全 文 ：hypertensive patien ts and 125 healthy vo lunteers. S ta-
tistical ana ly ses include one-wayANOVA andχ2 analy-
sis. Results　The A rg16G ly and G ln27G lu po lymo r-
phism s w ere in H ardy-W einberg equ ilibrium. The a l-
lele frequency o f 27G lu in the patients w ith hyperten-
sion and obesity w as 0. 069 and significan tly higher
than tha t in the patien ts w ith hypertension and that in
the hea lthy vo lun teers (P <0.05). Further study
show ed that this association be tw een G ln27G lu po ly-
morph isms and obe sity ex isted only in ma le hype rten-
sive pa tients, bu t not in fema les. M oreover, therew as
no associa tion betw een β2-adrenoceptor hap lo types and
obesity in ou r study. Conclusions　These da ta suggest
tha t the G ln27G lu po lymo rph ism o f β2-adrenocep tor
m ight be a m ajor factor w hich contribu tes to obesity
susceptibility inma le hypertensive sub jec ts.
Key words　β2-adrenoceptor;genetic polymorphism;
haplo types;obesity;hypertension
类叶升麻苷对鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用
杨芳艳 , 蒲小平
(北京大学药学院分子与细胞药理学系 ,北京　100083)
中国图书分类号:R 282.71;R 284. 1;R 329.25;R 745. 705.3
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2006)02 - 0159 -06
摘要:目的　探讨类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺能神经元
SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法　采用 MTT
法检测细胞存活率 , 以荧光染料 H oechst33342染色分析细胞
核的形态学变化 , 用流式细胞仪定量分析细胞凋亡峰 , 以 2′,
7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠 (DCFH-DA)为标记探针检测
细胞内活性氧的产生 。结果　①0. 5 μm o l L- 1的鱼藤酮处
理 SH-SY5Y细胞 48 h能引起细胞存活率的显著下降;诱导
细胞发生凋亡 , 凋亡率达 47.39%;大部分细胞胞体皱缩 , 突
起缩短消失或断裂;染色质皱缩 、浓缩 、断裂及形成凋亡小
体;细胞内活性氧水平上升。 ②预先用盐生肉苁蓉提取物类
叶升麻苷(10, 20或 40 m g L - 1)处理细胞 6 h, 可提高细胞
存活率;明显改善鱼藤酮引起的细胞形态学变化;流式细胞
仪检测凋亡率分别降低到 25.87%, 23.97%, 10.45%;以
DCFH-DA为标记探针检测到 20 m g L- 1类叶升麻苷可明显
抑制鱼藤酮引起的细胞内活性氧产生。结论　类叶升麻苷
能抑制鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元 SH-SY5Y细胞凋亡 ,
其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平有关。
关键词:类叶升麻苷;鱼藤酮;凋亡;SH-SY5Y细胞;活性氧
收稿日期:2005 - 09 - 12,修回日期:2005 - 11 - 18
基金项目:国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 资 助 项 目 ( No
2004CB519802);国家自然科学基金资助项目 (No
30472164)
作者简介:杨芳艳 (1980 - ), 女 ,硕士生 , Tel:010-87474980, E-m ail:
elin569@ sohu. com;
