全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2012 年
收稿日期：2011－12－09
基金项目：贵州省遵义市科技局项目（［2011］11号）；贵州省教育厅自然科学项目（［2010］085 号）；贵州省科技厅社会发展攻关项目黔科合 SY 字
（［2009］3050 号）
作者简介：高智席（1969－），男，重庆万州人， 副教授，硕士，主要从事仪器分析教学科研工作，（电话）08528937597（电子信箱）wyhgzx＠163．com。
第 51卷第 7 期
2012年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 51 No.7
Apr．，2012
漆姑草（Sagina japonica（Sweet）Ohwi），又名牛
毛粘、蛇牙草、大龙叶、虾子草、大龙草等，为石竹科
植物漆姑草的全草。 分布于江苏、四川、湖南、湖北、
贵州、云南等地。 该药常用于治疗漆疮、秃疮、湿疹、
丹毒、瘰疬、无名肿毒、毒蛇咬伤、龋齿痛、跌打内伤
等［1］。漆姑草味苦，性凉，有散结消肿，解毒止痒之功
效［2］。 研究表明，漆姑草中含有黄酮类成分［3］。 分析
漆姑草中的芦丁和槲皮素含量对漆姑草的药物开
发应用具有重要意义。
黄酮类物质对人体健康有重要作用，因其在抗
氧化、清除自由基以及对过敏、感染、高血压、肿瘤
等疾病治疗方面的积极作用，受到研究者的重视 ［4］。
黄酮的分析方法有分光光度法 ［5－7］、荧光法 ［8，9］、电化
学分析法 ［10，11］等，目前分析测定芦丁和槲皮素使用
最广泛的是高效液相色谱法［12－15］。 但用反相高效液
相色谱—二极管阵列检测法（RP－HPLC－PDA）测定
漆姑草中黄酮类化合物尚未见报道。 本研究对漆姑
草中芦丁和槲皮素进行了分离与测定，方法简便可
行、重现性好。
高效液相色谱法测定漆姑草中芦丁和槲皮素含量
高智席 1，吴艳红 1，黎 刚 2，牟青松 1，刘 焱1，敖克厚 1
（1．遵义师范学院化学系 ／黔北特色资源应用研究实验室，贵州 遵义 563002；2．遵义医学院药学院，贵州 遵义 563003）
摘要：建立了漆姑草（Sagina japonica）中芦丁和槲皮素含量的反相高效液相色谱—二极管阵列检测法，采
用乙醇—超声波提取， 以 Shim－pack VP－ODS（200 mm×4．6 mm）为色谱柱， 以甲醇∶水（含 0．2％磷酸）＝60∶
40（V ／ V）为流动相， 流速为 0．8 mL ／ min， 柱温为 30 ℃， 检测波长为 255 nm。 芦丁和槲皮素能得到较好的
分离， 分别在 0．03～15．00 μg ／ mL（r＝0．999 0）和 0．04～20．00 μg ／ mL（r＝0．999 4）的浓度范围内与峰面积成
良好线性关系， 检测限分别为 12．6 和 15．2 ng ／ mL。 本方法操作简单、准确度高、重现性好， 可用于漆姑草
药材的质量控制，为漆姑草质量标准的制定提供依据。
关键词：漆姑草（Sagina japonica）；芦丁；槲皮素；高效液相色谱法
中图分类号：O657．7＋2 文献标识码： A 文章编号：0439－8114（2012）07－1444-03
Contents of Rutin and Quercetin in Sagina japonica（Sweet） Ohwi Determined by HPLC
GAO Zhi－xi1，WU Yan－hong1，LI Gang2，MU Qing－song1，LIU Yan1，AO Ke－hou1
（1． Laboratory of the Guizhou North’s Characteristic Resources Application / Chemistry Department of Zunyi Normal College， Zunyi 563002，
Guizhou， China； 2． School of Pharmacy， Zunyi Medical College， Zunyi 563003， Guizhou， China）
Abstract： To establish a HPLC－PDA method for the determination of rutin and quercetin in Sagina japonica （Sweet） Ohwi，
the extraction of rutin and quercetin from S. japonica by ethanol with ultrasound wave was performed． Experiments were per-
formed on C18 （Shim－pack VP－ODS 200 mm×4．6 mm） column， with MeOH and H2O （60∶40， V ／ V） which contained 0.2%
