全 文 ：［基金项目］新疆维吾尔自治区卫生厅青年科技人才专项科研项目（编号：２０１３Ｙ０３）；新疆名医名方与特色方剂学实验室开放基金（编号：
ＸＪＤＸ０９１０－２０１３－１０） ［作者简介］赵翡翠，女，硕士，主任中药师，副教授，研究方向：新疆地方药材资源及炮制质量控制研究，电话：０９９１－
５８１４１２７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｚｆｆｃｃ＠１２６．ｃｏｍ ［通讯作者］吴桂荣，女，学士，教授，博士生导师，研究方向：新疆特有药材资源开发及利用，电话：０９９１－
４３１９５０６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗ４９１０３０＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ；聂继红，女，学士，教授，主任药师，硕士生导师，研究方向：中药新药研发及中药质量标准研究，电话：
０９９１－５８１０６４６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｎｊｈ４１１＠１６３．ｃｏｍ
新疆准噶尔乌头高效液相色谱指纹图谱的建立
赵翡翠１，２，闫向君３，王伟４，吴桂荣１，聂继红２ （１．新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐８３００１１；２．新疆医科大学附属中医医
院，新疆 乌鲁木齐８３００００；３．新疆吉木萨尔县中医医院，８３１７００；４．聊城市人民医院，山东 聊城２５２００２）
［摘要］ 目的：建立准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱，为新疆准噶尔乌头质量控制提供方法学依据。方法：以正交试验方法多指
标优化准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱供试品前处理方法，建立准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱，并对其主要色谱峰进行归属性鉴
别。结果：建立的指纹图谱分离度好，稳定性高，得到准噶尔乌头４个特征峰，分别是苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌
头碱和未命名化合物１。结论：建立的准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱供试品前处理方法和色谱条件可行、全面，为新疆准噶尔乌
头质量控制奠定基础。
［关键词］ 准噶尔乌头；高效液相色谱指纹图谱；正交设计；质量控制
［中图分类号］Ｒ９２７．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－５２１３（２０１５）０６－０４８５－０６ ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１５．０６．０４
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｆｏｒ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．ｆｒｏｍ Ｘｉｎｊｉａｎｇ
ＺＨＡＯ Ｆｅｉ－ｃｕｉ １，２，ＹＡＮ Ｘｉａｎｇ－ｊｕｎ３，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ ４，ＷＵ Ｇｕｉ－ｒｏｎｇ１，ＮＩＥ Ｊｉ－ｈｏｎｇ２（１．Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；２．Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ＴＣＭ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｔｏ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００００，Ｃｈｉｎａ；３．
Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｊｉｍｓａｒ Ｃｏｕｎｔｙ ＴＣＭ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｊｉｍｓａｒ ８３１７００，Ｃｈｉｎａ；４．Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ
２５２００２，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｆｏｒ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ｓｔａｐｆ．，ｐｒｏｖｉｄｅ ｍｅｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ
ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ｓｔａｐｆ．ｆｒｏｍ Ｊｕｎｇｇａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ｍｕｌｔｉ－ｉｎｄｅｘ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｍｅｔｈｏｄ
ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ａｃｏｎｉｔｕｍ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｓｐｅｃ－