蒲小平(1956 -),女 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,通讯作者 ,
研究方向:帕金森病与细胞凋亡相关的分子机制及药物的
干预作用 , Tel: 010-82802431, Fax: 010-82802431, E-
m ail:puxiaop ing@263. net
　　帕金森病 (Parkinsons D isease, PD)是第二大最
常见的神经退行性疾病 ,它能选择性和进行性地导
致多巴胺能神经元变性和坏死 ,并且在中脑黑质神
经元的胞浆内形成路易小体 (Lew y body), 致使
80%以上合成多巴胺的神经元死亡 ,最终导致儿茶
酚胺类神经递质多巴胺的不足 ,并出现 PD特有的
运动迟缓等症状。遗传和环境因素在 PD的发病中
具有重要作用。神经毒素如 1-甲基-4-苯基-1, 2, 3,
6-四羟基吡啶 (1-methy l-4-pheny l-1, 2, 3 , 6-tetrahy-
dropy ridine, MPTP)或 6-羟基多巴胺 (6-hydroxydo-
pam ine, 6-OHDA)制备的 PD动物模型已应用了几
十年 。然而 ,很少在 MPTP和 6-OHDA制备的 PD动
物模型的中脑黑质神经元中发现 Lew y body,它是
PD发病后细胞浆内特有的病理标志物 。鱼藤酮是
一个从鱼藤属植物中提取的具有生物活性的广谱杀
虫剂 ,也用于捕杀鱼类。最近发现长期暴露于鱼藤
酮的大鼠可以出现类似 PD生物化学 、解剖学和行
为学症状等各方面的特征。最重要的是鱼藤酮能诱
导中脑黑质神经元内产生类似于路易小体的胞浆内
涵体 [ 1, 2] 。因此 ,有人认为用鱼藤酮制备的动物模
型是研究 PD最好的动物模型之一 [ 3, 4] 。同时 ,用鱼
藤酮处理细胞制备的 PD细胞模型国内外也有报
道[ 5] ,有关盐生肉苁蓉(C istanche salsa)的有效成分
类叶升麻苷对该细胞模型的保护作用尚未见国内外
报道 。因此 ,本文就类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺
能神经元 SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用进行了探
讨和研究 。
1　材料和方法
159 中国药理学通报　ChinesePharmacologica lB ulletin　2006 Feb;22(2):159 ～ 64
1. 1　材料
1. 1. 1　试剂　鱼藤酮 (ro tenone)、胰蛋白酶 ( tryp-
sin)、噻唑蓝 (MTT)、H oechst 33342、碘化丙啶 (PI)
为 S igma公司产品;DMEM 培养基为 G ibco公司产
品;胎牛血清为中国医学科学院生物工程研究所产
品;核糖核酸酶 A(RN aseA)为 G env iew公司产品;
小鼠神经生长因子 (mNGF)为 Prom ega公司产品;
乙二胺二乙酸二钠盐 (EDTA-2N a)为 Am resco公司
产品;活性氧检测试剂盒为碧云天生物技术研究所
产品。鱼藤酮溶解于二甲基亚砜 (DMSO , S igma)
中 ,配成 1mmo l L - 1储存液于 - 20 ℃备用 。类叶
升麻苷 (acteoside)为白色非晶体粉末 ,相对分子量
为 624,易溶于水 ,经 HPLC检测纯度 >98 %,由北
京大学 药 学 院 天然 药 物 学 系 屠 鹏 飞 教授
提供(Fig 1)。
F ig 1　Chem ica l structure of acteoside
1. 1. 2　细胞株 　人神经母细胞瘤细胞株 (SH-
SY5Y)由北京大学药学院分子与细胞药理学系宋艳
老师惠赠。
1. 1. 3　主要仪器　CO2孵箱:SANYO公司;倒置相
差显微镜:德国 LE ICA公司;倒置荧光显微镜:德国
LEICA公司;550型酶标仪:B IO-RAD公司;流式细
胞仪 FACSCa libu r:美国 BD公司;流式细胞仪 FACS-
can:美国 BD公司。
1. 2　方法
1. 2. 1　SH-SY5Y细胞培养方法　DMEM培养基加
体积分数为 0.1的胎牛血清 、青霉素 1×105 U
L
- 1、庆大霉素 8×104 U L -1 , 5% CO2 , 37℃培养细
胞 。待细胞增长至 70%融合时 ,用含 0.1 g L -1乙
二胺二乙酸二钠盐的 0.5 g L -1胰蛋白酶消化传
代 , 1 ∶5分瓶传代 ,每 4天传代 1次 。当细胞用药
物 (DMSO、类叶升麻苷 、鱼藤酮或 NGF)处理时 ,换
用含体积分数为 0.02的胎牛血清的培养基进行培
养 ,细胞每隔 2天换 1次液 。
1. 2. 2　实验分组和给药方法　SH-SY5Y细胞分为
以下各组:①正常对照组:除了含体积分数为 5 ×
10
- 3
DMSO外 ,不加其他任何药物;②凋亡诱导组:
培养液中加入 0.5 μmol L -1鱼藤酮;③类叶升麻
苷组:用不同终浓度 (10 ～ 40 mg L -1)类叶升麻
苷[ 6]预处理 6 h后加入 0.5 μmo l L -1鱼藤酮;④类
