡。免疫染色的结果表
明EBE可以抑制6-OHDA在斑马鱼上所引起的多巴胺神经元的减少。作用机理研究证明EBE能够降低6-OHDA刺
激的PC12细胞内NO含量增加。免疫印记杂交的结果显示EBE能够降低iNOS的表达。结论 EBE对6-OHDA诱导
的PC12细胞损伤具有保护作用，能减少6-OHDA引起的细胞凋亡，并且可以抑制6-OHDA在斑马鱼上引起的多
巴胺神经元减少，其作用机制可能与降低NO的产生和iNOS的表达量有关。
关键词：谷精草提取物；PC12细胞；斑马鱼；6-羟基多巴胺（6-OHDA）；一氧化氮；诱导型一氧化氮合酶（iNOS）
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0341-06
Effect of Eriocaulon buergerianum Extract on Protecting PC12 cells and Zebrafish from 6-hydroxydopamine-
induced Neuronal Cell Damage
WANG Meiwei1，ZHANG Zaijun1，LIN Zhixiu2，LEE Mingyuen Simon1 （1. Institute of Chinese Medical Sciences，
University of Macau，Macao SAR 999078，China; 2. School of Chinese Medicine，The Chinese University of Hong
Kong，Hong Kong SAR 999077，China）
Abstract: Objective To investigate the protective effect of Eriocaulon buergerianum ethanol extract（EBE）against 6-
hydroxydopamine （6-OHDA）-induced damage in PC12 cells and zebrafish，and to explore the underlying mecha－
nism. Methods The viability and cellular damage of PC12 cells were detected by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT）
assay and lactate dehydrogenase（LDH）assay，respectively. Nuclear morphological changes in apoptotic cells were e－
valuated by DNA staining with Hoechst 33342 dye. Intracellular nitric oxide（NO）was quantified by DAF-FM diacetate
fluorescence staining. The expression of inducible nitric oxide synthase（iNOS）was determined by western blotting. Im－
munostaining method was used to observe changes of dopaminergic neurons in zebrafish brain. Results EBE in－
creased the viability of 6-OHDA-induced PC12 cells damage in a dose-dependent manner，and reduced 6-OHDA-
induced PC12 cells apoptosis. In addition，EBE inhibited 6-OHDA-induced dopaminergic neuron loss in zebrafish.
Results of therapeutic mechanism showed that EBE suppressed the increase of both NO production and iNOS expres－
sion induced by 6-OHDA in PC12 cells. Conclusions EBE exerts neuroprotective effects by inhibiting the 6-OHDA-
induced apoptosis in PC12 cells. Moreover，EBE exhibits obviously neuroprotective activity against 6-OHDA stimu－
lated dopaminergic（DA）neuron loss in zebrafish. The underlying mechanism maybe relation to suppressing NO pro－
duction and down - regulating iNOS expression.