ｔｒａ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｄｅｇｒｅｅ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｉｎ－
ｃｌｕｄｉｎｇ ｆｏｕｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋｓ，ｗｈｉｃｈ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｗａｓ ｂｅｎｚｏｙｌａｃｏｎｉｎｅ，ｂｅｎｚｏｙｌｈｙｐａｃｏｉｔｉｎｅ，ａｃｏｎｉｔｉｎｅ ａｎｄ ｕｎｎａｍｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
１．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．ａｒｅ ｆｅａｓｉｂｌｅ，ｃｏｍ－
ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｌａｙｓ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｏｎ Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．；ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ；ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ
准噶尔乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．）产
于我国新疆北疆地区，块根供药用，哈萨克族民间常
作草乌代用品使用，味辛、苦、大热，有毒，具祛风散
寒，止痛消肿，通经活络的功效［１－３］。本课题组前期
研究结果表明准噶尔乌头主要分布于新疆伊梨、阿
勒泰地区，蕴藏量丰富，生物碱含量高，通过炮制可
降低毒性（急性毒性），动物体内实验表明其炮制后
仍具有与盐酸曲马多和醋酸泼尼松相似的镇痛、抗
炎药理作用，却无易成瘾和激素类药物副作用，可双
向调节免疫功能，在治疗新疆常见多发的风湿类疾
病方面有独特优势［４－１０］。
因此，准噶尔乌头是一种重要的药用植物，但如
将准噶尔乌头作为药材在临床上使用，首先要建立
其法定药材标准，而建立法定药材标准之前必须明
晰其质量控制方法，虽然课题组前期采用 ＨＰＬＣ方
法测定其所含生物碱成分［１４］，但鉴于原ＨＰＬＣ测定
方法无法较全面地反映准噶尔乌头所含生物碱所有
成分的含量。因此，本文通过建立准噶尔乌头
ＨＰＬＣ指纹图谱，以便较好地进行准噶尔乌头质量
控制，为建立准噶尔乌头法定药材质量标准奠定基
础。
１ 材料器
１．１ 材料 本课题组于２０１２年９月－２０１３年９
月分别前往新疆不同地区等多个地县实地调查，采
集准噶尔乌头标本，各批次样品均由新疆医科大学
附属中医医院药研室李永和主任中药师鉴定确认为
·５８４·中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６
准噶尔乌头。各样品的具体来源见表１。
表１ １０批准噶尔乌头样品来源
Ｔａｂ １ Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ １０ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎ－
ｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．
批次 采集地 采集时间
１ 伊犁新源县 ２０１２．０７
２ 伊犁尼勒克县 ２０１２．０７
３ 伊犁巩留县 ２０１２．０７
４ 阿勒泰吉木乃县 ２０１２．０８
５ 伊犁新源县 ２０１２．０９
６ 伊犁尼勒克县 ２０１２．０９
７ 伊犁尼勒克县 ２０１３．０４
８ 伊犁新源县 ２０１３．０７
９ 伊犁尼勒克县 ２０１３．０９
１０ 伊犁巩留县 ２０１３．０９
１．２ 仪器与试剂 Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ－１６０１紫外可见
分光光度仪（日本岛津公司）；ｐＨ８６８型精密ｐＨ
计；ＣｈｅｍＰａｔｔｅｒｎ ２．０旗舰版化学指纹图谱分析系
统解决方案软件（科迈恩科技有限公司）；Ｗａ－
ｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司，四元
泵，在线脱气机，ＰＤＡ检测器）；Ｄｉｒｅｃｔ－ＱＴＭ５超
纯水仪（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司）；ＳＫ３３００ＬＨ 超声清洗器
（上海科导超声仪器有限公司）；ＳＩ－２３４电子天平
（北京丹佛仪器有限公司）；ＡＧ－１３５电子分析天平
（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）；ＸＢｒｉｄｇｅ－Ｃ１８色
谱柱。
对照品：乌头碱（中国科学院成都生物研究所，
批号 ＭＵＳＴ－１３０１２８０２，纯度≥９８％）；苯甲酰乌头
原碱（中国科学院成都生物研究所，批号 ＭＵＳＴ－
１３０５２３０５，纯度≥９８％）；苯甲酰次乌头原碱（中国科
学院成都生物研究所，批号 ＭＵＳＴ－１３０５２３０１，纯度
≥９８％）。
试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；氯仿、氨水、乙醚、盐
酸、无水乙醇、醋酸铵、三乙胺均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 正交试验优化准噶尔乌头供试品前处理方法
２．１．１ 单因素考察 在指纹色谱图中理论塔板数
（ｎ）用来评价柱效，相对保留时间（ｔＲ）评价指纹图谱
的稳定性，峰面积（Ｓ）评价提取效率；Ｏ＝Σｋ用来评