叶升麻苷单独处理组:除了含类叶升麻苷外 ,不加其
他任何药物;⑤NGF组:鼠神经生长因子 (200 μg
L
-1)预处理 6 h后加入 0.5 μmo l L- 1鱼藤酮;5组
细胞培养 48 h后 ,进行各项指标测定 。
1. 2. 3　细胞形态观察　以 1 ×104浓度接种 SH-
SY5Y细胞于 6孔板 ,培养 24 h后分组处理细胞 ,继
续培养 48 h, 然后分别将正常对照组 、凋亡诱导组 、
类叶升麻苷(20mg L -1)组 、类叶升麻苷 (20 mg
L
-1)单独处理组 、NGF(200 μg L -1)组细胞置于
倒置相差显微镜下 ,观察 SH-SY5Y细胞形态并拍
照。
1. 2. 4　Hoechst 33342核染色分析 　按文献方
法[ 7] ,分别将正常对照组 、凋亡诱导组 、类叶升麻苷
(20 mg L- 1)组 、类叶升麻苷 (20 mg L -1)单独处
理组 、NGF(200 μg L -1)组细胞弃除培养基 ,用质
量分数为 40 g L -1多聚甲醛在室温下固定 30m in,
弃固定液后 ,磷酸盐缓冲液(PBS , pH =7.2)洗 3遍 ,
10mg L -1 Hoechst 33342室温避光染色 10m in后 ,
荧光显微镜下观察染色质形态。
1. 2. 5　MTT法检测细胞存活率　以 1×104浓度接
种 SH-SY5Y细胞于 96孔板中 ,每组样本设 4个平
行孔 ,加 200 μl培养基 ,培养 24 h后换成含 0.5
μmo l L -1鱼藤酮或同时加入类叶升麻苷 (10, 20或
40mg L - 1)的培养液中 ,共同处理 48 h后 ,每孔加
入终浓度为 0.5 g L -1的 MTT,培养 4 h后弃除培
养液 ,每孔加入 200 μl DMSO ,充分吹打震荡 ,待蓝
色颗粒完全溶解后用半自动酶标仪测定 570 nm处
的吸光度值 (A570 nm ),用于定量反映细胞的存活率。
1. 2. 6　流式细胞仪检测细胞凋亡[ 8] 　收集正常对
照组 、凋亡诱导组 、不同浓度类叶升麻苷 (10 , 20或
40mg L -1)组 、类叶升麻苷 (40 mg L -1)单独处
理组 、NGF组的细胞 1×106细胞 , PBS离心 (1 000 r
m in-1 , 5 m in)洗 2遍 ,弃上清 ,留 0.5 m l细胞悬
液 ,经 400目细胞筛过滤后 ,将细胞悬液注入体积分
数为 0.7的冷乙醇中固定 12 h, 离心 (1 000 r
m in
- 1 , 5m in)弃乙醇 ,细胞悬浮于含 50 mg L- 1的
PI、50mg L -1 RN aseA染液中 , 避光 37℃温育 1 h
后 ,用 FACSC alibu r流式细胞仪检测 ,实验数据经凋
亡分析软件 ModF it LT处理 。
1. 2. 7　细胞内活性氧 (reactive oxidative species,
ROS)水平的测定　采用活性氧检测试剂盒测定细
胞内活性氧的水平 ,方法按试剂盒说明书进行。简
述如下:收集正常对照组 、凋亡诱导组 、类叶升麻苷
160 中国药理学通报　Ch inese Pharm acological Bu lletin　2006 Feb;22(2)
(20mg L -1)组 、类叶升麻苷(20mg L- 1)单独处
理组 、活性氧阳性对照 (Rosup, 50 mg L -1 ,试剂盒
提供)组 1×106细胞 ,悬浮于含 10 μmol L -1 2′,
7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠 (DCFH-DA)的无血
清 DMEM , 37 ℃, CO 2孵箱内孵育 20 m in用无血清
DMEM洗 3次 ,以充分去除未进入细胞内的 DCFH-
DA。 Rosup的浓度和作用时间均按照活性氧检测
试剂盒要求 ,终浓度 50 mg L- 1 ,刺激细胞时间 30
m in,用 FACScan流式细胞仪测定 DCF的平均荧光
强度 ,激发光波长为 488 nm ,发射波长为 525 nm ,
以各处理组 /正常对照组的比值作为 ROS的数值。
1. 2. 8　数据处理和统计学分析　所有结果以 –x ±s
表示 ,应用 SPSS8.0软件包 ,采用单因素方差分析及
t检验分析处理数据 。
2　结果
2. 1　类叶升麻苷对鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞损伤的
影响
2. 1. 1　倒置显微镜下 SH-SY5Y细胞的形态变化　
正常对照组和类叶升麻苷单独处理组 SH-SY5Y细
胞突起明显 ,呈梭形 、不规则的三角形或多边形 。凋
亡诱导组 SH-SY5Y细胞大部分胞体皱缩 ,突起缩短
消失或断裂 ,细胞呈圆形 ,而类叶升麻苷 (20 mg
L
- 1)组和 NGF(200 μg L -1)组与凋亡诱导组比
较 ,细胞胞体皱缩现象明显改善 ,突起伸展 ,差异十
分明显 (Fig 2)。
2. 1. 2　Hoechst 33342核染色分析　正常对照组细
胞的染色质均匀分散于细胞核内。凋亡诱导组可见
