全 文 ：图 1 海南臭黄荆叶挥发油的抗氧化抑制率
Fig． 1 The antioxidant activity of volatile oil
from Premnae hainanensiae Folium
于亚油酸易被空气氧化，故一般以酯的形式贮
存［12］。水蒸气提取法，索氏提取法，超声提取法
获得的挥发油中桉油醇的质量分数依次为
1. 977%，2. 401%，1. 951%。芳樟醇质量分数依次
为 1. 307%，1. 178%，0. 789%。亚油酸的质量分
数分别为 0. 862%，5. 543%，8. 194%。索氏提取
法和超声提取法具有较好的抗氧化活性可能与其提
取的挥发油中含有较多的亚油酸有关。
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HPLC法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱
赵翡翠1， 何 强1， 李 杰2*
(1. 新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000;2. 新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木
齐 830054)
收稿日期:2011-10-17
基金项目:自治区自然科学基金项目 (2011211A092) ;国家自然科学基金项目 (30960514) ;国家自然科学基金项目 (81060328)
作者简介:赵翡翠 (1973—) ，女，副主任中药师，硕士。研究方向:中药材资源及质量标准。Tel: (0991)5814127，E-mail:zhaofei-
cui000@ 163． com
* 通信作者:李 杰，副教授。Tel:13999299106，E-mail:zzffcc@ 126． com
摘要:目的 采用高效液相色谱法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱 (乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)。方法 采
用 X Bridge C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，以甲醇-水-三氯甲烷 (浓氨水调节 pH为 10. 62) (70 ∶ 30 ∶ 2)为
流动相，体积流量为 1. 0 mL /min，进样量 10 μL，检测波长为 235nm。结果 准噶尔乌头中含有乌头碱、新乌头碱和
次乌头碱，相对于已有法定药材标准的川乌药材而言，准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高，新乌头碱和次乌头碱质量
分数较低。结论 准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高，具有抗炎镇痛等药用价值，值得进一步深入研究。
关键词:准噶尔乌头;双酯型生物碱;高效液相色谱法
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)08-1552-04
Assay of diester diterpenoid alkaloids in Aconitum soongaricum by HPLC
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第 34 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2012
Vol． 34 No． 8
ZHAO Fei-cui1， HE Qiang1， LI Jie2*
(1. Department of Pharmacy，Hospital of Chinese Medicine Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China;2. College of Traditional Chi-
nese Medicine，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China)
KEY WORDS:Aconitum soongaricum;diester diterpenoid alkaloids;HPLC
准噶尔乌头为毛茛科植物准噶尔乌头 Aconitum
soongaricum Stapf的干燥块根，主要产于我国新疆
北疆地区，民间常做草乌的代用品使用，味辛、
苦，大热，有毒，具祛风散寒、止痛消肿、通经活
络的功效［1］。新疆地域辽阔，干旱高寒，生态环