价分离优化指标。现以准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图
谱色谱峰数目（Ｎ）、主要峰相对保留时间（ｔＲ）以苯
甲酰次乌头原碱为参照峰进行计算；理论塔板数
（ｎ）；优化响应因子（Ｏ），其中Ｏ为优化响应因子，ｋ
为平均容量因子ｋ＝ｔ′Ｒ／ｔ０，ｔ′Ｒ＝ｔＲ－ｔ０；峰面积（Ｓ），
本实验中选取２个明显峰，峰１（乌头碱），峰２（未命
名化合物２）做为评价峰，Ｓ峰面积＝Ｓ峰１＋Ｓ峰
２，以上述各指标加权后为综合评价指标，进行单因
素和正交设计实验优选准噶尔乌头中生物碱的供试
品前处理方法［１１－１３］。
综合评分＝２０×Ｎ／最大 Ｎ＋（１０×ｔＲ１／最大
ｔＲ１＋１０×ｔＲ２／最大ｔＲ２）＋（１０×ｎ１／最大ｎ１＋１０×
ｎ２／最大ｎ２）＋（１０×Ｏ１／最大Ｏ１＋１０×Ｏ２／最大
ｋ２）＋（１０×Ｓ１／最大Ｓ１＋１０×Ｓ２／最大Ｓ２）
（１）供试品溶液的制备：取准噶尔乌头样品粉末
（过３号筛）约５ ｇ并精密称定，加入氨水５ ｍｌ密闭
浸润一定时间后加入５０ ｍｌ提取溶剂称定，超声
（２３℃，５３ ｋＨｚ）提取３０ ｍｉｎ后再次称定并补足相
应提取溶剂质量，过滤，滤液６０℃以下挥干；残渣加
２０ ｍｌ １％盐酸调ｐＨ 在１左右，再加入氨水调ｐＨ
在１０左右，然后用氯仿萃取３次（每次１０ ｍｌ），合并
氯仿层并在６０℃以下挥干，残渣加乙腈定容至５ ｍｌ
量瓶，微孔滤膜滤过，取续滤液。
（２）提取溶剂的考察：分别考察了１％盐酸、
７５％氨水乙醚、８５％氨水乙醚、９５％氨水乙醚、氨水、
５０％乙醇、７５％乙醇、９５％乙醇、甲醇、氯仿１０种溶
剂的提取效果，结果见表２。从指纹图谱的结果可
以看出：９５％乙醇提取效果较好，故选用９５％乙醇
为准噶尔乌头供试品前处理提取溶剂。
表２ 提取溶剂考察表
Ｔａｂ ２ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔｓ
提取
溶剂
特征
峰
总峰数
目／个
（Ｎ）
相对保
留时间
／ｍｉｎ（ｔＲ）
理论塔
板数
（ｎ）
优化响
应因子
（Ｏ）
峰面积
（Ｓ）
综合
评分
１％ 峰１ ２１ ０．６０ １ ３６９．０９ ３２４．１３ ７４９ ３９４５９．５１
盐酸 峰２ １．５０ ３ ７９３．６０ ２５６．７８ ２０６ ８１４
７５％氨 峰１ １２ ０．７８ ２ ８１８．７７ １ ６０４．８６ ３４４ ５７１６８．８６
水乙醚 峰２ １．２５ ５ ４６０．４８ ５６７．０７ ４３ ３４６
８５％氨 峰１ １３ １．１０ ５６．８８ １ ５２９．９８ ８２３ ２５９５６．２４
水乙醚 峰２ １．６８ ５ ３４２．３２ ５５２．２１ １５２ ６３１
９５％氨 峰１ １７ ０．９１ ３５．２１ １６２．０７ ９１０ ２３８４７．５８
水乙醚 峰２ １．７８ ４ ６８０．４８ ２８５．７５ １８１ ０３７
氨水
峰１ １７ ０．９６ １ ９２７．３５ ２０５．９９ ４３１ １１１６２．２０
峰２ １．２３ ５ ５７８．１１ ５９３．９０ ９１ １４０
５０％ 峰１ １７ １．９３ １ ９００．８８ ４２５．６６ １ ６３９ ９２４６１．２４
乙醇 峰２ １．７３ ４ ９３９．９８ ３１９．７８ ８７５ ９７２
７５％ 峰１ １９ ０．７３ １ ７２２．９４ ４０４．５６ １ ４１２ ３４８６９．５６
乙醇 峰２ １．２６ ４ ８０１．００ ３１５．１７ １ １８０ ６２５
９５％ 峰１ ２０ ２．３３ １ ６４１．４９ ４０１．９７ ３ ２００ １１２７３．９９
乙醇 峰２ ３．１８ ４ ８５０．４７ ５０５．８０ １ ８９１ ４９６
甲醇 峰１ １８ ２．３１ １ ４４９．９３ １ ７３３．６３ ２ ６１２ ４７８６９．９４
峰２ ２．１３ ４ ７３３．０３ ２８７．６１ １ ４７０ ６７７
氯仿
峰１ １５ １．４０ １ ６６３．８９ １ ４５８．５５ ４３４ １８９６２．８３
峰２ １．２６ ５ ２２０．７７ ４９２．１２ ２２６ ８１３
（３）提取方法的考察：固定提取溶剂为９５％乙
醇，提取时间为０．５ ｈ，碱化ｐＨ值为１０，酸化ｐＨ值
为１，分别考察超声波提取，减压回流提取，索式回
流提取（７０℃水浴），冷浸法提取（提取时间为静置
２４ ｈ）４种提取方法的优劣，结果见表３。从指纹图
谱的结果优选出超声波提取法，索式回流提取法和
减压回流提取法进入正交设计试验中。
（４）ｐＨ 值的考察：在确定上述条件下，固定碱
化ｐＨ为１０改变酸调ｐＨ值；固定酸化ｐＨ为１改
·６８４· 中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６
表３ 提取方法考察表
Ｔａｂ ３ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ
提取
方法
特征
峰
总峰数
目／个
（Ｎ）
相对保
留时间
／ｍｉｎ（ｔＲ）
理论塔
板数
（ｎ）
优化响
应因子
（Ｏ）
峰面积
（Ｓ）
综合
评分
超声 峰１ ３２ １．７６ １ ７９８．２６ ４０１．０８ ５２ ６３６ ６０９８８．６５
提取 峰２ ３．１９ ２ ０８６．７３ ９２７．１５ １０ ５４６ ０３８
减压回 峰１ ３１ １．８０ ２ ８５６．７１ ４０６．９０ ２６ ３５１ ６８６８２．５０
流提取 峰２ ３．２０ ３ ６７１．８０ ７８８．８８ ５ ８３６ ８０６
索式回 峰１ ３１ １．７５ １ ３５２．１３ ３９４．７４ ４９ １４８ ３２２８６．１２
流提取 峰２ ２．６５ ２ ２０３．７６ ８７３．７４ ７ ９９９ ５２２
冷浸法 峰１ ３１ １．７５ ２ ２８７．５８ ２６７．８７ ２１ ０００ ９６６８１．３６
提取 峰２ ３．０１ ４ ６１１．４８ ５８５．８０ ６ ６６４ ４９４
变碱化ｐＨ值。分别对酸调ｐＨ值（ｐＨ１，２，３）和碱
化ｐＨ值（ｐＨ１０，１１，１２）进行考察，从指纹图谱的