部分细胞的染色质出现典型凋亡样改变 ,表现为染
色质呈月牙形聚集于核的一极 ,染色质皱缩 、浓缩 、
断裂 、形成凋亡小体;而类叶升麻苷 (20 mg L - 1)
组和 NGF组与凋亡诱导组比较 ,染色质出现凋亡样
改变的细胞明显减少 (Fig 3)。
2. 1. 3　类叶升麻苷对鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞存活
率降低的影响　MTT法检测发现鱼藤酮作用 48 h
后导致 SH-SY5Y细胞的存活率下降到正常对照组
细胞的 77.7% ±1.5%。类叶升麻苷单独与细胞作
用没有引起毒性作用 ,而当类叶升麻苷 (10, 20, 40
mg L- 1)预处理 6 h后 ,发现它能明显抑制鱼藤酮
所导致的细胞存活率的下降 ,并且呈现一定的剂量
依赖性 ,细胞存活率由模型组的的 77.7% ±1.5%
分别增加到的 88.5% ±1.1%, 97.9% ±1.0%,
105.3%±1.7%(Tab 1)。阳性药 NGF预处理 6 h,
细胞存活率上升到 83.0% ±1.3%。以上结果表
明 ,类叶升麻苷和 NGF可明显拮抗鱼藤酮对 SH-
SY5Y细胞的毒性作用。
Tab 1　E ffect o f acteoside on rotenone-induced decrease
in SH-SY5Y cell v iab ility(–x±s, n=4)
T reatm en t M TT /% of con trol
C on trol 100. 0±1. 8
Rotenone 77. 7±1. 5##
Rotenon e+200μg L- 1 NGF 83. 0±1. 3**
Rotenone+10m g L - 1 acteoside 88. 5±1. 1**
Rotenone+20m g L - 1 acteoside 97. 9±1. 0**
Rotenone+40m g L - 1 acteoside 105. 3±1. 7**
40 mg L- 1 acteos ide 101. 4±4. 6
　　##P< 0. 01 vs con trol;**P< 0. 01 vs ro tenone
2. 1. 4　类叶升麻苷对鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞凋亡
的影响　细胞凋亡时 ,染色质 DNA降解 、断裂成小
分子量的片段并由细胞内扩散出去而使细胞内
DNA含量降低 ,在 G 1期前面出现一个 DNA含量减
少的 G 1亚峰(Sub -G 1 peak),根据峰值的高低可以
定量细胞凋亡的百分率。 PI染色法通过流式细胞
仪可以检测 G1亚峰来定量细胞凋亡的百分率。类
叶升麻苷单独处理组细胞凋亡率为 5.54%(Fig 4),
与正常对照组细胞凋亡率差异无统计学意义 ,提示
40mg L - 1类叶升麻苷不会诱导 SH-SY细胞凋亡。
而 0.5μmo l L- 1鱼藤酮作用于 SH-SY5Y细胞 48 h
可诱导细胞凋亡 ,凋亡率从 6.24%(正常对照组)升
到 47.39%。预先加入类叶升麻苷 (10, 20或者 40
mg L - 1)或者NGF6h后可明显抑制细胞凋亡的
F ig 2　P ro tective effect of acteos ide on rotenone-induced morpho log ical change in SH-SY5Y cel ls(×200)
A:con trol;B:treatm en tw ith 0. 5μm ol L- 1 rotenone;C:treatm en tw ith 0.5μmo l L- 1 ro tenone and 20m g L - 1 acteoside;D:treatmentw ith
0. 5μm ol L - 1 rotenone and 200μg L - 1 NGF;E: treatm en tw ith 20 m g L -1 acteoside
161 中国药理学通报　Ch inese Pharm acological Bu lletin　2006 Feb;22(2)
F ig 3　Nuclea r analysis o f apop totic cells s ta ined w ith H oechst 33342(×100)
A:C on trol;B:Treatm en tw i th 0. 5μm ol L- 1 rotenone;C:T reatm en tw ith 0.5μm ol L - 1 ro tenone and 20 m g L- 1 acteoside;D:Treatm en t
w ith 0. 5μm ol L - 1 rotenone and 200μg L -1 NGF;E:Treatm en tw ith 20 m g L- 1 acteoside
F ig 4 Effect of acteos ide on the form ation o f apopto tic peak (Sub-G1 peak) in SH-SY5Y induced by ro tenone w ith FACS ana ly sis
