全 文 ：作者简介 王红霞(1973-),女,河南洛阳人,硕士,从事细胞遗传学
研究。
收稿日期 2008!04!14
紫斑百合(LiliumnepalenseD.Don)为百合属卷瓣组多
年生球根花卉[1],分布于云南、西藏(南部),生长在海拔
1400～2900m的杂木林灌丛中。花大喇叭型,淡黄色,中心
呈紫色,色彩艳丽,株形美观,园艺观赏价值高,是非常好的
鲜切花材料。但在自然环境中繁殖较慢,且由于人为破坏和
干扰,目前这些野生居群的百合处于濒危状态,因此,急需
将其引种并快速地繁殖推广,将优良种百合用于花卉生产。
笔者从野生居群中选出具有优良经济性状的单株直接
应用组织培养技术将其扩大繁殖,以供生产之需。
1 材料与方法
1.1 材料 紫斑百合的鳞茎。
1.2 方法 从优良植株上选取幼嫩的鳞茎,先用湿纱布轻
轻擦洗其表面,然后用洗衣粉洗,再用流水冲洗干净,蒸馏
水洗 3~4次,置于超净工作台上,用 75%的酒精消毒 30s,
再用0.1%的升汞消毒 8min,无菌水洗4~5次,用无菌的吸
水纸吸干其表面的水分。将小鳞片分开,较大的可纵切成
2~3片,接种于诱导丛生芽培养基①上,培养温度(25±2)℃,
光照度1500lx,光照12h/d。待芽伸长,绿色叶片长出时,转
移到增殖培养基②上进行快速繁殖,然后将生长旺盛的芽
转移到生根培养基③上进行生根培养,形成完整的植株后
可以移栽。培养基配方见表 1,3种培养基中均含蔗糖 3%,
琼脂0.9%,pH值为5.8。
2 结果与分析
2.1 丛生芽诱导 在培养基①上培养 1周,鳞片开始增厚
变绿,约 2周开始出现浅黄色的分生细胞团,1个月后,
从分生细胞团上分化出淡绿色的芽丛,继而长大伸长(图
1)。平均每块外植体可分化出6个具有小鳞茎的幼芽,而且
整个鳞瓣均能分化出小鳞茎。这就为紫斑百合的快速繁殖
提供了有利条件,从而可获得大量培养的材料。具体分化情
况见表2。
2.2 增殖培养 将芽切下转接到培养基②上,15d后从小
芽基部又分化出 5~7个小芽形成芽丛,增殖迅速。约 30d
继代培养1次。芽经过连续不断的继代增殖,生长分化表现
正常,并且随着代数的增加而加速和增多,芽苗也较旺盛粗
壮。在继代培养过程中,发现芽苗长势良好要求有合适的培
养温度。若温度太高,容易出现褐化现象,长出的芽苗也难
以生根。
2.3 生根培养与移栽 将长约5cm的丛生芽切成单株,除
掉周围愈伤组织,接种到培养基③上,约 15d开始生根,30
d可长成粗壮的根。生根率 100%。待根长至 1cm左右开始
炼苗,炼苗 7d左右便可移栽。移栽时,小心洗去附在根
(下转第7137页)
紫斑百合的组培快繁研究
王红霞,王文锋 (新乡医学院生命科学技术系,河南新乡 453003)
摘要 [目的]提高紫斑百合的培养效率。[方法]以紫斑百合的鳞茎作外植体,在MS+6!BA0.50mg/L、IBA0.80~1.20mg/L的培养基上一
步分化成苗。[结果]在增殖培养基上可大量增殖,经生根培养练苗后成活率达95%以上。[结论]该方法大大缩短了紫斑百合培养周期。
关键词 紫斑百合;鳞茎;组培快繁
中图分类号 S336 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)17-07133-01
RapidPropagationofLiliumnepalenseD.Don
WANGHong!Xiaetal(DepartmentofLifeSciences,XinxiangMedicalColege,Xinxiang,Henan453003)
Abstract [Objective]TheaimofthispaperwastoimprovebreedingeficiencyofLiliumnepalenseD.Don.[Methend]TakingthebulbofLilium
nepalenseD.Don.asexplant,seedlingdiferentiationwasobtainedonMS+6!BA0.50mg/L+IBA0.80~1.20mg/L.[Result]Multiplicationon
enrichmentmediumwasthemost,andthesurvivalratewasashighas95%afterrootingandseedlingtraining.[Conclusion]Cultureperiodwas
shortenedgreatlybyusingthismethod.