结果来看酸水ｐＨ 值对色谱图的影响较大，碱化影
响不明显；故将碱化值确定为１０，将酸调ｐＨ 值列
入正交试验中，结果见表４。
表４ ｐＨ的考察表
Ｔａｂ ４ ｐＨ ｖａｌｕｅｓ
ｐＨ
特征
峰
总峰数
目／个
（Ｎ）
相对保
留时间
／ｍｉｎ（ｔＲ）
理论塔
板数
（ｎ）
优化响
应因子
（Ｏ）
峰面积
（Ｓ）
综合
评分
１ 峰１ ３２ １．８７ ８ ８４６．２０ ３７３．７９ ４３ ６１３ ７１５ ８６．６０
峰２ ３．３５ ２ ６７７．５８ ８５２．１８ ７ ４１７ ５７４
２ 峰１ ２６ １．７１ １ ５０７．２５ ３７９．１８ ５ ９５７ ３６３ ６０．４０
峰２ ２．６６ ５ ６７６．３０ ６６４．９５ ２ ５２０ ６５６
３ 峰１ ２７ １．７６ １ ５９５．８４ ３９５．９８ １３ ９８２ ３７１ ７８．３９
峰２ ２．７０ ５ ２１１．３０ ７０９．５６ １１ ３５１ ２９３
１０ 峰１ ２９ ２．６０ １ ８１５．２３ ３９０．６２ ２５ ７９９ ０５０ ９３．８８
峰２ ３．１８ ３ ６３９．０４ ７９７．３５ ６ ３８９ ３１０
１１ 峰１ ２７ ２．８０ １ ８９０．０１ ３９６．５４ ２４ ５４４ ７１２ ９１．９５
峰２ ３．１８ ３ ８１０．３８ ７９５．２６ ５ ５９４ ７２５
１２ 峰１ ２９ ２．１６ １ ７３７．４９１３９２．０７ ９ ５０１ ５１０ ８６．９４
峰２ ２．６６ ５ ５３０．５５４６９４．１２ ３ ５０３ ４１３
（５）提取时间的考察：分别考察提取０．５，１，２，４
ｈ的提取效果，综合指纹图谱的结果将综合评分略
高的提取时间分别为０．５，１，２ ｈ进入正交设计试验
中，结果见表５。
表５ 提取时间考察表
Ｔａｂ ５ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅｓ
提取
时间
／ｈ
特征
峰
总峰数
目／个
（Ｎ）
相对保
留时间
／ｍｉｎ（ｔＲ）
理论塔
板数
（ｎ）
优化响
应因子
（Ｏ）
峰面积
（Ｓ）
综合
评分
０．５ 峰１ ３８ ２．２５ １ ６３５．１７ ３５９．８４ ４５ ８８４ ４８１９１．３２
峰２ ３．１０ ２ ８１０．８７ ８７２．１８ ８ ０２８ ５２２
１ 峰１ ３４ ２．１１ ２ ４５０．４５ ３７６．６２ ４２ １９０ ０３８９３．７２
峰２ ３．０１ ２ ５９０．９１ ８８２．７７ ８ ６９８ ３９０
２ 峰１ ３１ ２．２０ ２ ４７９．２０ ３８４．０７ ４５ ８３７ ４９１９３．０６
峰２ ３．７１ ２ ４０８．３３ ８９８．０３ ９ ０６９ ７９３
４ 峰１ ３１ ２．０５ ２ ２８０．５０ ３７１．９２ ４３ ７９５ １００８４．４０
峰２ ３．５８ ２ ４９０．１７ ８９１．１２ ９ ６６０ ０１６
２．１．２ 正交试验 由单因素实验结果筛选出影响
准噶尔乌头指纹图谱供试品前处理提取效率比较大
的因素为：酸水ｐＨ 值、提取方法、提取时间，分别
各有３个水平，以酸化ｐＨ值（Ａ）、提取方法（Ｂ）、提
取时间（Ｃ）３个因素，采用Ｌ９（３）４正交设计表进行
试验，结果见表６～８，方差分析见表９。
表６ 因素水平表
Ｔａｂ ６ Ｆａｃｔｏｒ ｌｅｖｅｌｓ
水平
因素
Ａ Ｂ Ｃ
１ １ 超声波提取 ０．５ ｈ
２ ２ 减压回流提取 １ ｈ
３ ３ 索式回流提取 ２ ｈ
表７ Ｌ９（３）４正交设计及试验结果
Ｔａｂ ７ Ｌ９（３）４ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ
试验号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 综合评分
１ １ １ １ １ ８７．９９
２ １ ２ ２ ２ ７６．８６
３ １ ３ ３ ３ ７３．８６
４ ２ １ ２ ３ ６４．０２
５ ２ ２ ３ １ ５１．７７
６ ２ ３ １ ２ ５１．４４
７ ３ １ ３ ２ ５１．６９
８ ３ ２ １ ３ ４３．５０
９ ３ ３ ２ １ ５３．０９
ｋ１ ２３８．７ ２０３．７ １８２．９３ １９２．８５
ｋ２ １６７．２３ １７２．１３ １９３．９７ １７９．９９
ｋ３ １４８．２８ １７８．３９ １７７．３２ １８１．３８
Ｒ ９０．４３ ３１．５７ １６．６５ １２．８６
表８ 正交试验数据表
Ｔａｂ ８ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｄａｔａ
试验
号
特征
峰
总峰数
目／个
（Ｎ）
相对保
留时间
／ｍｉｎ（ｔＲ）
理论塔
板数
（ｎ）
优化响
应因子
（Ｏ）
峰面积
（Ｓ）
综合
评分
１
峰１ ２５ ２．６１ ９ ３５４．６２ ４１２．４４ ３７ ４０６ ５４６８７．９９
峰２ ３．１８ ２ ５７６．８４ ８２３．５６ ８ ７５９ ８６６
２
峰１ ２３ ２．２５ １ ０１３．４３ ３３６．７４ １２ ２０４ ３８０７６．８６
峰２ ３．３１ １ ８４８．４７ ９４０．４１ ５１ ２００ ６３５
３
峰１ ３３ １．２５ ９ ７４４．４０ ２８５．０２ ６ ４４０ ８９０７３．８６
峰２ １．９１ １ ６８３．０２ ８００．１５ ３７ ３３８ １０６
４
峰１ ２５ １．６５ １ １２０．０４ ３６４．１４ ７ ０８２ ７１５６４．０２
峰２ ２．５３ １ ８４８．８４ ７６６．１１ ２７ ７４０ ２５７
５
峰１ ２０ １．２３ １ ５０９．２３ ３４８．３７ １ ４５４ ８７５５１．７７
峰２ ２．７８ ２ ３４３．９８ ６７２．２９ ５ ５９７ ９９６
６
峰１ ２６ ０．７６ ４３．６５ ３４３．８４ １ ７４５ ４４９５１．４４
峰２ ２．３０ ２ １９２．９９ ８０７．９２ ３ ３２９ ３５７
７
峰１ ２４ １．４８ １ １８９．３５ ２７１．１５ ２ ８３６ １１２５１．６９
峰２ ２．２３ １ ９８６．６８ ６５９．６６ ６ ６０２ ００４
８