境恶劣，使风湿类疾病成为新疆地区常见病、多发
病，且缠绵难愈，准噶尔乌头在治疗此类疾病方
面，有其独特的优势［2］。同时，准噶尔乌头也是
近年来生长于新疆草场的主要毒害草之一，已对新
疆畜牧业造成较大的危害。因此，有必要尽快对
准噶尔乌头的药用价值进行研究。据文献报
道［3-4］，准噶尔乌头中含有准噶尔乌头碱、12-表-
欧乌碱及 12-表-脱氢欧乌碱，而准噶尔乌头是否
含有大多数乌头属植物中所含的活性成分———双
酯型生物碱 (乌头碱、次乌头碱、新乌头碱)尚
未见报道，这将使进一步研究准噶尔乌头炮制减
毒、药理作用受到很大程度的限制。因此，本实
验采用 HPLC 方法测定准噶尔乌头中的活性成分，
为新疆准噶尔乌头药用植物资源的进一步开发和
利用奠定基础。
1 仪器与试药
Waters2695 高效液相色谱仪 (美国 Waters 公
司) ;AG—135 电子分析天平 (梅特勒-托利多仪
器有限公司) ;SK3300LH 超声清洗器 (上海科导
超声仪器有限公司) ;Direct—QTM5 超纯水仪
(Millipore公司)。乌头碱 (批号 110720-200410)、
新乌头碱 (批号 110799-200404)和次乌头碱 (批
号 110798-200404)均购于中国药品生物制品检定
所，其他试剂均为分析纯。
川乌样品分别购自安徽省亳州市双华中药饮片
厂 (批号 101001，产地:四川)、安徽省亳州市凯
利中药饮片有限公司 (批号 091210，产地:四
川)、新 疆 奇 康 哈 博 维 药 有 限 公 司 (批 号
20110501，产地:四川) ，以上样品经新疆医科大
学附属中医医院中药药学实验室李永和主任中药师
鉴定均为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaeli De-
bx． 的干燥母根。
准噶尔乌头样品于 2010 至 2011 年分别采自新
疆伊犁地区尼勒克、新源、特克斯等不同产地，共
6 批。以上样品经李永和主任中药师鉴定均为毛茛
科植物准噶尔乌头 Aconitum soongaricum Stapf． 的
干燥块根。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 采用 X Bridge
C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，以甲醇-水
-三氯甲烷 (浓氨水调节 pH为 10. 62) (70 ∶ 30 ∶
2)为流动相，体积流量为 1. 0 mL /min，进样量 10
μL，检测波长为 235 nm。理论板数按乌头碱峰计
算应不低于 2 000。结果供试品及对照品色谱分离
度良好，见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取乌头碱、
新乌头碱、次乌头碱对照品适量，置 10 mL 量瓶
中，加二氯甲烷溶解并定容至刻度，摇匀，得乌头
碱质量浓度为 0. 201 2 mg /mL，新乌头碱质量浓度
为 0. 043 2 mg /mL，次乌头碱质量浓度为 0. 041 9
mg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (粉碎后过
三号筛)约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
加 10%氨试液 4 mL，湿润，精密加入乙醚 20 mL，
超声处理 (功率 300 W，频率 40 kHz;水温在 25
℃以下)10 min，放冷，再称定质量，用乙醚补足
减失的质量，放置过夜，滤过，并用 10 mL乙醚分
3 次洗涤药渣，合并滤液，置 50 ℃水浴挥干，残
渣用二氯甲烷溶解并转移至 5 mL 量瓶中，加二氯
甲烷至刻度，摇匀，取续滤液，即得。
2. 4 线性关系的考察 分别精密吸取 2. 2 项下对
照品溶液各 0. 5、5、10、20、30、40、50、60、
70 μL，分别测定峰面积积分值。以乌头碱对照品
的进样质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐
标，进行线性回归，得乌头碱回归方程 y =
363 962x + 210 563，相关系数 r = 0. 999 9。再分别
精密吸取 2. 2 项下对照品溶液各 1、2、4、6、8、
10、12 μL，分别测定峰面积积分值。分别以新乌
头碱、次乌头碱对照品的进样质量浓度为横坐标，
峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得新乌头
碱回归方程 y = 899 741x + 305 2. 5，相关系数 r =
