全 文 ：银露梅枝叶中鞣质的提取和含量测定
吴宁远， 郭晓宇， 陈建平， 武旭芳， 高建萍， 赵国丁* ， 徐振林
(内蒙古医科大学 药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)
摘 要:目的:从银露梅枝叶中提取鞣质并测定其含量。方法:运用超声技术提取鞣质，用干酪素法测定鞣
质的含量。结果:测得银露梅枝叶中鞣质含量为 10． 66%，相对标准偏差为 2． 5%。结论:运用超声技术提取鞣
质，效率高，速度快。
关键词:银露梅;超声技术;鞣质;提取;含量测定;干酪素法
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:2095－512X(2014)01－0035－05
EXTＲACTION AND DETEＲMINATION OF TOTAL
TANNINS IN YIN LU MEI LEAVES
WU Ning－yuan， GUO Xiao－yu， CHEN Jian－ping， et al．
(Department of Pharmacy，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010110 China)
Abstract:Objective:To extract tannin from Potentilla glabra leaves and determine content．Meth-
ods:Using ultrasonic technology to extract tannin，and detecting the content of tannin by casein． Ｒe-
sults:Potentilla glabra leaves contains 10． 66% of tannin，the relative standard deviation is 2． 5% ．
Conclusion:Using ultrasonic technology to extract tannin is effective and efficiency．
Key words:ultrasonic technology;tannins;extraction;determination of content;casein method
近几年国外对鞣质药理活性的研究方兴未艾，
对鞣质的药理价值被不断开发，而目前国内对鞣质
的研究尚处于起步阶段，对鞣质直接的或间接的生
物活性的有待于深入研究，其应用前途非常广泛。
对于银露梅枝叶中鞣质的研究尚未见报道。因此
本实验拟用浸泡与超声波相结合法提取银露梅枝
叶的鞣质，用干酪素法测定其鞣质的含量，旨在为
银露梅资源的合理开发利用提供基础研究资料。
银露梅(Potentilla glabra) ，别名:查干－本玛，
蒙文名:萌根－乌日拉格。主要分布于内蒙古及我
国中西部地区。生于山坡草地、河谷岩石缝中、灌
丛及林中。灌木，高 0． 3 ～ 2m。小枝灰褐色或紫褐
色，叶为羽状复叶，花期为 6 ～ 11mo。叶与果含鞣
质，嫩叶可代茶叶饮用。花、叶入药，有健脾、化湿、
清暑、调经之效。银露梅枝有固齿、镇赫依，燥“协
日乌素”，用于牙病，肺病，胸肋胀满，“协日乌
素”病［1］。
鞣质(Tannins)又称单宁，是一类结构复杂的
水溶性酚类化合物，在植物中分布很广，主要存
在于
植物的干、皮、根、叶或果实中。鞣质也是中蒙
药材有效成分的鉴定指标之一，作为一种药用有效
·53·内蒙古医科大学学报 2014 年 2 月 第 36 卷 第 1 期
收稿日期:2013－11－19;修回日期:2014－01－04
基金项目:内蒙古自然科学基金(MS20101206)
作者简介:吴宁远(1956－) ，男，内蒙古医科大学药学院化学实验中心高级实验师。
通讯作者:赵国丁，副教授，E－mail:zhaogd848@ 163． com内蒙古医科大学药学院分析化学教研室，010110
DOI:10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2014.01.002
成分渐渐被人们所认识。鞣质对人体有许多特殊
作用，许多报道在抗脂质过氧化、清除活性氧、抗
HIV和抗肿瘤作用［2，3］等方面都有新的发现，鞣质
还具有较好的镇痛抗炎作用，成为许多中药治疗风
湿性及类风湿关节炎的主要活性成分［4］。鞣质还
能凝固蛋白质而具有收敛性，内服可用于治疗胃肠
道出血、溃疡和腹泻等症;外用可保护创伤、灼伤的
创面，以减少分泌和血浆损失，还可以防止细菌感
染［5］。使其在临床上逐渐得到重视，并对鞣质含