峰１ １８ １．３６ １ １７９．８９ ２５２．４６ １ ５９１ ０７９４３．５０
峰２ １．９６ １ ５９５．４４ ６７８．８８ ３ ０４４ ６１１
９
峰１ ２１ １．４８ ４８．２３ ３２５．１７ ３ ４６３ ５６２５３．０９
峰２ ２．２６ ２ ５０５．９８ ７０３．６９ ６ ７０８ ９８８
表９ 正交试验方差分析表
Ｔａｂ ９ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅ－
ｓｉｇｎ
变异来源 ＳＳ Ｖ ＭＳ Ｆ Ｐ值
Ａ １ ５１６．２３ ２ ７５８．１１ ４５．６５ ０．０２
Ｂ １８６．２７ ２ ９３．１３ ５．６０ ０．１５
Ｃ ４７．８４ ２ ２３．９２ １．４４ ０．４０
误差 ３３．２０ ２ １６．６０
总变异 １ ７８３．５５ ８
由正交设计试验直观结果可知 Ａ１Ｂ１Ｃ２为最佳
组合，但方差分析结果表明影响供试品提取的各因
素主次为Ａ＞Ｂ＞Ｃ，Ｂ、Ｃ因素差异无统计学意义，
为提高试验效率确定最佳提取方法为 Ａ１Ｂ１Ｃ１，即：
·７８４·中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６
酸调ｐＨ１，超声提取０．５ ｈ。
２．１．３ 验证试验 按上述最优条件取第１０批准噶
尔乌头样品制备３批供试品进样，对最佳工艺作一验
证，验证结果如下，表明准噶尔乌头供试品前处理方
法基本稳定。根据以上正交试验优化结果，确定供试
品最佳制备方法为：９５％乙醇超声提取０．５ ｈ后６０℃
以下挥干，酸调ｐＨ１后，氨水碱化ｐＨ值到９～１０，氯
仿萃取３次后６０℃以下挥干，乙腈溶解，待用。
２．２ 色谱条件 色谱柱：ＸＢｒｉｄｇｅＴＭ－Ｃ１８（２５０
ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ）；填充剂：十八烷基硅烷键合
硅胶；流动相：乙腈（Ａ）－０．０５ ｍｏｌ·Ｌ－１醋酸胺（调
ｐＨ为７．２５）（Ｂ）梯度洗脱（洗脱程序见表１０）；检测
波长：２３５ ｎｍ；流速：１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１；柱温：３０℃；进
样量：１０μｌ。
表１０ 梯度洗脱程序
Ｔａｂ １０ Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒａｍ
流动相
时间／ｍｉｎ
０ ６０ １００ １２０
Ａ乙腈／％ ２５ ３０ ３５ ４５
Ｂ０．０５ ｍｏｌ·Ｌ－１醋酸胺／％ ７５ ７０ ６５ ５５
２．３ 对照品溶液的制备 分别取乌头碱、苯甲酰乌
头原碱、苯甲酰次乌头原碱适量对照品并精密称定，
用色谱乙腈定容分别配制成质量浓度为４．００，０．５２，
０．３０ ｍｇ·ｍｌ－１的对照品溶液，再依次梯度配制成不
同浓度的对照品溶液备用，见表１１。
表１１ 对照品浓度 （ｍｇ·ｍｌ－１）
Ｔａｂ １１ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ（ｍｇ·ｍｌ－１）
成分 乌头碱 苯甲酰乌头原碱 苯甲酰次乌头原碱
１ ０．０４０ ０ ０．０２６ ０ ０．０１０ ０
２ ０．２００ ０ ０．１０４ ０ ０．０３０ ０
３ １．００００ ０．２０８ ０ ０．１２０ ０
４ ２．００００ ０．３１２ ０ ０．１８０ ０
５ ３．００００ ０．４１６ ０ ０．２４０ ０
６ ４．００００ ０．５２０ ０ ０．３００ ０
２．４ 供试品溶液的制备 取准噶尔乌头样品粉末
（过３号筛）约５ ｇ并精密称定，加入氨水５ ｍｌ密闭
浸润后加入５０ ｍｌ ９５％乙醇，称定，超声（２３℃，５３
ｋＨｚ）提取３０ ｍｉｎ后再次称定，并用无水乙醇补足，
过滤，滤液６０℃以下挥干；残渣加２０ ｍｌ １％ＨＣｌ调
ｐＨ在１左右，再加入氨水调ｐＨ在１０左右，然后用
氯仿萃取３次（每次１０ ｍｌ），合并氯仿层并６０℃以
下挥干，残渣加乙腈定容至５ ｍｌ量瓶，微孔滤膜滤
过，取续滤液即得。
２．５ 方法学考察
２．５．１ 线性关系考察 取“２．３”项下不同浓度对照
品溶液按“２．２”项下色谱条件分别进样，记录峰面积
值，以质量浓度（ｍｇ·ｍｌ－１）为横坐标（Ｘ），峰面积为
纵坐标（Ｙ）进行线性回归，得乌头碱回归方程为：Ｙ
＝１１ ３８８ ０２６．８５ Ｘ－４０９ １２４．８４（ｒ＝０．９９９ １）；苯
甲酰乌头原碱回归方程为：Ｙ ＝７ ９９４．６０ Ｘ－
２９ １９１．００（ｒ＝０．９９９ ５）；苯甲酰次乌头原碱回归方
程为：Ｙ＝１１ ９２１ Ｘ－３６ ３１５（ｒ＝０．９９９ ６），结果表
明乌头碱在０．０４０ ０～４．００００ｍｇ·ｍｌ－１、苯甲酰乌
头原碱在０．０２６ ０～０．５２０ ０ ｍｇ·ｍｌ－１、苯甲酰次乌
头原碱在０．０１０ ０～０．３００ ０ ｍｇ·ｍｌ－１与峰面积呈良
好的线性关系。对照品和供试品色谱图呈现良好的
分离度，见图１。
Ａ．混合对照品；Ｂ．准噶尔乌头；１－苯甲酰新乌头原碱；２－苯甲酰乌头
原碱；３－苯甲酰次乌头原碱；４－氢溴酸高乌甲素；５－新乌头碱；６－乌头
碱混合对照品
Ａ．ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｏｆ ｒｅｎｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔｒａｎｃｅ；Ｂ．Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ
Ｓｔａｐｆ．１－ｂｅｎｚｏｙｌｍｅｓａｃｏｎｉｎｅ；２－ｂｅｎｚｏｙｌａｃｏｎｉｎｅ；３－ｂｅｎｚｏｙｌｈｙｐａｃｏｉｔｉｎｅ；
４－ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｅ Ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ；５－ｍｅｓａｃｏｎｉｔｉｎｅ；６－ａｃｏｎｉｔｉｎｅ
