全 文 ：参 考 文 献
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(2004 - 10 - 27收稿
2005 - 02 -24修回)
Determ ination of Taxol in Ar il ofTorreya grand is cv.merrilli
Lü Yangcheng, Song Jin, Luo Guangsheng
(Depa rtm en t o f Chem ica l Eng ineering, Sta te Key Lab o f Chem ica l Eng ineering, Tsinghua Un ive rsity, Be ijing 100084)
Abstrac t　Objective:To de te rm ine taxol in a ril of Torreya grandis cv.m errilli.M ethods:Ex trac ts from Torreya grandis cv.m errilli
w ere ob tained by co ld extraction and soxh le t ex traction w ith e thano l, bu ty l ace tate and ch lo rofo rm as so lvent. The content of taxo l in ex-
tracts w as dete rm ined byHPLC, and whethe r com ponen ts sim ilarw ith taxol existed in w hich w as de tected by F IA-MS.Results:The con-
ten t of taxo l in aril o fTorreya grand is cv.m errilli is be low 0.003%.No com ponents sim ila rw ith taxo lwe re c lear ly de tected.Conc lusion:
There is little value for Torreya grand is cv.m errilli as the resource o f taxo l.
K ey words　Torreya grand is cv.m errilli;Taxo l;Aril
兴安升麻地上和地下部分总苷生物活性比较
田　泽 1, 2　斯建勇1　黄　锋1　黄明辉 2　肖培根 1*
(1.中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所 ,北京 100094;2.香港城市大学深圳研究院 ,深圳
518000)
　　摘要　目的:研究并比较兴安升麻地上和地下部分总苷的生物活性 , 更好地开发和利用这一植物资源。方法:
常规提取制备兴安升麻地上和地下部分总苷 ,用 MTT法 、DPPH法及化学发光法测定并比较二者的细胞毒和抗氧
化清除自由基能力。结果:兴安升麻地上和地下部分总苷体外能抑制多种肿瘤细胞增殖 , 有效地清除 DPPH自由
基和羟自由基。结论:兴安升麻地上和地下部分总苷均具有良好的细胞毒和自由基清除能力 , 且二者作用强度相
当 , 值得开发利用。
关键词　兴安升麻;地上和地下部分总苷;细胞毒;DPPH自由基;羟自由基
　　升麻属 Cim icifuga隶属毛茛科 ,全世界有 18种
以上 ,分布于北温带。国产近 10种 ,从东北到西南
广大地区均有 ,且产量大 ,资源丰富。本属植物多以
地下部分入药 ,用作镇痛和抗骨质疏松制剂 。兴安
升麻 C.dahurica (Turcz)Max im. 是我国特有种 ,其
根茎作为常用中药已载入中国药典 ,而地上部分通
常作为废弃物。近几年国内外学者对地上部分化学
成分研究结果表明:与地下部分类似 ,三萜及其皂苷
是其主要成分〔1、2〕。据报道总状升麻和升麻的根茎
提取物可用于治疗妇女更年期综合症和骨质疏
松〔3、4〕 ,总状升麻提取物及其三萜成分对体外乳腺
癌还具有良好的细胞毒作用 〔5、6〕。升麻中的阿魏
酸 、异阿魏酸等则具有抗炎镇痛的作用 ,咖啡酸及其
衍生物具有抗氧化活性 。
本研究旨在探讨兴安升麻地上和地下部分总苷
在细胞毒和抗氧化方面的生物学活性 ,以期为开发
和利用兴安升麻植物资源提供依据。
1　材料与方法
人肝癌细胞株 (HepG 2)、人乳腺癌细胞株
(MCF-7)、人神经胶质瘤细胞株 (SF-268)、人急性早
372 中药材第 28卷第 5期 2005年 5月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牭牣牥牭牣牥牥牰
幼粒白血病细胞株(HL-60)等均购自 American Type
Culture Co llection。
培养基 RPM I1640及胎牛血清购自 G ib ico公
司;四氮唑溴 (MTT, 3-(4 , 5-dime thy lthiazo l-2-y l)-2,
5-dipheny l te trazo lium brom ide)为 AMRESCO公司产
品 ,由上海生物工程有限公司分装;二苯代苦味肼基
(DPPH , 1, 1-D ipheny l-2-picry lhydrazy l)购自 S igma公
司;邻菲罗啉及其它试剂均为分析纯 。
B io-RAD M odel 680 型 酶 标 仪;TopCount.