量的测定方法提出了更高的要求。
近年来，人们多采用超声技术［6，7］从药材中提
取有效成分，超声具有穿透能力强、选择性高等特
点，超声技术可以大大的加快了反应的速度，缩短
了反应的时间。超声技术在应用于植物细胞破壁
过程，有效的提高提取率。用干酪素法测定银露梅
枝叶中鞣质的含量的研究尚未见报道。因此本实
验拟用浸泡与超声波相结合的方法提取银露梅枝
叶中的鞣质，并测定其鞣质的含量，旨在为银露梅
枝叶的合理临床利用提供基础研究资料。
1 材料与方法
1． 1 材料
银露梅药材 2012－07 采于内蒙古蛮汉山，(经
内蒙古医科大学药学院药用植物教研室乔俊缠教
授鉴定)为银露梅干燥嫩枝叶。样品均采用自然
阴干的方法干燥。
1． 2 试剂
鞣质(天津市福晨化学试剂厂) ;丙酮(北京化
工厂)、碳酸钠(北京化工试剂厂)、Na2WO4(＞
99%，上海生工生物工程有限公司) ;Na2MoO4
(99%，Canada，BIO BASIC INC) ;LiCl(北京新华化
学试剂厂) ;H3PO4(AＲ，浙江新安化工集团股份有
限公司) ;HCl(AＲ，北京化学试剂有限公司) ，以上
均为分析纯;干酪素(CP，上海生工生物工程有限
公司)。
1． 3 仪器
LX－07A型多功能粉碎机(上海江信科技有限
公司) ，MA 260 S电子分析天平(上海第 2d平仪器
厂) ，KQ 5200 E型超声波清洗仪(昆山超声仪器有
限公司) ，ZKB－1－4 型循环水多用真空泵(山东鄄
城华鲁电热仪器有限公司) ，WFJ7200 型可见分光
光度计(上海尤尼柯仪器有限公司) ，HH－Z 型数
显恒温水浴锅(常州国华电器公司) ，DHT 型磁力
搅拌恒温电热套(山东鄄城新天地实验仪器设备
厂) ，ＲE－52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂) ，玻璃仪器、干燥器，25． 00mL，250． 00mL 棕色
容量瓶，100mL 具塞锥形瓶，10mL，25． 00mL 吸量
管，抽滤瓶。
1． 4 方法
1． 4． 1 标准试剂的制备
1． 4． 1． 1 磷钼钨酸试液［8］的制备 取 Na2WO4
35g，Na2MoO4 9g，加水 250mL 使其溶解，加 HCl
35mL，H3PO4 21mL，加热回流 10h，放冷，再加 LiCl
25g，加水 50mL和溴 1mL，煮沸(约 15min)除去残
留的溴，冷却，加水稀释至 400mL，过滤，即得。
1． 4． 1． 2 鞣质标准溶液的制备 精密称取(鞣
质标准品 14． 4mg) ，置 250mL 棕色量瓶中，加水溶
解，再用水定容至刻度，摇匀，即得(每 1mL 中含鞣
质 0． 0576mg)。
1． 4． 2 碳酸钠浓度对吸光度的稳定性实验 分
别取 5 个 25． 00mL 容量瓶，各加入鞣质标准品溶
液 2． 00mL，磷钼钨酸试剂 1． 00mL，再分别加蒸馏
水 18． 0、16． 0、14． 0、12． 0、4． 0mL，再用 20% 碳酸
钠溶液［9］加至刻度(相当于每个容量瓶中分别加
入 20% 碳 酸 钠 溶 液 4． 0、6． 0、8． 0、10． 0
和 18． 0mL) ，摇匀后，分别在 10 ～ 300min的时间范
围内，用分光光度计在 760nm 处测其吸光度，分别
得到 A4，A6，A8，A10，A18，结果见表 1
表 1 不同体积的 Na2CO3 吸光度随时间的变化值
Tab． 1 The changes of different volume of
Na2CO3’s absorbance with time value
时间(min) A4 A6 A8 A10 A18
10 0． 291 0． 315 0． 332 0． 341 0． 377
20 0． 315 0． 335 0． 342 0． 345 0． 375
30 0． 331 0． 343 0． 348 0． 347 0． 372
40 0． 339 0． 344 0． 348 0． 346 0． 351
60 0． 343 0． 345 0． 348 0． 343 0． 347
120 0． 350 0． 346 0． 347 0． 340 0． 341
180 0． 354 0． 345 0． 345 0． 333 0． 328
240 0． 356 0． 345 0． 343 0． 328 0． 313
300 0． 355 0． 344 0． 341 0． 320 0． 299
从表 1 结果可以看出加 4mL 20%碳酸钠溶液
显色时，需 60min后吸光度开始稳定;加 6mL 时在
40 ～ 300min范围稳定;加 8mL 时在 30 ～ 60min 范