图１ 准噶尔乌头高效液相色谱图
Ｆｉｇ １ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ａｃｏ－
ｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．
２．５．２ 精密度试验 取“２．３”项下对照品溶液，混
合对照品浓度见表１１，按“２．２”项下色谱条件连续
进样６次，计算３种化合物峰面积的 ＲＳＤ分别为
２．２４％，１．５６％，２．２５％，结果显示仪器精密度较高。
２．５．３ 重复性试验 精密称取１０号准噶尔乌头药
材６份，按“２．４”项下制备供试品溶液，以“２．２”项
下色谱条件进样，测定苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌
头原碱、乌头碱的峰面积，ＲＳＤ 分别为２．０６％，
１．１６％，２．５７％，结果表明本方法的重复性较好。
２．５．４ 稳定性试验 取１０号准噶尔乌头药材约５
ｇ，精密称定，按“２．４”项下制成供试品溶液，按“２．２”
项下色谱条件分别在０，４，８，１４，２０，２４ ｈ进样１０
μｌ，记录色谱峰面积，计算苯甲酰乌头原碱、苯甲酰
次乌头原碱、乌头碱的峰面积ＲＳＤ分别为２．７７％，
１．６１％，２．０８％，结果表明供试品溶液在２４ ｈ内稳
定性良好。
２．５．５ 加样回收率试验 取第９批尼勒克准噶尔
乌头药材约５ ｇ，精密称定，按“２．４”项下制成供试品
溶液，分别加入３种不同浓度的乌头碱、苯甲酰乌头
原碱、苯甲酰次乌头原碱对照品，以“２．２”项下色谱
条件进样测定，计算加样回收率，结果分别为
１００．７８％，９９．９８％，１０１．０９％，ＲＳＤ分别为０．９９％，
０．８９％，１．０２％，表明回收率良好。
２．６ 含量测定 取１０批准噶尔乌头药材各约５ ｇ，
·８８４· 中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６
按“２．２”项下色谱条件平行测定３次，结果见表１２。
表１２ 准噶尔乌头中生物碱成分含量测定结果
Ｔａｂ １２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎ－
ｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ
样品
取样量
／ｇ
乌头碱
／ｍｇ·ｇ－１
苯甲酰乌头原碱
／ｍｇ·ｇ－１
苯甲酰次乌头原碱
／ｍｇ·ｇ－１
１ ５．００３ ９ ０．５７８ ５ ０．０６３ ８ ０．０６０ ７
２ ５．００３ ９ ０．５５１ ７ ０．０６０ ６ ０．０６０ ９
３ ５．００３ ９ ０．５１７ ２ ０．００８ ３ ０．０６１ ５
４ ５．００３ ６ ０．３９３ １ ０．０４５ ５ ０．０６０ ３
５ ５．００３ ６ ０．３８７ ３ ０．０１６ ３ ０．０６３ ０
６ ５．００３ ６ ０．３８８ ０ ０．０７２ ５ ０．０６５ ６
７ ５．００４ ０ ０．５２８ ３ ０．０９４ ６ ０．０８０ ７
８ ５．００４ ０ ０．５３６ ２ ０．０５２ ４ ０．０８０ ２
９ ５．００４ ０ ０．５５０ ４ ０．０６２ ５ ０．０６０ ７
１０ ５．００３ ６ ０．３２３ ７ ０．０２９ ０ ０．０２９ ８
２．７ 指纹图谱的建立 将上述“２．６”所得１０批次
的准噶尔乌头色谱图图谱转化为ＣＤＦ格式后导入
ｃｈｅｍＰａｔｔｅｍ化学指纹图谱分析系统解决方案软件
（旗舰版），考察各图谱间色谱峰之间的分离匹配程
度及经标准化后数据匹配情况，在上述结果基础上，
将所得图谱由ｃｈｅｍＰａｔｔｅｍ化学指纹图谱分析系统
解决方案软件（旗舰版）生成准噶尔乌头共有模式图
谱，结果见图２。选取色谱峰面积占总峰面积３％以
上且分离度较好的色谱峰为共有峰，提取准噶尔乌
头４ 个特征峰 （该 ４ 个峰为色谱峰总面积的
８４．３８％），分别是１苯甲酰乌头原碱，２苯甲酰次乌
头原碱，３乌头碱，４未命名化合物１，并以苯甲酰次
乌头原碱为参照峰计算相对保留时间和相对保留峰
面积，结果见表１３～１５，采用夹角余弦法对各样品
与共有模式对照指纹图谱进行整体相似度评
价［１４－１５］，结果见表１６。
３ 讨论
本研究以准噶尔乌头指纹图谱的峰数目、峰形、
柱效、分离度及峰面积等多指标对准噶尔乌头生物
碱指纹图谱进行综合评价，筛选出准噶尔乌头中生
物碱提取的最佳工艺和 ＨＰＬＣ指纹图谱色谱条件，
所得图谱分离度好、稳定性高，为相类似植物中活性
Ａ．１０批样品叠加色谱图；Ｂ．共有模式图
Ａ．１０ ｂａｔｃｈｅｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｏｖｅｒｌａｙ ｃｈａｒｔ；Ｂ．Ｃｏｍｍｏｎ ｍｏｄｅｌ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
图２ 准噶尔乌头高效液相指纹图谱色谱图
Ｆｉｇ ２ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ
Ｓｔａｐｆ
表１３ 准噶尔乌头指纹图谱的保留时间及峰面积
Ｔａｂ １３ Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ ｐｅａｋ ａｒｅａｓ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
ｐｅａｋｓ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ
峰号 保留时间／ｍｉｎ 峰面积 峰面积／％ 组分名称
１ ３．０６７ ３ ７７．８６７ ９ ０．９６ －
２ ４．６８３ ９ ４４７．４３４ ４ ５．４９ －
３ ５．４６７ ３ ４２３．９８５ ３ ５．２０ －
４ ６．４１７ １ ２５９．７４２ ６ ３．１９ －