Keywords: Eriocaulon buergerianum extract; PC12 cells; Zebrafish; 6 - hydroxydopamine; NO; iNOS
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头痛等症。《本草纲目》中记载：谷精体轻性浮，能
上行阳明分野，凡治目中诸病，加而用之，甚良，明
目退翳之功，似在菊花之上也。一直以来谷精草都被
用作眼科用药，临床用谷精草治肝火上逆导致的头目
发热、牙痛、鼻渊、夜盲症、青光眼、效果显著 [1]。
谷精草全草中含有生物碱、酚性成分、有机酸、黄
酮及其苷类、挥发油、植物甾醇、蒽醌、鞣质等成
分 [2-3]。其中谷精草挥发油中主要成分为软脂酸，其
次为（z，z）-9，12-十八烷二烯酸[4]，黄酮类成分主
要有槲皮万寿菊素、粗毛豚草素、万寿菊素、槲皮
素及其衍生物等[5]。目前对于谷精草的研究尚处于起
步阶段，其化学成分、药理作用还不是很清楚。
帕金森病（Parkinsons disease）是一种以黑质纹状
体通路的退变为主要特征的神经系统变性疾病。其基
本病理特征是黑质致密区多巴胺（DA）神经元变性伴
胞浆内嗜酸性包涵体即Lewy小体形成。该病典型临
床症状为静止震颤、肌肉僵直、运动迟缓和姿势反射
受损[6]。目前PD的发病机制尚未明确，已有研究表
明与遗传、环境因素、感染、衰老、氧化应激、过多
的自由基形成及神经生长因子缺乏等有关，是多种机
制协同作用的结果[7]。6-羟基多巴胺（6-OHDA）是多
巴胺的一种羟化类似物，普遍用于在体内和体外模拟
PD病理模型。其神经毒性的机制：产生自由基，引
起细胞的炎症反应和凋亡过程[8]。本研究以6-OHDA
损伤的PC12细胞和斑马鱼为模型，探讨EBE对损伤神
经元的保护作用及其作用机制。
1 材料和方法
1.1 药物和试剂
1.1.1 试验药物及提取方法 本试验所用之谷精草药
材购自香港致信中药材公司，经对照香港中文大学中
医学院标本室的标准品，鉴定其为正品药材。先将谷
精草原药材于电动粉碎机中打粉，然后准确秤取100
g药粉，用80 %乙醇回流提取2 h，过滤提取液并用旋
转蒸发仪回收乙醇，所剩之少量水分则经吹风干燥，
即得谷精草提取物，秤重（10.8 g）并置于-20 ℃冰箱
中待用。
1.1.2 试剂 F-12K培养基，加热灭活的马血清、胎
牛血清、青霉素 -链霉素购买于Gibco Invitrogen
（Carlsbad，CA，USA）；噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜
（DMSO）、亚硝酸左旋精氨酸甲酯（L-NAME，一氧化
氮合酶抑制剂）均购自Sigma公司；二硝基五氰络铁酸
钠二水化合物（sodium nitroprusside dihydrate，SNP）
购于Fluka公司；细胞毒性检测试剂盒购买于德国
Roche Appl ied Science公司；荧光染料4-amino-5-
methylamino -2’， 7’ -difluorofluorescein diacetate
（DAF-FM diacetate）和Hoechst 33342购买于Molecular
Probes公司；RIPA蛋白裂解液，蛋白酶抑制剂，BCA
蛋白定量试剂盒购买于Pierce Biotechnology公司；聚
双氟乙烯（PVDF）膜购买于Bio-Rad，Hercules，CA，
USA. 抗 iNOS和 β -actin的抗体及辣根过氧化酶
（HRP） 标记的抗兔 IgG二抗均购买于Cell Signaling
Technology （Beverly，MA）；抗酪氨酸羟化酶抗体购
买于Millipore公司；Vectastain ABC试剂盒购买于
Vector Laboratories。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 PC12 细胞是大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞
株，购于美国ATCC公司，生长于F-12K细胞培养液
中，加入2.5 %胎牛血清、15 %马血清、1 %青霉素-
链霉素。培养细胞置于37 ℃、5 % CO2培养箱中，隔
天更换培养液，待细胞长满汇合后，用0.25 %胰蛋白
酶消化约 3 min，传代培养，每2～3 d传代1 次。取对
数生长期细胞进行实验。