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图 1 HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms
A． 对照品 B． 川乌样品 C． 准噶尔乌头样品
A． reference substance B． Aconitum carmichaeli sample C． Aconitum soongaricum sample
1． 新乌头碱 2． 乌头碱 3． 次乌头碱
1． mesaconitine 2． aconitine 3． hypaconitine
0. 999 9;得次乌头碱回归方程 y = 1 478 609. 13x －
30 112. 29，相关系数 r = 0. 999 9。表明，乌头碱进
样质量浓度在 0. 100 6 ～ 14. 084 0 mg /mL、新乌头
碱进样质量浓度在 0. 043 2 ～ 0. 518 4 mg /mL、次乌
头碱进样质量浓度在 0. 041 9 ～ 0. 502 8 mg /mL 与
峰面积呈良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取 2. 2 项下对照品溶液
10 μL，连续进样 5 次，按上述色谱条件进行测定，
结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱峰面积的 RSD
分别为 0. 71%、0. 97%、1. 02%，表明精密度
较好。
2. 6 稳定性试验 按 2. 3 项下方法制备供试品溶
液 (2010 年，尼勒克县) ，精密吸取，按上述色谱
条件进行测定，每隔 2 h 进样一次，共考察 8 h，
结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱峰面积的 RSD
分别为 0. 75%、0. 82%、1. 45%，表明供试品溶
液稳定性较好。
2. 7 重复性试验 精密称取本品 6 份 (2010 年，
尼勒克县) ，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，按
上述色谱条件进行测定，结果乌头碱、新乌头碱和
次乌头碱的平均质量分数分别为 8. 531 1 mg /g，
0. 136 8 mg /g 和 0. 128 3 mg /g，RSD 分别为
1. 25%，1. 75%和 1. 70%。表明重复性较好。
2. 8 加样回收率试验 取已知量准噶尔乌头样品
(2010 年，尼勒克县)6 份，每份约 0. 5 g，精密
称定，每份分别加入 2. 2 项下对照品溶液各 1 mL，
按 2. 3 项下方法制得供试品溶液。按上述色谱条件
测定，计算回收率，结果见表 1 ～ 3。表明本测定
方法的回收率较好。
表 1 乌头碱加样回收率测定结果
Tab． 1 Recovery results of aconitine
取样量
/ g
原有量
/mg
测定量
/mg
加入对照
品量 /mg
回收率
/%
RSD
/%
0. 500 2 4. 284 7 4. 488 9 0. 201 2 101. 49
0. 501 7 4. 233 6 4. 434 2 0. 201 2 99. 70
0. 502 4 4. 214 8 4. 415 7 0. 201 2 99. 85
0. 501 9 4. 339 7 4. 539 2 0. 201 2 99. 16
0. 91
0. 501 5 4. 211 8 4. 415 3 0. 201 2 101. 14
0. 500 4 4. 308 7 4. 511 3 0. 201 2 100. 70
表 2 新乌头碱加样回收率测定结果
Tab． 2 Recovery results of hypaconitine
取样量
/ g
原有量
/mg
测定量
/mg
加入对照
品量 /mg
回收率
/%
RSD
/%
0. 500 2 0. 069 5 0. 112 6 0. 043 2 99. 77
0. 501 7 0. 069 8 0. 112 2 0. 043 2 98. 15
0. 502 4 0. 067 5 0. 111 7 0. 043 2 102. 31 1. 88
0. 501 9 0. 067 7 0. 111 5 0. 043 2 101. 39
0. 501 5 0. 066 9 0. 110 4 0. 043 2 100. 69
0. 500 4 0. 069 1 0. 111 2 0. 043 2 97. 45
表 3 次乌头碱加样回收率测定结果
Tab． 3 Recovery results of mesaconitine
取样量
/ g
原有量