５ ３４．０９８ ５ ５８２．４８６ ８ ７．１５ 苯甲酰新乌头原碱
６ ４０．６５８ ３ ５８３．４５５ ３ ７．１６ 苯甲酰次乌头原碱
７ ６６．３１７ ４ ６４．１８０ １ ０．７９ －
８ １０６．３２１ ９ ４９２９．６９６ ０ ６０．４８ 乌头碱
９ １２８．７５６ ７ ７８１．６６０ ９ ９．５９ 未命名化合物１
成分 ＨＰＬＣ图谱的建立，如供试品前处理方法、色
谱条件的确定等方法提供了依据。
本文考虑到准噶尔乌头中活性成分的极性差
异，因此针对梯度洗脱系统做了大量的考察和对比，
包括甲醇－水、乙腈－水、甲醇－氯仿－水、乙腈－醋酸氨
等系统，经比较和分析不同洗脱系统下的色谱图分
离度和峰形，表明乙腈－醋酸氨系统分离效果较好，
故确定其为流动相体系进行梯度洗脱。同时发现在
表１４ １０批准噶尔乌头样品指纹图谱的相对保留时间
Ｔａｂ １４ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋｓ ｏｆ １０ ｂａｔｃｈｅｓ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．
样品
共有峰
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１ ０．０７５ ８ ０．１１５ ２ ０．１３４ ５ ０．１６８ ２ ０．８３０ ４ １ １．６００ ３ ２．６０３ ９ ３．１６７ ７
２ ０．０７４ １ ０．１１７ ８ ０．１２２ ３ ０．１５４ ７ ０．８４０ ８ １ １．６００ ９ ２．６１５ １ ３．１６５ ８
３ ０．０７７ ５ ０．１１６ ７ ０．１３２ ７ ０．１５９ ８ ０．８３９ ８ １ １．６２０ ９ ２．６０４ １ ３．１６４ ２
４ ０．０７５ ５ ０．１１６ ９ ０．１３４ ８ ０．１５９ １ ０．８３６ ４ １ １．６３５ １ ２．６２０ ３ ３．１６８ ９
５ ０．０７８ ３ ０．１１４ ９ ０．１３９ ９ ０．１５６ １ ０．８４１ ６ １ １．６８０ ２ ２．６０５ ３ ３．１５９ ５
６ ０．０７４ ４ ０．１１６ ９ ０．１３２ ４ ０．１５４ ５ ０．８３０ ６ １ １．６４５ ９ ２．６１６ ３ ３．１９５ ４
７ ０．０７６ ９ ０．１２０ ８ ０．１３５ ４ ０．１５４ ９ ０．８３０ ９ １ １．６０９ ６ ２．６０５ ５ ３．１５７ ９
８ ０．０７８ ８ ０．１０２ ７ ０．１３６ ５ ０．１５３ ３ ０．８３７ ９ １ １．６３７ ５ ２．６５３ ４ ３．１７９ ４
９ ０．０７１ ３ ０．１１１ ７ ０．１３６ ４ ０．１５７ ８ ０．８５９ ６ １ １．６３５ ７ ２．６００ ５ ３．１２０ ８
１０ ０．０７１ ８ ０．１１８ ４ ０．１３９ ８ ０．１５９ ９ ０．８３８ ６ １ １．６４４ ８ ２．６２５ ７ ３．１８８ ４
ＲＳＤ／％ ３．４０ ４．３４ ３．７０ ２．７６ １．０１ ０．００ １．４９ ０．６１ ０．６４
·９８４·中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６
表１５ １０批准噶尔乌头样品指纹图谱的相对保留峰面积
Ｔａｂ １５ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋｓ ｏｆ １０ ｂａｔｃｈｅｓ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ．
样品
共有峰
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１ ０．１３３ ９ ０．７９０ ８ ０．７２９ ８ ０．４４５ ６ ０．９９８ ６ １ ０．１１９ １ ８．４４８ ６ １．３４６ ７
２ ０．１２７ ７ ０．７６６ ９ ０．７２８ ９ ０．４４９ ３ １．００３ ７ １ ０．１１０ ９ ８．５８２ ９ １．３５４ ９
３ ０．１３６ ９ ０．７４１ ２ ０．７２１ ４ ０．４５２ ９ ０．９７０ ８ １ ０．１１６ ７ ８．４４０ ９ １．３２４ ８
４ ０．１３５ ８ ０．７６６ ８ ０．７２６ ４ ０．４２４ ７ １．００４ ７ １ ０．１０５ ９ ８．５０９ ３ １．３２６ ５
５ ０．１３６ ６ ０．７６２ ９ ０．７２３ ４ ０．４３４ ７ ０．９９８ ５ １ ０．１１６ ９ ８．３００ ７ １．３３０ ７
６ ０．１３３ ９ ０．７６１ １ ０．７２１ ９ ０．４３８ ９ ０．９９９ １ １ ０．１００ ４ ８．４４９ ７ １．３４０ ９
７ ０．１３２ ４ ０．７８５ ５ ０．７２４ ３ ０．４６８ ８ １．００３ ８ １ ０．１１０ ７ ８．４６７ ９ １．３３５ ５
８ ０．１３３ ８ ０．７６６ ８ ０．７０７ ８ ０．４４３ ７ ０．９９６ ８ １ ０．１１３ ７ ８．４３０ ６ １．３３６ ７
９ ０．１３１ ７ ０．７６０ ９ ０．７３９ １ ０．４４７ ９ １．０１２ ６ １ ０．１０５ ２ ８．４１０ ７ １．３４２ ８
１０ ０．１３１ ９ ０．７６５ ８ ０．７４３ ８ ０．４４５ ３ ０．９９４ ８ １ ０．１００ ５ ８．４５０ １ １．３５７ ６
ＲＳＤ／％ ２．０５ １．７７ １．３７ ２．６１ １．１０ ０．００ ６．１６ ０．８４ ０．８３
表１６ 准噶尔乌头指纹图谱相似度分析结果
Ｔａｂ １６ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｏｆ １０ ｂａｔｃｈｅｓ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ
样品名称
相似度（同各自对照指纹图谱比较）
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ 平均值