1.2.2 细胞活力的测定 取长至90 %融合的PC12细
胞，清洗、消化后制成细胞悬液。计数后，按1×104/
孔接种于96孔板。培养24 h待细胞完全贴壁后，移去
上层培养液，每孔加入100 μL无血清培养液（F-12K）
培养24 h，以同步细胞状态。
药物处理：加药组，加入不同浓度的EBE（25，
50，100，200 μg/mL） 预处理PC12细胞12 h，然后1
mmol/L的6-OHDA损伤细胞12 h。阳性对照组，250
μmol/L L-NAME处理细胞同样时间作为阳性对照。
正常对照组（control组），不加任何药物处理，仅为含
有0.1 %DMSO的低血清培养液。6-OHDA组：仅用1
mmol/L的6-OHDA损伤细胞12 h。
MTT法测定细胞活力：药物和神经毒素处理细胞
完，每孔加入5 mg/mL MTT液20 μL，置37 ℃继续培
养4 h。弃上清，每孔加入DMSO 150 μL，振荡10
min，终止反应并充分溶解甲臜颗粒。用多标记细胞
计数仪 Victor 3 1420（Perkin Elmer）测定各孔在570
nm处的吸光度值（OD值）。各实验组PC12细胞活力以
各实验组的OD值与正常对照组的OD值的比值表示。
实验重复3次。
LDH释放法测定细胞活力：细胞活力也可以通过
检测细胞膜损伤后释放到培养液中的乳酸脱氢酶的量
来测定。药物和神经毒素如上处理细胞，取100 μL
细胞培养上清液，参考试剂盒说明书操作方法，加入
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中药新药与临床药理 2010年 7月第 21卷第 4期
等量细胞毒性检测试剂盒中A试剂和B试剂的混合液
（A ∶ B=1 ∶ 46），用多标记细胞计数仪测定各孔在490/
690 nm处的吸光度值。
1.2.3 Hoechst 33342荧光染色 为了观察在细胞损伤
过程中细胞核的改变，用12孔板，每孔种50万细胞。
按照上述药物处理的方法分组，加药处理后，用1
mmol/L的6-OHDA处理细胞8 h，然后细胞用预冷的
PBS洗2～3次，加入1 %多聚甲醛冰上固定15 min后吸
去多聚甲醛，加入Hoechst 33324（10 mg/mL）和100
mg/mL RnaseA抑制剂的混合液，每孔加入200 μL混
合液后，避光孵育15 min，将染料吸出，加入200 μL
PBS。用荧光倒置显微镜（Carl Zeiss，Axiovert 200，
USA）观察细胞核的变化并拍照。
1.2.4 细胞内一氧化氮（NO）荧光染色及含量测定 用
荧光染料4-amino-5-methylamino- 2’，7’-difluo－
rofluorescein diacetate（DAF-FM diacetate）检测细胞内
NO。DAF-FM diacetate能够通过细胞膜，进入细胞后
在酯酶的作用下脱乙酰基变成DAF-FM。用100 μmol/
L SNP处理PC12细胞12 h作为SNP组，该化合物可以
刺激细胞内NO的产生，用来验证6-OHDA也具有相
同的作用。PC12细胞以1×104/孔的密度种在黑色透底
的96孔板中，加药处理12 h 后，1mmol/L的 6-OHDA
刺激 1 h。然后用PBS洗2～3次，加入含有2.5 μmol/L
DAF-FM diacetate的0.5 %F-12K培养液避光37℃染色
30 min，PBS洗2次，用多标记细胞计数仪 Victor 3
1420（Perkin Elmer）在激发光波长495 nm /发射波长
515 nm 处测定荧光强度，并用荧光倒置显微镜
（Carl Zeiss，Axiovert 200，USA）拍照。
1.2.5 免疫印记杂交（Western Blot）检测iNOS蛋白的表
达：PC12细胞培养在25 cm2培养瓶中至90 %融合，
换用无血清培养液培养24 h。移去原培养液后，用含
有不同浓度EBE的低血清培养液 （含0.5 %马血清）
处理12 h，然后1 mmol/L 6-OHDA处理PC12细胞6 h。
预冷PBS洗涤，用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液消化
并裂解细胞，4 ℃ 30 min，之后12000 r/min，4 ℃离
心 20 min，取上清液。用 BCA蛋白测定试剂盒
（Thermo）测定蛋白浓度。加入Sample 4倍体积的上样