NXTTM发光和荧光计数器 。
1.1 　兴安升麻地上和地下部分总苷的制备　原材
料于 1999年 9月采自内蒙古自治区喀喇沁旗茅荆
坝 ,经鉴定为兴安升麻 Cim icifuga dahurica。将升麻
地上和地下部分分别粉碎过筛后 , 以 10倍量的
80%乙醇加热回流提取 3次 ,每次 1 h。提取完毕 ,
过滤 ,滤液减压浓缩至波密度为 1.12时加入吸附剂
(硅胶或硅藻土 )进行柱层析。先以工业已烷洗去
油脂 ,然后用乙酸乙酯洗脱 ,得到的乙酸乙酯部分经
减压浓缩得总苷 ,收率为 5% ～ 6%。
1.2 　兴安升麻地上和地下部分总苷的细胞毒性　
HepG 2, MCF-7, SF-268 和 HL-60 细胞均用 RP-
M I1640培养基加 10%胎牛血清常规培养传代 。接
种细胞到 96孔板 ,接种密度为 10000 ～ 20000 /孔 。
5%CO 2孵箱 37℃培养 24 h后 ,按常规加药 ,对照组
加等容积的二甲基亚砜 (DMSO)。继续在 5%CO2
和 37℃培养箱中培养 48 h。加 MTT, 终浓度为
50μg /m l。于 5%CO 2孵箱 37℃孵育 4 h后 ,加 DM-
SO溶解 ,在 570nm处;B io-RADM ode l 680型酶标仪
上测定吸光度值 ,计算抑制率。
1.3 　抗氧化清除 DPPH自由基试验　DPPH是一
种比较稳定的自由基 , N上有 1个游离电子 ,在 517
nm处有最大的吸收峰 ,其甲醇溶液呈紫色 。加入抗
氧化剂以后 , DPPH捕捉 1个电子与游离电子配对 ,
在 517 nm处的吸收消失 ,紫色褪去 。因此通过测定
加入抗氧化剂后 , DPPH在 517 nm处吸收值的下降
可以看出抗氧化剂对 DPPH的清除作用 。加兴安升
麻地上和地下部分总苷至 DPPH(浓度为 2.4mg /m l
M eOH)中 ,反应 1.5 h后 ,在 515 nm处测定其吸光
度。
自由基清除率 =(1 -A 1 /A0)×100%(A1样品
的吸光度 , A0对照的吸光度 )。
1.4　抗氧化清除羟自由基试验　在碱性介质中 ,
邻菲罗啉 (phen)在金属离子的催化下可与 H2O2作
用产生化学发光 , 其最大发射在 445 ～ 450nm 处。
本研究利用 Cu2+-V c-H2O2作用产生羟自由基 ,与邻
菲罗啉作用产生化学发光。可间接反映药品对羟自
由基的清除能力。用 0.1 mol /L的醋酸盐缓冲液配
置 Cu2+-phen-V c溶液 (pH5.5),使 Cu2+, phen, Vc
的终浓度分别为 5×10-5mo l /L、3.5×10-4mo l /L、3.5
×10-4mo l /L。取 BMG 96孔黑色不透光板一块 ,放
置冰块上预冷 。分别加入预冷的 Cu2 +-phen 10μl /
孔 、Vc 10μl /孔及 H 2O 2 20 μl /孔(最后加 ,以启动反
应),待筛样品 10 μl /孔 ,各孔用醋酸缓冲液 (0.1M ,
PH5.5)补至 100μl。充分混匀 ,立即上发光仪测定
发光强度值 ,并计算自由基清除率 〔7〕。
自由基清除率 (%)=(对照 -样品 ) /(对照 -
空白 )×100%。
2　结果
2.1　兴安升麻地上和地下部分总苷的细胞毒作用