围稳定;加 10mL 时在 20 ～ 40min 范围较稳定;加
18mL 时几乎没有稳定范围，并且吸光度随时间逐
渐下降，本实验取 8mL 20%碳酸钠溶液作为测定
条件，在 30 ～ 60min 范围测定，得到的结果较为
·63· Journal Of Inner Mongolia Medical University Feb． 2014 Vol． 36 No． 1
表 2 鞣质标准品含量与吸光度
Tab． 2 The Tannin’s standard content and absorbance
编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
体积 0 0． 50 1． 00 1． 50 2． 00 2． 50 3． 00 3． 50 4． 00
含量 0 0． 0288 0． 0576 0． 0864 0． 1152 0． 1440 0． 1728 0． 2016 0． 2304
吸光度 0 0． 0810 0． 173 0． 254 0． 353 0． 440 0． 535 0． 633 0． 732
附图 鞣质标准品吸光度曲线
Fig． The tannin standard absorbance curve
1． 4． 4 供试品鞣质含量的测定
1． 4． 4． 1 供试品溶液的制备 精密称取供试品
1g(3 份)，分别置于 3 个 100mL 锥形瓶中加入
50%的丙酮溶液［10］50mL，放置 24h，置于超声提取
仪中超声 30min(不得高于 40OC)，抽滤后，移至
250mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。再精
取 25． 00mL上述滤液移入 250mL 容量瓶中，用水
稀释至刻度，摇匀，为供试品溶液待测。
1． 4． 4． 2 总酚测定 精密量取供试品溶
液 1． 00mL(n=3)，分别置于 3 个 25． 00mL 棕色容
量瓶中，各加入磷钼钨酸试液 1． 00mL，再分别加
水 15． 0mL，用 20． 0%碳酸钠试液稀释至刻度，摇
匀，放置 30min，以相应的试剂为空白，在 760nm处
测定吸光度。
1． 4． 4． 3 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶
液 25． 00mL(n=3)，加至已称有 0． 6g 干酪素的锥
形瓶中，密塞，于 30oC 水浴中保温 1h，时时振摇，
取出，放冷，摇匀，过滤，弃去初滤液，各精密量取续
滤液 1． 00mL，置于 3 个 25． 00mL 棕色容量瓶中，
加入 磷 钼 钨 酸 试 液 1． 00mL，再 分 别 加 入
水 15． 0mL，用 20． 0%碳酸钠试液稀释至刻度，摇
匀，放置 30min，以相应的试剂为空白，在 760nm处
测定吸光度。平均总酚 A =0． 255;平均不被吸附
的多酚 A=0． 135，通过表 1 得出相应酚含量，鞣质
含量 =总酚量一不被吸附的多酚量。按鞣质回归
方程计算供试品滤液中鞣质含量为 0． 04256(mg /
mL)，换算出银露梅枝叶中鞣质平均含量。
2 结果
银露梅嫩枝中鞣质含量为 10． 66%，ＲSD
=2． 5%(n=3)。实验结果见表 3。
2． 1 精密度试验
精 密 吸 取 供 试 品 溶 液 6 份，按 照 上
述 1． 4． 4． 2;1． 4． 4． 3 方法，测定结果银露梅枝叶中
鞣质的平均含量为 10． 38% ＲSD=1． 1%(n=6)。
2． 2 重复性试验
取银露梅粗粉 6 份，按照实验“1． 4． 4． 1”、
“1． 4． 4． 2”“1． 4． 4． 3”项的方法制备供试品溶液
并测定含量，其鞣质平均含量为 10． 45%，ＲSD
=2． 9%(n=6)。
·73·内蒙古医科大学学报 2014 年 2 月 第 36 卷 第 1 期
2． 3 加样回收率试验
精密量取供试品滤液 1． 00mL(每毫升供试品
滤液含鞣质 0． 04258mg) ，共 3 份，分别置于 3
个 25． 0mL棕色量瓶中，再分别加入鞣质标准品溶
液(0． 0576mg /mL)1． 00、1． 50、2． 00mL(分别含鞣
质 0． 0576mg、0． 0864mg、0． 1152mg) ，加入相应的
试剂，并按照 1． 4． 4． 2，1． 4． 4． 3 测定方法测其吸光
度，减去供试品滤液总酚的吸光值，计算回收率，结
果三 次 测 定 的 平 均 回 收 率 为 98． 97%，ＲSD
=1． 2%，说明该测定方法的测定结果准确。结果
见表 4。
表 3 供试品鞣质含量测定结果