缓冲液，95 ℃加热5 min，制备成为待测样品。SDS-
PAGE电泳分离上述蛋白样品后，转至PVDF膜上。用
含5 %脱脂牛奶的PBST溶液室温下封闭膜1 h。将膜
置于含有一抗的5 %脱脂牛奶PBST中，4 ℃孵育过
夜，抗 iNOS的抗体和β-actin的一抗稀释度均为1：
1000。用PBST洗膜3次，每次10 min。膜放入含HRP
标记二抗的5 %脱脂牛奶中（稀释度1 ∶ 2000），室温
中缓慢摇晃，孵育1 h。用PBST洗膜3次，每次10
min。ECL超敏发光试剂检测并拍照。
1.2.6 免疫染色 斑马鱼被固定在5 %的多聚甲醛中5
h，冲洗后保存在－20 ℃，100 %乙醇中过夜。被固定
的斑马鱼在含有2 %胎羊血清的PBST溶液中室温下封
闭1 h，鼠单克隆抗体抗酪氨酸羟化酶抗体作为一抗，
1 ∶ 200稀释，4 ℃孵育过夜。然后用PBST清洗 6 次，
每次30 min。根据Vectastain ABC试剂盒的说明书孵
育二抗和显色。染色结束后把斑马鱼平放在3.5 %的
甲基纤维素上并拍照。
1.2.7 统计学处理 所有数据用mean±SEM表示，统
计学比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），
并用Newman-Keuls Multiple Comparison Test进行组间
比较。
2 结果
2.1 EBE对PC12细胞活力的影响 MTT实验表明，1
mmol/L的6-OHDA处理PC12细胞12 h，6-OHDA组比
对照组的细胞活力降低了约50 %，加药组与6-OHDA
组比较细胞活力呈剂量依赖性的增加。L-NAME阳性
对照组与6-OHDA组比较细胞活力也有所增加。见图
1- A。LDH实验表明，各加药组与6-OHDA组比较
LDH的释放呈剂量依赖性降低，L-NAME阳性对照组
LDH的释放也有所降低，LDH释放率低的相对细胞存
活率高。差异有统计学意义，P < 0.05。见图1- B。
与control组比较，+++P < 0.0001，与6-OHDA比较， *P < 0.05，**P
< 0.01，***P < 0.0001 。
2.2 EBE对PC12细胞核形态的影响 Hoechst 33342
是一种能够与DNA结合的荧光染料，染色结果显示，
1 mmol/L的6-OHDA处理PC12细胞8 h可以引起PC12
细胞的凋亡，形成凋亡小体，造成染色质的固缩和
DAN的断裂（如图2-B中的白色箭头所指）。而用了不
图1-A MTT法测定EBE对
PC12细胞活力的影响，
图1-B LDH法测定EBE对
PC12细胞活力的影响。
A B
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同浓度（25，50，100，200 μg/mL） 预处理的各组，
能够逆转6-OHDA引起的这种变化。见图 2-C～F图。
2.3 EBE对PC12细胞内NO含量的影响 细胞内一氧
化氮（NO）荧光染色及含量测定的结果表明，1 mmol/
L的6-OHDA处理PC12细胞1 h和SNP组细胞内的NO含
量明显增加，用EBE预处理PC12细胞的各组则能够剂
量依赖性的降低细胞内NO的含量，L-NAME组也有
所降低。差异有统计学意义，P < 0.05。见图 3 A-H
和图4。
图 3 DAF-FM diacetate荧光染色观察
EBE对PC12细胞内NO含量的影响
2.4 EBE对PC12细胞中iNOS蛋白表达量的影响 为
进一步探讨EBE神经保护作用的分子机理，采用免疫
印迹杂交检测iNOS蛋白表达量。1 mmol/L的6-OHDA
处理PC12细胞6 h后PC12细胞内iNOS蛋白的表达量明
显增加，用EBE预处理PC12细胞的各组则能够降低
iNOS的表达量。见图 5。
2.5 EBE对6-OHDA刺激后斑马鱼脑部多巴胺神经元
减少的影响 用250 μmol/L 6-OHDA 单独或和不同
浓度的EBE（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL）共同
处理2 dpf 斑马鱼24 h，然后进行抗酪氨酸羟化酶免
疫染色试验。结果显示，在斑马鱼腹侧间脑（如图6-
A白色括号所指）处褐色的团簇为多巴胺神经元，单
独用6-OHDA处理斑马鱼导致多巴胺神经元的数量与
control组比较减少大约50 %（图6-B），而不同浓度的
EBE可以剂量依赖性的抑制6-OHDA在斑马鱼上引起