phosphoric acid as mobile phase at a flow rate of 0．8 mL ／ min． The column temperature was 30 ℃ and the determination
wavelength was 255 nm． External standard method was used and the calibration curves showed good linearity over the range of
0．03～15．00 μg ／mL（r＝0．999 0）and 0．04~20．00 μg ／ mL（r＝0．999 4） for rutin and quercetin， respectively． The detection limits
were 12．6 and 15．2 ng ／ mL for rutin and quercetin， respectively． This established method was accurate， reliable， repro-
ducible， and could be used to control the quality of S. japonica and it offered a basis for S. japonica standards．
Key words： Sagina japonica（sweet） ohwi； rutin； quercetin； RP－HPLC
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2012.07.020
第 7 期
1 材料与方法
1．1 仪器和试剂
Shimadzu LC －2010AT 型高效液相色谱仪 ，
SPD－M20A 二极管阵列检测器 （日本岛津公司）；
SY3200超声波清洗器（上海声源超声波仪器设备有
限公司）；RE－5299 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器
厂）； 电子天平 （上海越平科学仪器有限公司 ）；
DHG－9070A 型新型电热恒温鼓风干燥箱 （宁波江
南仪器厂）；自制索式提取器；植物粉碎机（20～120
目）；800 型离心沉淀器（上海手术器械厂）；微孔过
滤装置。
芦丁和槲皮素标准品（98％）均购自国药集团化
学试剂有限公司， 芦丁标准品批号：F20090702；槲
皮素标准品批号：F20090225；乙腈（色谱纯，天津市
科密欧化学试剂有限公司），甲醇（分析纯，遵义师
范学院试剂厂），盐酸（AR）、H2SO4（AR）、石灰水（自
制）、脱脂棉、无水乙醇（徐州试剂二厂），石油醚（上
海试剂一厂）。所有溶液使用前均由 0．45 μm孔径的
滤膜过滤。
收集了不同产地漆姑草药材。 经遵义医学院黎
刚老师鉴定为石竹科植物漆姑草 （Sagina japonica
（Sweet）Ohwi）的全草。
1．2 色谱条件
色谱柱：Shim－pack VP－ODS（200 mm×4．6 mm）。
流动相为甲醇∶水（含 0．2％磷酸）＝ 60∶40（V ／ V），用前
经 0．45 μm 滤膜过滤 ， 流速 0．8 mL ／ min； 柱温
30 ℃；检测波长 255 nm；进样量 20 μL。
1．3 标准溶液的配制
准确称取 0．010 0 g芦丁和槲皮素，用甲醇 （分
析纯）溶解，超声振荡 15 min，放置至室温用甲醇并
定容至 50 mL，摇匀备用。吸取已配制好的标准溶液
来配制一系列不同浓度溶液分别进样。 所有溶液使
用前均由 0．45 μm孔径的滤膜过滤。
1．4 样品前处理
将购买的漆姑草分别用粉碎机粉碎，40 目过筛
后，放在烘箱中于 65 ℃烘 10 h。 准确称取 40 g漆姑
草粉末置于索氏浸提管中， 高度不超过虹吸管，以
石油醚为脱脂剂于 45 ℃水浴锅中脱脂 20 h。充分除
去样品中脂类和脂溶性色素后， 将滤纸包取出，先
用电吹风吹干。 再置于干燥箱 65 ℃烘 2 h后。 置于
100 mL三角烧瓶中，待下一步制备［16］。
1．5 样品溶液的制备
称取脱脂的漆姑草粉末 10．00 g，置入超声破碎
仪，加入 200 mL 70％乙醇，超声破碎处理 30 min，超
声频率为 20 kHz，每工作 7 s 暂停 3 s，温度设置为
25 ℃。 抽滤，滤液减压浓缩，冷冻干燥，得粗提物［16］。
准确称取样品适量， 甲醇溶解完全后转入 50
mL 容量瓶中， 用甲醇稀释至刻度， 得到供试品溶
液。
2 结果与分析
2．1 检测波长的选择
通过 SPD－M20A 二极管阵列检测器对芦丁和
槲皮素的标准溶液进行在线扫描， 得到化合物芦
丁和槲皮素的紫外吸收光谱。 结果表明槲皮素在
255 nm和 372 nm处均有较强吸收， 芦丁在 256 nm