　　A:C on trol(Sub-G 1 peak = 6. 24%);B:T reatm en tw ith 0. 5μm ol L - 1 rotenone (Sub-G1 peak =47. 39%);C:Treatment w ith 0. 5μm ol L- 1
rotenone and 10 m g L -1 acteoside (Sub-G1 peak =25.87%);D:T reatm en tw ith 0.5 μm ol L - 1 ro tenone and 20 m g L- 1 acteoside (Sub-G 1 peak =
23.97%);E:T reatm en tw i th 0. 5μm ol L - 1 rotenone and 40 mg L- 1 acteoside (Sub-G1 peak = 10. 45%);F:T reatm en tw i th 0. 5μm ol L- 1 rote-
none and 200μg L- 1 NGF (Sub-G 1 peak =29%) G:T reatm en tw ith 40 m g L -1 acteoside (Sub-G1 peak =5. 54%)
发生 , 凋 亡率分别 下降到 25.87%, 23.97%,
10.45%, 29%(Fig 4)。结果表明 , 类叶升麻苷和
NGF可抑制鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞凋亡 。
2. 2　类叶升麻苷对鱼藤酮诱导 SH-SY5Y活性氧
生成的影响　DCFH-DA是一种可以自由穿过细胞
膜的非荧光化合物 ,在细胞内可以由酯酶水解生成
DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的 DCFH
生成有荧光的 DCF[ 9, 10] 。 0.5 μmol L- 1鱼藤酮处
理细胞 48 h ,可使细胞内产生大量的活性氧 ,荧光强
度明显增加 。而 20 mg L -1类叶升麻苷预处理 6 h
可抑制鱼藤酮诱导 SH-SY5Y细胞活性氧的生成 ,荧
光强度从 3.18(凋亡诱导组 /对照组 )下降到 2.14
(类叶升麻苷组 /对照组 , Fig 5)。结果表明类叶升麻
苷可抑制鱼藤酮诱导 SH-SY5Y细胞活性氧的生成。
F ig 5　E ffect o f a cteoside on rotenone-induced intracel lular ROS
generation evalua ted using the fluorescence intens ity o f DCF
　　##P< 0. 01 vs con trol;**P< 0. 01 vs ro tenone
162 中国药理学通报　Ch inese Pharm acological Bu lletin　2006 Feb;22(2)
3　讨论
盐生肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生寄生草本
植物 , 分布于我国西北各省区 。长期以来 ,盐生肉
苁蓉作为补肾壮阳药物用于临床 ,并且成为被深入
研究的对象 。类叶升麻苷 (acteo-side)属于苯乙醇
苷类 ,是盐生肉苁蓉的有效成分之一。已有的研究
表明类叶升麻苷对 MPP+诱导的 PD细胞模型具有
保护作用[ 11] 。 Shen等[ 11]研究发现类叶升麻苷具有
抑制 1-甲基-4-苯基吡啶离子 (1-methy l-4-pheny-
lpy ri-din ium , MPP+)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细
胞株 PC12细胞凋亡 、线粒体损伤和氧化应激的作
用 。G eng等 [ 12]研究发现含有类叶升麻苷的苯乙醇
总苷对 MPTP诱导所致 C57小鼠 PD模型的行为学改
变 、神经递质多巴胺降低及酪氨酸羟化酶的表达降
低等均有改善作用。
目前很多研究[ 1, 2]发现小剂量长期暴露于鱼藤
酮 ,大鼠可出现类似 PD样病理学及行为学改变 ,使
黑质纹状体多巴胺神经元减少。因此 ,鱼藤酮作为
PD致病的一个环境危险因子 ,已成为 PD研究的热
点 。本文采用培养的 SH-SY5Y细胞 ,以鱼藤酮诱导
细胞凋亡 ,然后从细胞凋亡率 、相差显微镜细胞形态
观察 、细胞核染色形态观察和流式细胞凋亡峰的定
量分析等方面证实了类叶升麻苷对鱼藤酮诱导的
SH-SY5Y凋亡有明显的保护作用。
活性氧自由基是线粒体氧化磷酸化系统的产物
之一 ,直接损害或通过一系列过氧化链式反应引起
广泛生物结构的破坏 ,最终导致凋亡诱发因子释放
而引起凋亡 。很多研究证实苯乙醇苷类化合物具有
明显的抗氧化作用 ,并且可以对抗氧化应激所造成
的 DNA损伤及有效地清除超氧阴离子和羟自由
基 [ 13, 14] 。本研究发现类叶升麻苷预处理可明显抑
制鱼藤酮诱导的自由基生成 ,而类叶升麻苷属于苯
乙醇苷类化合物;因此 ,清除自由基可能与抑制鱼藤