　兴安升麻地上 、地下部分总苷在 250 ～ 7.8125μg /
m l剂量范围内能够抑制 HepG2、MCF-7、SF-268以
及 HL-60细胞的增殖 ,且呈剂量依赖关系(图 1),两
个总苷的 IC50相近(表 1)。提示它们的抑瘤作用强
度相似。
　表 1　　兴安升麻地上和地下部分总苷细胞毒作用
( IC50, μg /m l)
细胞株 地上总苷 地下总苷
HepG2 20 25
MCF-7 72 50
SF-268 46 80
HL-60 19 20
图 1　兴安升麻地上和地下部分总苷细胞毒作用
373 中药材第 28卷第 5期 2005年 5月
2.2 　兴安升麻地上和地下部分总苷的 DPPH自由
基清除作用　兴安升麻地上 、地下部分总苷在 250
～ 7.8125μg /m l剂量范围内可使紫色裉去或变浅 ,
515 nm 处吸光度值明显降低 , 且呈剂量依赖关系
(图 2),说明它们有较好的清除 DPPH 自由基的作
用 。
2.3 　兴安升麻地上和地下部分总苷的羟自由基清
除作用　兴安升麻地上 、地下部分总苷可使化学发
光强度减弱 ,对羟自由基有一定的清除作用 ,且随着
剂量增加 ,作用有所加强(图 3),在 100μg /m l时 ,两
部分总苷的羟自由基的清除率分别为 74.38%和
45.78%。
图 2　兴安升麻地上和地下部分总
苷的 DPPH自由基清除作用
图 3　兴安升麻地上和地下部分总
苷的羟自由基清除作用
3 　讨论
兴安升麻地下部分 ,具有清热解毒 、升举阳气 、
发表透疹的功能 ,主治风热头痛 、齿痛 、咽喉肿痛 、子
宫脱垂等症 。依据我国传统中医理论 ,肿瘤亦是一
种毒物 。从兴安升麻地上和地下部分总皂苷的细胞
毒作用研究结果表明 ,均具有良好的细胞毒作用 ,不
但可以抑制乳腺癌细胞 (MCF-7)的生长 ,也可以抑
制其它肿瘤细胞的生长 ,而且对于 H epG2细胞和
HL-60细胞的杀伤作用强于 MCF-7细胞 。提示这
种生长抑制作用与雌激素受体无关 ,至于细胞毒作
用机制有待进一步研究。
近年来 ,肿瘤的化学预防制剂倍受关注 。具有
抗氧化作用的自由基清除制剂是一类重要的肿瘤化
学预防制剂。自由基可对许多生物大分子如核酸 、
蛋白 、膜多聚未饱和脂肪酸引起超氧反应 ,导致生物
大分子出现交联或断裂 ,细胞结构和功能广泛破坏。
对 DNA的损伤可导致基因突变 ,诱发癌症。林新等
研究发现兴安升麻地下部分总苷 ,能够抑制丝裂霉
素 C诱导的人外周血淋巴细胞姐妹染色体互换频
率〔8〕。从升麻属植物中分离提取到的升麻醇和一
系列三萜化合物可以抑制 Ra ji细胞中 Epstein-Ba rr
病毒早期抗原的活化 ,而其中的升麻醇还可以显著
抑制小鼠皮肤癌的形成 , 具有明显的肿瘤预防作
用〔9〕。本研究发现兴安升麻地上和地下部分总苷
均能有效地清除自由基 ,可能在肿瘤预防中发挥一
定作用。从而提示兴安升麻地上部分也有一定的药
用价值。对兴安升麻地上和地下部分总皂苷的抗肿
瘤活性和其中的有效成分值得进一步研究和开发 。
　　注:本课题为国家 863计划资助项目(编号 2003AA2Z2052)
　　*通讯作者
参 考 文 献
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