Tab． 3 Determination of tannin sample content
样品
重量 W
(g)
吸光度
(A)
鞣质含量
(%)
平均含量
(%)
ＲSD
(%)
1 1． 0005 0． 255 10． 64
2 1． 0007 0． 259 10． 94 10． 66 2． 5
3 1． 0003 0． 252 10． 40
表 4 加标回收率试验结果(n=3)
Tab． 4 The addition standard recovery(n=3)
样品编号 供试品量 mg 加入量 mg 测得吸光度 A 测得量 mg 回收率% 平均值% ＲSD%
1 0． 04258 0． 0576 0． 437 0． 05655 98． 17
2 0． 04258 0． 0864 0． 534 0． 08668 100． 3 98． 97 1． 2
3 0． 04258 0． 1152 0． 620 0． 1134 98． 43
3 讨论
3． 1 溶剂的选择
由于鞣质为多羟基类化合物，分子量较大，极
性较强，易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮，可溶于乙酸乙
酯，本实验在溶剂选择方面，因丙酮沸点低，易于回
收，且鞣质在丙酮中有较好的溶解性，故通过多次
筛选本次确定最佳提取溶剂为 50%丙酮(以 50%
丙酮提取率比水和 50% 乙醇提取率高) ，提取
30min。提取效果较好。
3． 2 测定方法的选择
鞣质经典的含量测定方法有许多种，包括容量
法、比色法、分光光度法、重量法等。它们的特点是
不需要贵重仪器、简单、容易操作。其中最常用的
是干酪素法［11 ～ 14］、皮粉法、配位滴定法、普鲁士蓝
法［15］和高锰酸钾法。干酪素可选择性地结合有生
理活性的鞣质，因此测定出来的是有疗效的鞣质，
而无疗效的鞣质例如鞣酐等则被剔除。
3． 3 显色条件的控制
在显色反应时，控制酸度很重要，碳酸钠溶液
的加入量不易过大(本文没有采纳文献中 29%浓
度) ，如果按 29%的浓度加 12mL的量相当于 20%
的浓度加 18mL 的量，从表 1 结果可以看出，加
18mL时吸光度随时间逐渐下降，吸光度几乎没有
稳定范围。因此也就无法得到稳定的测定结果。
碳酸钠浓度(反应浓度)应控制在 5% ～ 8%较为理
想，大于此范围，要尽快在 40min前测出结果，稳定
范围时间较短;小于次范围时，要等 60min 后(甚
至更长)才能稳定，但其稳定的时间也能保持
较长。
3． 4 显色剂量的控制
磷钼钨酸试剂的加入量不能过大加入量小
于 0． 5mL时影响颜色深度，大于 1． 5mL 时溶液易
出现浑浊，都会影响测定结果，产生偏差。加入量
最好控制在 0． 7 ～ 1． 0mL之间。
银露梅是一类很有药用价值的药材，在我国民
间应用历史悠久，但长期以来其药学研究与开发未
得到重视，迄今对银露梅的药学基础研究依然不足
(包括成分、质量标准、药代动力学等) ，这些方面
有待于深入开发研究。
参考文献
［1］那生桑，蒙药质量标准化研究［M］． 呼和浩特． 内蒙古
人民出版社，2007:632－633
［2］王瑞斌，薛成虎．国内鞣质生理活性研究进展［J］．榆林
学院学报，2010;20(2) :47－49
［3］杨九艳，敖强，高敏，等．中蒙药锦鸡儿鞣质含量的测定
［J］．中国民族医药杂志，2005;(2) :26－27
［4］陈英文．金樱叶鞣质的提取及其含量测定［J］． 光明中
医，2010;25(11) :1996－1997
［5］江发寿，赵继红，但建明，等．沙枣鞣质的含量测定［J］．
基层中药杂志，2002;16(2) :25
(下转第 43 页)
·83· Journal Of Inner Mongolia Medical University Feb． 2014 Vol． 36 No． 1
(19) :3348－3351;
［7］张伟星，陈颖，段晓燕，等．内镜下逆行胰胆管造影置放
胆道支架治疗恶性梗阻性黄疸 98 例疗效分析［J］． 现
代生物医学进展，2012;12(11) :2080－2081
［8］田德树，王彦华，王松，等． Ptcd在高龄恶性梗阻性黄疸
患者治疗中的临床应用［J］．实用医学影像杂志，2009;
10(2) :100－102;
［9］董辉，陈武，陈贺，等． Ercp检查对肝外胆道恶性梗阻性
黄疸定性诊断的意义［J］． 中国实验诊断学，2011;15
(10) :1746－1747
［10］姜成文，宋希江．胆道内支架治疗恶性梗阻性黄 28 例
分析［J］．中华普通外科杂志，2002;17(12) :732－733
［11］于世平，徐克．高位恶性梗阻性黄疸胆道内支架置入