/mg
测定量
/mg
加入对照
品量 /mg
回收率
/%
RSD
/%
0. 500 2 0. 063 7 0. 105 4 0. 041 9 99. 52
0. 501 7 0. 064 1 0. 106 2 0. 041 9 100. 48
0. 502 4 0. 065 7 0. 107 1 0. 041 9 98. 81
1. 330. 501 9 0. 062 8 0. 105 8 0. 041 9 102. 63
0. 501 5 0. 063 5 0. 105 5 0. 041 9 100. 24
0. 500 4 0. 065 2 0. 106 9 0. 041 9 99. 52
3 样品的测定
分别取不同产地和批次的准噶尔乌头和川乌样
品，按 2. 3 项下方法制得供试品溶液，进样 10
μL，按上述色谱条件测定，测定结果见表 4。
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表 4 测定结果 (n =3)
Tab． 4 Determination of contents (n =3)
样品来源
乌头碱 新乌头碱 次乌头碱
平均质量分数
/ (mg·g － 1)
RSD /%
平均质量分数
/ (mg·g － 1)
RSD /%
平均质量分数
/ (mg·g － 1)
RSD /%
准噶尔乌头 (2010 年，尼勒克县) 8. 488 7 0. 70 0. 137 9 1. 81 0. 129 0 1. 64
准噶尔乌头 (2011 年，尼勒克县) 11. 258 2 1. 24 0. 190 4 1. 37 0. 193 5 1. 05
准噶尔乌头 (2010 年，新源县) 4. 974 7 1. 07 0. 066 1 1. 81 0. 075 9 1. 38
准噶尔乌头 (2011 年，新源县) 9. 963 6 1. 16 0. 143 9 1. 07 0. 075 8 1. 62
准噶尔乌头 (2010 年，特克斯县) 5. 794 3 0. 91 0. 096 9 1. 00 0. 063 8 1. 08
准噶尔乌头 (2011 年，巩留县) 10. 021 4 1. 08 0. 081 6 1. 37 0. 100 7 1. 46
川乌 (双华) 0. 263 3 1. 33 0. 235 4 1. 44 0. 243 6 0. 98
川乌 (凯利) 0. 673 0 0. 87 0. 250 0 0. 79 0. 171 1 1. 23
川乌 (奇康) 0. 123 3 1. 09 0. 220 8 1. 05 0. 473 5 1. 08
4 讨论
4. 1 由于准噶尔乌头与川乌为同属植物［6］，所以
本实验测定准噶尔乌头中双酯型生物碱时先参照
《中国药典》2010 年版一部川乌项下的 HPLC 方法
进行［5］，结果图谱分离效果不理想，对照品图谱
分离效果也较差。因此，参考文献 ［7-10］对供试
品前处理方法 (包括药材粉碎粒度、药材取样量、
提取溶剂、提取方法)和流动相 ［分别采用甲醇-
水-乙腈 (67 ∶ 33 ∶ 2)、甲醇-水-三氯甲烷-氨水
(70 ∶ 30 ∶ 2 ∶ 0. 1)、甲醇-0. 3%三乙胺-三氯甲烷
(69 ∶ 30 ∶ 1)、乙腈-0. 04 mol /L 三乙胺 (pH3)
(35 ∶ 65)、乙腈-四氢呋喃 (25 ∶ 15)A-0. 1 mol /L
乙酸铵溶液 (每 1 000 mL加冰醋酸 0. 5 mL)B 等
不同流动相］进行了考察，又对初步确定的流动
相的比例进行了调整，最终确定了峰形较好、分离
度较好的色谱条件和供试品前处理方法。
4. 2 目前关于准噶尔乌头的研究报道很少，本实
验采用 HPLC法可同时测定准噶尔乌头中 3 种双酯
型生物碱 (乌头碱、新乌头碱和次乌头碱) ，经方
法学验证表明该法简便、可行。
4. 3 根据 6 批不同产地、不同采集时期的准噶尔
乌头样品测定结果表明，本品与已有法定药材标准
的川乌同样含有双酯型生物碱 (乌头碱、新乌头
碱和次乌头碱) ，其中乌头碱的质量分数高于川乌
药材约 24 倍 (取不同产地的平均值) ，新乌头碱
的质量分数约为川乌药材的 1 /2，次乌头碱质量分
数约为川乌药材的 1 /3，表明新疆准噶尔乌头中乌
头碱质量分数较高，应具有抗炎镇痛、对免疫系
统影响等药用价值［11-12］，但其与川乌所含的双酯
型生物碱各成分质量分数相差较大，其确切的药
理作用和毒性，以及与川乌药材的亲缘性仍有待
进一步深入研究。
致谢:本实验中准噶尔乌头样品采集得到了新
疆伊梨州尼勒克县草原站、新源县草原站、特克斯
县草原站的大力支持与帮助。
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