生品 ０．９８ ０．８４ ０．９０ ０．９６ ０．９９ ０．９９ ０．９９ ０．９８ ０．９８ ０．９９ ０．９６
流动相中加入二乙胺可以改善色谱峰拖尾现象，但
二乙胺的长时间加入会破坏生物碱专用柱的固定
相，故应加预柱保护，在冲洗柱子时调温度为４０℃
更利于生物碱残留成分的洗出，从而保持生物碱专
用柱的柱效。本实验中确定的测定系统条件使准噶
尔乌头中各成分色谱峰清晰，分离度较好，稳定性和
精密度等方法学考察均符合要求，表明该方法可行，
操作简便。
本文建立的准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱法同时
测定了乌头碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱
的含量，方法可行，操作简便，可用于准噶尔乌头中活
性成分的测定和质量控制。但不同批次的准噶尔乌
头中所含成分的含量有一定差异，可能与植物分布地
域、采收季节有关，但１０批准噶尔乌头中乌头碱含量
均较高，且发现了１种未命名化合物，可能是准噶尔
乌头中专属性成分，值得进一步深入研究。
本文建立的 ＨＰＬＣ指纹图谱还可用于不同乌
头属植物间化学成分亲缘关系的比较研究。课题组
拟利用 ＨＰＬＣ指纹图谱比较乌头属植物准噶尔乌
头、白喉乌头、川乌、草乌的指纹图谱区分同属不同
种植物在化学成分方面的差异性，并以４种乌头属
植物均含有的苯甲酰次乌头碱为参照峰，因此，本文
中准噶尔乌头 ＨＰＬＣ指纹图谱也以苯甲酰次乌头
碱为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积，特此
说明。
致谢：本研究得到科迈恩科技有限公司田润涛
先生开发ＣｈｅｍＰａｔｔｅｒｎ ２．０旗舰版化学指纹图谱分
析系统解决方案软件的大力技术支持，在此深表谢
意。
参考文献：
［１］ 吾买尔夏提，魏岩．新疆药用乌头的民族植物学［Ｊ］．中国野生
植物资源，２００４，２３（４）：２９－３０．
［２］ 新疆生物土壤沙漠研究所．新疆药用植物志（第一册）［Ｍ］．乌
鲁木齐：新疆人民出版社，１９７７，５８－６２．
［３］ 新疆植物志编辑委员会．新疆植物志（第一卷，第二册）［Ｍ］．乌
鲁木齐：新疆科技卫生出版社，１９９９，２３１－２４２．
［４］ 赵翡翠，陈良，李杰．新疆乌头属药用植物资源调查Ⅰ［Ｊ］．时珍
国医国药，２０１１，２２（１１）：２７６１－２７６２．
［５］ 赵翡翠，付玲，吴超．准噶尔乌头及其炮制品对ＡＡ大鼠治疗作
用的实验研究［Ｊ］．中药材，２０１２，３５（１０）：１５７２－１５７６．
［６］ 赵翡翠，李杰，吴超．新疆准噶尔乌头及其炮制品对ＣＩＡ大鼠
治疗作用的实验研究［Ｊ］．中国现代应用药学，２０１２，２９（１２）：
１０６１－１０６６．
［７］ 吴超，赵翡翠，姜林．新疆准噶尔乌头及其炮制品的急性毒性和
镇痛作用研究［Ｊ］．新疆医科大学学报，２０１２，３５（２）：１９７－２０２．
［８］ 赵翡翠，姜林，刘淑敏．新疆乌头属植物中双酯型生物碱的含量
测定［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１２，３２（２０）：１６０３－１６０６．
［９］ 赵翡翠，李杰，刘淑敏，等．新疆乌头属植物高效薄层色谱指纹
图谱研究［Ｊ］．中国药学杂志，２０１３，４８（７）：５１２－５１７．
［１０］赵翡翠，卢军，姜林，等．新疆准噶尔乌头及其炮制品对小鼠免
疫功能影响研究［Ｊ］．中华中医药杂志，２０１３，２８（７）：２１５９－
２１６３．
［１１］谢培山．中药色谱指纹图谱［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００５：
２．
［１２］Ｚｈａｎｇ Ｑｉｎｇ－Ｆｅｎｇ，Ｃｈｅｕｎｇ Ｈｏｎ－Ｙｅｕｎｇ，Ｚｅｎｇ Ｌｉｎｇ－Ｂｉｎ．Ｄｅｖｅｌ－
ｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｆｏｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｑｕａｌｉｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｍａ Ｓｍｉｌａｃｉｓ Ｇｌａｂｒａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１３，６７（１）：２０７－２１１．
［１３］Ｌｕ Ｆｅｎｇｌａｉ，Ｌｉ Ｄｉａｎｐｅｎｇ，Ｆｕ Ｃｈｕａｎｍｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ
ｃｈｅｍｉｃａｌ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｏｆ Ｓｉｒａｉｔｉａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ ｆｒｕｉｔｓ（Ｌｕｏ Ｈａｎ
Ｇｕｏ）ｂｙ ＨＰＬＣ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１２，６６（１）：
７０－７６．
［１４］张丹，朱伟，余昕，等．车前子不同炮制品化学特征指纹图谱模
式的比较［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１４，３４（６）：４５６－４５９．
［１５］朱丽，卢化，李肖爽，等．香荚兰豆药材指纹图谱的研究［Ｊ］．中
国医院药学杂志，２０１４，３４（４）：３００－３０２．
［收稿日期］２０１４－０７－０９
·０９４· 中国医院药学杂志２０１５年３月第３５卷第６期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｍａｒ ２０１５，Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．６