酮所致的细胞凋亡有密切关系 。
由于大量研究表明 PD的发病机制与细胞凋亡
有关[ 15] ,类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺能神经元的
抑制作用可能具有抗 PD的潜在功效 ,这可能为临
床治疗神经退行性疾病带来新的希望 ,而类叶升麻
苷的作用机制和药效学还有待进一步研究 。
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Protective effect of acteoside on rotenone-induced apoptosis in SH-SY5Y cells
YANG Fang-yan, PU X iao-ping
(Dept ofMolecu lar and Ce lluar Pharmacology , Pek ing University School of Pharm aceutical Sciences, B eijing　100083, Ch ina)
Abstract:Ami 　To investiga te whether acteoside can protect the dopam inerg ic neurons, SH-SY5Y ce lls,
163 中国药理学通报　Ch inese Pharm acological Bu lletin　2006 Feb;22(2)
from ro tenone-induced apoptosis. Methods　Ce ll v ia-
b ility w as ana lyzed by M TT assay. The neurons w ere
stained w ith the f luo rescent dye, Hoechst 33342, to
analyze the nuc lear change. F low cy tometry w as used
to de te rm ine neuronal apopto tic peak quan tita tive ly.
The level o f intracellu lar reactive oxygen species
(ROS)was monitored using the fluorescent probe 2′,
7′-dich lo ro fluoresc in-diace tate (DCFH-DA). Results
①SH-SY5Y ce lls treated w ith 0.5 μmol L -1 ro te-
none for 48 h had a significan tly decrease on ce ll v ia-
b ility compared w ith con tro l, and the percentage of ap-
optosis w as increased to 47.39%. The ce ll bod ies of
most ce lls sh rinked and the dendrites o fmost cells be-
came sho rten or broken. M eanwh ile, the shrinkage,
condensation and cleavage of nuc le i in most ce lls could
be observed. The level o f intracellu lar oxygen species
w as enhanced. ② The preincuba tion w ith acteoside
(10, 20 or 40 mg L- 1), one o f the pheny le thano ids
iso lated from Cistanche sa lsa, for 6 h enhanced the ce ll
v iability, and improved the rotenone-induced cellmor-
pho log ical change. M oreove r, the percentage o f apop to-
sis w as significan tly decreased to 25.87%, 23.97%
and 10.45% in a dose-dependent manner. The en-
hancement of ROS induced by rotenone w as inhibited
by 20 mg L -1 ac teoside. Conclusion　These results
demonstra te tha t acteoside can pro tect SH-SYSY cells
against ro tenone-induced apoptosis. The neu ropro tective
e ffec tm ight be re la ted w ith the function that acteoside
can reduce the level of ROS.