的多巴胺神经元减少（图6 -C～E图），阳性对照组
Nomifensin（DAT 抑制剂）和L-NAME对于多巴胺神经
元的减少也都有很好的保护作用（图6 - F～ G）。
3 讨论
以谷精草、青葙子为主药的方剂谷青汤，是全国
名老中医学术继承人导师之一张磊主任医师集几十年
临床经验创制的经验方，具有疏散风热，清利头目之
图 2 Hoechst 33342荧光染色观察EBE对PC12细胞核形态的影响
图 4 DAF-FM diacetate荧光染色测定
EBE对PC12细胞内NO含量的影响
RFI（relative fluorescent intensity）表示相对荧光强度。与control组
比较++P < 0.001 ；与6-OHDA比较， *P < 0.05，**P < 0.01。
iNOS
β-actin
130kDa
45kDa
control 6-OHDA 25 50 100 200
EBE（μg/mL）+6-OHDA
图 5 免疫印迹法测定EBE对iNOS蛋白表达的影响
1 mmol·L-1 6-OHDA
EBE(μg/mL)
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中药新药与临床药理 2010年 7月第 21卷第 4期
功。适用于风热、郁热所致的头目疾患[9]。据此我们
推测谷精草可能对于神经系统有一定的作用。虽然谷
精草在民间已有广泛的应用，但现代医学对其研究甚
少。为了研究谷精草更广泛的药理作用，在6-OHDA
损伤的体外PC12细胞模型上和体内斑马鱼模型上进
行了验证。本研究首次发现谷精草乙醇提取物对6-
OHDA诱导的PC12细胞损伤具有保护作用，能抑制6-
OHDA引起的细胞凋亡，并能抑制6-OHDA引起的斑
马鱼内多巴胺神经元的减少。
有研究表明，帕金森症、早老性痴呆及亨廷顿舞
蹈症等神经退行性疾病均与NO产生和释放过多有密
切的关系 [10]。由于NO没有专门的储存及释放调节机
制，靶细胞上NO的多少直接与NO合成多少有关。一
氧化氮合酶（nitric oxide synthetase，NOS） 是NO合成
的催化酶，其家族成员之一iNOS多数情况下只在免
疫应答和神经损伤后才表达，高表达的iNOS可以催
化L-精氨酸产生过多的NO[11-12]。本研究发现6-OHDA
刺激PC12细胞后，细胞内NO含量大大升高、iNOS蛋
白的表达增高，EBE预处理细胞可以减少6-OHDA刺
激引起的细胞内NO升高和下调iNOS蛋白的表达，最
终减轻6-OHDA诱导的PC12 细胞损伤。因此，EBE
抑制iNOS-NO通路可能是其神经保护作用的机制之
一。
谷精草现代化学成分方面的研究报道谷精草主要
含有黄酮类和挥发油类化合物。其中黄酮类成分主要
有槲皮万寿菊素、粗毛豚草素、万寿菊素、槲皮素及
其衍生物，而这些黄酮类化合物大部分都被报道具有
较强的抗氧化活性[13-14]。挥发油也是中药中一类常见
重要有效成分，具有抗过敏、酶抑制、抗炎、抗微生
物、抗氧化和对中枢神经系统的镇静作用等药理活
性。近年来也有一些关于中药挥发油成分发挥神经保
护作用的报道，例如：益智仁挥发油可能通过增加脑
内纹状体单胺类神经递质释放、减轻氧化应激反应以
及减少黑质致密部神经元凋亡发挥脑保护作用[15]。姜
黄中的挥发油成分具有抗氧化的活性，对大鼠的缺血
再灌注损伤有保护作用，其发挥作用的机制与通过调
节NO系统的反应有关 [16]。所以我们初步推测谷精草
醇提物发挥神经保护作用的药效物质基础可能为黄酮
类和挥发油类成分。
本文首次对谷精草在6-OHDA损伤的PC12细胞和
斑马鱼模型上的保护作用进行报道，并且初步探明了
其神经保护作用的机制可能与抑制iNOS-NO通路有
关，而谷精草在其他动物模型中神经保护的效果，发
挥作用的药效物质基础和更深一步的分子药理作用机
理，有待于进一步研究。
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（编辑：邓响潮）
收稿日期：2010-03-28
作者简介：刘艳玲（1976-），女，博士，研究方向：中医药维护生殖健康研究。通讯作者：宋卓敏，教授，博士生导师，研究方向：主要从事妇
科临床与科研工作。
基金项目：天津市卫生局中医、中西医科研基金资助项目（2005067）。
一贯煎加味对大鼠慢性不可预见应激模型更年期抑郁症的治疗
刘艳玲1，宋卓敏2（1. 广州中医药大学，广州 510405；2. 天津中医药大学中医药研究院，天津 300193）