Keywords LiliumnepalenseD.Don;Bulb;Rapidpropagation
表1 培养基的配方
Table1 Formulaofculturemedium
培养基种类
Typesofculturemedium
成分
Composition∥mg/L
①诱导丛生芽培养基
Budinducingmedium
MS+6!BA0.50+IBA0.80~1.20
②增殖培养基MultiplicationmediumMS+6!BA0.50~1.00+NAA0.05~0.10
③生根培养基Rootingmedium MS+IBA0.02~0.05
表2 小鳞瓣的分化情况
Table2 Diferentiationofsmalbulb
激素浓度
Concentrationof
hormone∥mg/L
接种块数
Inocula!
tion
number
分化块数
Numberof
diferenti!
ation
每块分化的
小鳞茎平均
数Meanof
diferentiated
smalbulb
无菌苗高度
Heightof
aseptic
seedling
cm
6!BA0.50+NAA0.05 36 36 6 1.5
6!BA0.80+NAA0.10 38 38 7 3.5
6!BA1.00+NAA0.10 32 32 5 2.5
图1 从分生细胞团上分化出的芽丛
Fig.1 Buddiferentiationfrommeristematiccelmass
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2008,36(17):7133,7137 责任编辑 孙红忠 责任校对 卢 瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.17.097
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(上接第7133页)
上的培养基,将苗移入腐殖土中,浇透水,放入塑料大棚中,
成活率达95%以上(图 2)。成活后定期施用营养液,以促进
苗的生长。
3 讨论
研究发现,紫斑百合小鳞茎的分化能力与外加植物激
素的种类关系很大,在生长素类物质中,IBA对鳞片分化为
小鳞茎效果最好,不仅数量多,而且体积大,生活力较强。在
继代增殖过程中 NAA比 IBA效果更好,但诱导生根时,仅
需较低浓度的IBA,若浓度较高,则不利于生根。
以鳞茎的不同部位为外植体,分化能力也有较大差异。
在同一鳞茎中外侧较肥厚的鳞片小鳞茎的形成能力较强,
内侧的鳞片小鳞茎的形成能力较弱。在同一鳞片中,分化能
力最强的是中间偏下部位,这可能与生物的遗传势和鳞茎
的营养成分有关[2]。
进一步研究发现,同一种处理,接种的外植体大容易诱
导分化产生不定芽,且生长也较快,反之,外植体过小易干
枯死亡。这可能与外植体本身所含细胞的相互作用有关。
该研究只需一步诱导就可形成不定芽,没有经过典型
的愈伤组织阶段,这种情况可能是由于外植体某些部位的
细胞,在重新分裂后直接形成了分生细胞团,然后又形成了
器官原基,进一步发育形成了器官(不定芽)[3]。采取的一步
成苗法[4]在生产实践中更具优势。因为它减少了转种次数,
节省了人力和物力,大大缩短了培养周期(比一般的培养可
缩短2~4周) ,而且繁殖系数高,便于大规模生产,从而为野
生花卉的开发利用提供了一条有效途径。
参考文献
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图2 紫斑百合的再生植株
Fig.2 RegeneratedplantofLiliumnepalenseD.Don
很少对细胞造成伤害,这为通过油樟的愈伤组织培养生产
次生代谢产物奠定了很好的基础。
不同植物对不同抗生素的敏感程度是不同的。该
试验中,几种供试的抗生素中,链霉素对污染的控制、
愈伤组织诱导等综合效果最佳,这与链霉素表现出很
低的毒性有关。而油樟对卡那霉素敏感可能与卡那霉
素对植物的毒性较大有关。油樟愈伤组织诱导中的抗
生素试验为油樟遗传转化试验奠定了基础。
参考文献
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图2 光照对愈伤组织生长的影响
Fig.2 Effectsofilluminationoncallusgrowth
注:Ⅰ,带芽茎段诱导的新生的愈伤组织;Ⅱ,黑暗条件下诱导
的愈伤组织;Ⅲ,褐化的愈伤组织;Ⅳ,能产生新鲜愈伤组
织的褐化愈伤组织。
Note:Ⅰ. Newcallus fromstems with buds;Ⅱ. Callus induced
under dark condition;Ⅲ. The br wn callus;Ⅳ. The brown
callusinducedunderdarkcondition.
Ⅰ Ⅱ
Ⅲ Ⅳ
魏 琴等 不同因素对油樟愈伤组织生长的影响36卷17期
科技论文写作规范——讨论
着重于研究中新的发现和重要方面,以及从中得出的结论。不必重复在结果中已评述过的资料,也不
要用模棱两可的语言,或随意扩大范围,讨论与文中无多大关联的内容。
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