Key words: acteoside; ro tenone; apoptosis; SH-
SY5Y cells;reactive oxygen species (ROS)
姜黄素诱导 Raji、HL-60和 K562组蛋白乙酰化的研究
王　妍1 ,胡俊斌 2 ,陈　燕 2 ,崔国惠2
(1.南京大学医学院附属鼓楼医院急诊科 ICU, 江苏 南京　210008;
2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 , 湖北 武汉　430022)
中国图书分类号:R 282.71;R 284.1;R 329.24;R 329.25;
R 341.27;R 73-351;R 733.405
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2006)02 - 0164 -04
摘要:目的　研究姜黄素对淋巴瘤细胞系 Ra ji细胞的抑制
增殖作用 , 并在组蛋白乙酰化 /去乙酰化水平对其抗肿瘤机
制进行探讨。方法　MTT法检测不同浓度姜黄素 、TSA作用
于 Raji细胞的抑制增殖率。以 TSA处理后的细胞为阳性对
照 , 免疫组化法定量分析及免疫荧光流式细胞化学定量检测
姜黄素作用后 Raji、H L-60、K562细胞的组蛋白乙酰化 H3水
平。结果　姜黄素抑制 Ra ji细胞增殖 , 并呈时间剂量依赖
性;25μm ol L - 1姜黄素可致 Ra ji、HL-60、K562细胞的乙酰
化 H
3
水平增加(P <0.05), 50 μm o l L - 1姜黄素的诱导作
用增强(P <0. 01)。结论　姜黄素可以选择性地抑制 Ra ji
细胞增殖;且类似于 TSA诱导 Ra ji, HL-60, K562细胞组蛋白
乙酰化增加。
关键词:姜黄素;组蛋白;乙酰化;去乙酰化
收稿日期:2005 - 07 - 15,修回日期:2005 - 09 - 13
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30271672)
作者简介:王　妍 (1979 - ), 女 , 硕士 , 研究方向:恶性血液病 , E-
m ail:lu ckyw y2003@ yahoo. com. cn;
陈　燕(1952 -),男 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,通讯作者 ,
研究方向:恶性血液病 , E-m ail:Yanchen@ pub lic. ch. ho. cn
　　姜黄素(curcum in)是从中药姜黄中提取的有效
成分 ,研究表明其有抗肿瘤 ,抗炎 ,抗氧化 、降脂等多
种生物学作用 。已经证实姜黄素具有抑制肿瘤细胞
增殖 ,诱导凋亡 ,抑制血管生成等抗肿瘤效应[ 1] ,就
其上游分子机制尚不清楚。
近年来的研究证实组蛋白乙酰化 /去乙酰化的
异常参与了多种血液病肿瘤的发生。组蛋白去乙酰
化酶抑制剂 (HDAC i)通过抑制组蛋白去乙酰化酶
(HDAC)促进相关基因转录 ,进而诱导肿瘤细胞生
长阻滞 、分化及凋亡 。姜黄素的抗肿瘤作用是否可
能和组蛋白乙酰化调节水平相关 ,迄今尚未有报道。
本文主要以恶性血液病细胞 (髓系 HL60、K562,淋
系 Raji)为研究对象 ,在组蛋白乙酰化 /去乙酰化水
平对姜黄素的抗肿瘤机制作一初步探索 。
1　材料和方法
1. 1　细胞株及培养　Raji细胞购自中科院上海细
胞研究所 , K562、HL-60细胞购自华中科技大学同济
医学院免疫教研室。以含体积分数为 10%胎牛血
清 , 1×105 U L- 1青霉素和 100 mg L -1链霉素的
RMPI 1640培养基于 37℃, 5% CO2培养箱培养 ,隔
164 中国药理学通报　ChinesePharmacologica l Bulletin　2006 Feb;22(2):164 ～ 7