摘要：目的 探讨一贯煎加味对更年期抑郁症大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA表达的影响，进而明确其治疗更
年期抑郁症的作用机理。方法 对雌性成年大鼠采用去势+孤养+改良的慢性不可预见应激方法建立更年期抑郁
症模型；将去势大鼠随机分为更年期组、模型组、西药组（百优解联用雌激素）、中药组（一贯煎加味），并以假
手术组为对照。采用RT-PCR法测定海马、皮质神经元中5-HTR1A mRNA转录水平，应用GIS-2010凝胶图像分
析系统采集图像、读取灰度值。比较分析各组灰度值之间的差异。结果 模型组大鼠海马、皮质5-HTR1A mR－
NA转录水平低于假手术组，有显著性差异（P ＜ 0.01）；中药组大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA转录水平显著高
于模型组、西药组，有显著性差异（P ＜ 0.01）。结论 一贯煎加味从基因水平影响5-HTR1A mRNA转录功能，
从而发挥其抗抑郁作用。
关键词： 一贯煎加味；慢性不可预见应激；更年期抑郁症；海马；皮质；5-HTR1A mRNA表达；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0346-05
Effect of Modified Yiguanjian Decoction on Perimenopausal Depression Rats Caused by Chronic Unpre－
dictable Stress
LIU Yanling1，SONG Zhuomin2（1.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China；2. Insti－
tute of Chinese Medicine，Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China）
Abstract：Objective To investigate the effect of modified Yiguanjian（MYD）on the contents of 5-hydroxytryptamine
receptor-1A（5-HTR1A）mRNA in the hippocampus and cerebral cortex of perimenopausal depression rats，and to
clarify the therapeutic mechanism. Methods Fifty female adult rats were divided into five groups: the sham operation
group（group A），menopause group（group B），model group（group C），fluoxetine and estrogen group（group D），and
MYD group（group E）. The rat model of perimenopausal depression was established by the methods of rat castration
and modified chronic unpredictable stress. Group B was given castration without stress. Group A received sham opera－
tion without castration or stress. Groups A，B and C were administered with distilled water. Groups D and E were giv－
en the responding drugs. The mRNA level of 5-HTR1A in the hippocampus and cerebral cortex was analyzed by RT-
PCR，and GIS-2010 gel image analysis system was used to dectect the gray scale of 5-HTR1A in each group. Re－
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