治疗的临床应用［J］． 中华肝胆外科杂志，2005;11
(9) :612－615;
［12］戚晓军，薛军．金属内支架置入治疗恶性梗阻性黄疸
12 例［J］．中国肿瘤，2001;12(2) :118－119;
［13］刘栋，吴齐飞，刘昌，等． 血清 ggt，Ggt /alp 及 CA19－9
检测在恶性梗阻性黄疸诊断中的价值［J］．第四军医
大学学报，2009;30(24) :3079－3080
［14］Durakern，Hot S，Polaty，et al． Cea，CA19－9，Andca 125
inthe differential diagnosis of benigm and malignant pan-
creatic disea－Se 8 with or without jaundice［J］． J Surg
Oneol，2007;95(2) :142－147
［15］张大明，代雨欣． 临床合理用药，2012CA19－9 检测在
梗阻性黄疸诊断中的应用价值探讨［J］．临床合理用
药，2012;5(10A) :10－12
［16］郑家平，张远，邵国良，等． 恶性梗阻性黄疸介入治疗
进展［J］．肿瘤学杂志，2009;15(7) :678－682
［17］17．何国林，徐小平，周陈杰，等．一种恶性梗阻性黄疸
介入治疗的新方法———经皮肝穿刺胆道内射频消融
内支架植入术［J］． 南方医科大学学报，2011;31
(4) :721－723;
［18］黄志强．胆道外科手术学［M］．济南:山东科学技术出
版社，1998:168－70
［19］刘素丽，张月寒，王鼎欣，等． 恶性胆道梗阻内镜介入
治疗的临床应用价值［J］． 实用肿瘤杂志，2008;23
(1) :46－8
［20］任东铭，黄平和，王远鹏，等． 恶性梗阻性黄疸介入治
疗 ptcd术后并发症的分析及处理［J］． 中国冶金工业
医学杂志，2003;20(6) :460－461
［21］翟仁友，戴定可，于平，等． 重视 ptbd 并发症的预防和
处理［J］．中国介入放射学，2008;2(2) :104－105;
［22］戴少登，娄朝喱． 恶性梗阻性黄疸介入治疗 187 例临
床分析［J］．河南科技大学学报，2007;25(3) :182－183
［23］吴可夫，苏文智，姚建军，等． Ptcd 治疗晚期恶性梗阻
性黄 疸 的 效 果［J］． 宁 夏 医 学 杂 志，2010;32
(3) :260－261
［24］张金山． 现代腹部介入放射学［M］． 北京:科技出版
社，2000:1
［25］李伟，周政，朱晓黎．恶性梗阻性黄疸介入治疗并发症
的分析及处理［J］．当代医学，2011;17(232) :81－82
［26］王庆，秦明放，勾承月，等． 经内镜胆道支架置人术姑
息性治疗肝门部胆管癌的临床应用［J］．中国内镜杂
志，2008;14(9) :1002－1005
(责任编辑:程立新)
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
(上接第 38 页)
［6］李丹，金哲雄，核桃仁中鞣质成分的提取工艺研究［J］．
黑龙江医药，2009;22(14) :488－489
［7］胡小刚，李继革，郭书好，等．鞣质分析研究进展［J］．中
成药，2002;． 24(3) :217－219
［8］谢坤，唐丽，张婉．磷钼钨酸 /干酪素法测定蒙药阿给炮
制前后的鞣质含量［J］．中药材，2009;10(32) :1517
［9］沈洁，徐金钟，胡济宏，等．磷钼钨酸－干酪素法测定丹
参药材中鞣质的含量［J］． 分析化学，2008;36
(4) :553－554
［10］张爱武，罗素琴，刘乐乐．狗尾草果实中总鞣质的提取
和含量测定［J］． 内蒙古医科大学学报，2012;
(1) :28－29
［11］曾莹，吴峰，周本宏．磷钼钨酸－干酪素法测定石榴皮
中 总 鞣 质 含 量 ［J］． 中 国 药 师，2010;13
(12) :1775－1776
［12］李志猛，李向日． 干酪素法测定不同产地金樱子中鞣
质类成分的研究［J］． 中华中医药杂志;)2009;24
(2) :231－232
［13］朱惹瑞，金哲雄，干酪素法测定傣叶中揉质类成分的
研究［J］．黑龙江医药，2006;16(19) :440－441
［14］王伽伯，肖天资，赵艳玲，等． 分光光度法与吸附质量
法测定大黄鞣质含量的对比研究［J］．中国新药杂志，
2009;18(14) :1369－1371
［15］刘莹，熊富良，张雪琼，等． 叶下珠中鞣质的含量测定
［J］．医药导报，2007;10(10) :1222－1223
(责任编辑:程立新)
·34·内蒙古医科大学学报 2014 年 2 月 第 36 卷 第 1 期