和 355 nm处有较强吸收。 通过试验在 255 nm 处各
物质能取得较强吸收， 故选择测定波长为 255 nm。
在该波长下进行测定， 既保证了较高的分析灵敏
度，又无干扰。
2．2 流动相的选择
黄酮类物质都微溶于水， 而溶于有机溶剂，分
别以乙腈 ／离子对溶液、乙腈 ／水、甲醇 ／离子对溶液
和甲醇 ／水体系作流动相， 对芦丁和槲皮素及其杂
质的分离效果进行考察， 当选用甲醇－水溶液作溶
剂时分离效果最佳。当甲醇∶水＞70∶30（V ／ V）时，分离
效果不好；当甲醇∶水＜50∶50（V ／ V）时，分析时间明显
增长，峰形扩展严重。 而在甲醇∶水＝60∶40（V ／ V）时，
能取得较好的分离效果， 但是色谱峰稍有拖尾现
象，通过加入 0．2％的磷酸溶液能消除峰拖尾， 本试
验选择甲醇 ∶水（0．2％磷酸）＝60∶40（V ／ V）作为流动
相。
2．3 流速的选择
随流速增加，各峰的保留时间均减少，流速在
0．3～0．8 mL ／min均能很好分离，但流速在 0．5 mL ／min
以下时，色谱峰逐渐扩展，检测灵敏度下降。 流速在
0．8 mL ／ min 以上时，芦丁峰与相邻峰重叠，分离度
下降。 在一定波长、流动相的条件下，分别测定了不
同流速时的标准芦丁和槲皮素， 发现以流速为 0．8
mL ／ min 时，芦丁和槲皮素与杂质分离完全、峰形对
称。 本试验选择实验进样流速为 0．8 mL ／ min。
2．4 线性范围及检出限
在上述色谱条件下，测定不同浓度的芦丁和槲
皮素标准品，以溶液浓度（x）与峰面积（y）作标准曲
线。 芦丁和槲皮素分别在 0．03～15．00 μg ／ mL、0．04～
20．00 μg ／ mL 范围内，浓度（x）与峰面积（y）有很好
的相关性， 回归方程为 y＝6．915×104x＋2．063×103、y＝
8．989×104x＋115．200， 相关系数分别为 0．999 0 和
0．999 4，能够满足定量分析的要求。 检出限分别为
12．6 和 15．2 ng ／ mL。 芦丁和槲皮素标准品色谱图
见图 1。
高智席等：高效液相色谱法测定漆姑草中芦丁和槲皮素含量 1445
湖 北 农 业 科 学 2012 年
（责任编辑 胡西洲）
2．5 药材的提取方法实验
取贵州产漆姑草按照 3 种不同方法制备的供
试品溶液，分别进样 20 μL，测定芦丁和槲皮素含量
（n＝5），测定平均值，采用水法提取、索氏法提取、乙
醇－超声波辅助法提取的芦丁和槲皮素含量如表 1。
2．6 重复性实验
取同一批漆姑草药材粉末 6 份， 按 1．5 制备方
法进行制备，平行测定，以芦丁和槲皮素的含量为
指标，RSD 为 2．23％和 2．14％， 表明方法重现性良
好。
2．7 稳定性实验
取供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h 测定，
结果芦丁和槲皮素峰面积的 RSD 为 1．64％和
2．01％，说明供试品溶液 24 h内稳定性良好。
2．8 方法的精密度和回收率
在选定的色谱条件下进行添加回收实验，漆姑
草样品分别以 0．01、0．05、0．10 mg ／ kg 3 个添加水
平，按照样品处理方法进行提取、净化，测定芦丁和
槲皮素含量，计算回收率。 贵州产漆姑草样中芦丁
和槲皮素添加回收率在 92．6％～99．5％，RSD（n＝3）为
1．70％～2．77％， 方法的回收率和标准偏差符合国内
外有关标准。 因此，本方法具有很高的灵敏度与精
密度，重现性好、回收率稳定，可以为漆姑草样品中
芦丁和槲皮素的测定提供参考。
2．9 样品测定
对不同产地的漆姑草样品中的芦丁和槲皮素
进行测定，漆姑草样品色谱图见图 2，结果见表 2。
3 结论
本文建立了漆姑草中芦丁和槲皮素的 HPLC－
PDA 含量分析的方法。 研究结果表明，该方法检出
限低、重现性好、精密度高，并且操作简便、快速。
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4525．
表 1 不同提取方法中芦丁和槲皮素的提取率
药品名
芦丁
槲皮素
水法提取//%
0.09
0.08
索氏法提取//%
0.21
0.20
乙醇-超声波提取//%
0.29
0.27
表 2 漆姑草样品测定结果（n=3）
产地
江苏
四川
湖南
湖北
贵州
云南
芦丁//%
0.26
0.24
0.26
0.23
0.29
0.26
槲皮素//%
0.27
0.23
0.24
0.24
0.27
0.24
0 1 2 3 4 6 8 7
保留时间//min
1 2
0 1 2 3 4 6 8 7
保留时间//min
1
2
（1.芦丁；2.槲皮素）
图 1 标准品的色谱图
（1.芦丁；2.槲皮素）
图 2 漆姑草样品的色谱图
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