全 文 ：新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
2012年 第30卷 第5期
2012 Vol.30 No.5
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种
以慢性滑膜炎、进行性关节损伤为特征的自身免疫
性疾病，是目前全球关注的疑难病症之一。绝大多
数患者不仅血清类风湿因子（RF）水平升高，并且血
浆中有免疫复合物存在[1]；而白介素1β（IL-1β）、血清
皮质醇（CORT）水平的升高是RA发病的重要因素［2-3］。
而佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis，AA）大鼠的关
节组织病理及免疫学指标与人RA有许多相似之处，
为目前研究RA及筛选评价抗炎免疫药物的较理想
动物模型之一[4]。新疆准噶尔乌头为毛茛科植物准
噶尔乌头（Aconitum soongaricum Stapf）的干燥块根，
主要分布于新疆天山山脉海拔1 600～2 400m的山坡
草地、灌丛和林缘，产于我国新疆北疆地区，民间常
作为草乌的代用品使用，同时也是哈萨克族、回族
等少数民族传统民族药的重要药材。其性味辛、苦、
大热，有毒，具祛风散寒、止痛消肿、通经活络的功
效[5]。本实验选择大鼠佐剂性关节炎模型观察准噶
尔乌头不同质量浓度水提取物的治疗作用，探索药
物的作用机制，为临床合理用药提供实验信息。
1 实验材料
1.1 新疆准噶尔乌头鉴定 由自治区中医医院李
永和主任中药师鉴定。
1.2 新疆准噶尔乌头提取物 取新疆准噶尔乌头
生品300g，加10倍量水浸泡1h，煮沸后煎50min，4层
纱布过滤。二煎加8倍量水，煮沸后煎30min，4层纱
布过滤，合并2次滤液，按每100mL水煎液加入
40mL95%的乙醇溶液，置4℃冰箱内48h，2 000r/min
离心10min，取上清液置65℃恒温水浴锅内，浓缩成
300%的药液，每毫升浓缩液相当于0.33g生药材。实
验时，用蒸馏水将提取物稀释并配制成每毫升含
3.3mg生药材的受试液，备用。
1.3 试剂 醋酸泼尼松片（浙江仙琚制药股份有限
公司生产，批号：H33021207）；0.9%氯化钠注射液
（国药集团新疆制药有限公司生产，批号：
H65020254）；Freund‘s完全佐剂（sigma公司，批号：
100M8724）。
1.4 仪器 调温电热套（巩义市予华仪器有限责任
公司）；HH-2数显恒温水浴锅（金坛市华峰仪器有
限公司）；HC-3518高速离心机（科大创新股份有限
公司中佳分公司）；PV-200足趾容积测定仪（成都泰
盟科技有限公司）；电子天平BS600+（上海友声衡器
有限公司）；洗板机、酶标仪（赛默飞世尔科技公
司）；低温生化培养箱B1-80A（施都凯仪器设备上海
有限公司）；大鼠白细胞介素1β酶联免疫检测试剂
盒、大鼠皮质醇酶联免疫检测试剂盒：购自北京北
京伊普瑞斯科技有限公司。
·方药研究·
新疆准噶尔乌头对佐剂性关节炎大鼠治疗作用的实验研究
李 玲， 吴 超， 卢 军， 刘 晶， 李 娟
（新疆医科大学附属中医医院， 新疆 乌鲁木齐 830000）
摘 要：目的：观察新疆准噶尔乌头对佐剂性关节炎（AA）大鼠的作用，并探讨其作用机制。方法：设正常对照组、模型对照
组、阳性药对照组（醋酸泼尼松片6mg/kg）、新疆准噶尔乌头高、中、低剂量组（剂量分别为30.65，15.32，7.66mg/kg）；除正常
对照组外，其余各组均采用弗氏完全佐剂（CFA）诱导大鼠AA模型；各组于造模当天灌胃给药，连续23d；观察该药对AA大
鼠踝关节足肿胀程度的影响；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组血清中白介素-1β（IL-1β）和皮质醇（CORT）含
量。结果：1）模型组大鼠踝关节足肿胀高于对照组（P＜0.01），各治疗组踝关节足肿胀度和关节炎指数均有显著降低（P＜
0.01或P＜0.05）。2）与正常对照组比较，模型组大鼠血清IL-1β、CORT水平均高于正常组（P＜0.01），表示造模成功；与模型组
比较，阳性组、新疆准噶尔乌头高、中、低剂量组可降低白细胞介素1β、皮质醇含量，有统计学差异（＊P<0.05或＊＊P<0.01）。
结论：新疆准噶尔乌头可能是通过免疫调节机制，对佐剂性关节炎发挥治疗作用，高，中，低剂量的新疆准噶尔乌头可以通
过抑制炎症细胞因子，从而实现对AA大鼠的治疗作用。
关键词：新疆/准噶尔乌头；佐剂性关节炎；白细胞介素1β；皮质醇
基金项目：自治区自然科学基金项目（2011211A092）；国家自然科学基金项目30960514。
作者简介：李玲（1972-），女，副主任中药师，在职研究生同等学历，研究方向：中药质量标准研究。E-mail：wlmqlll@126.com
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2012年 第30卷 第5期
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新疆中医药
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1.5 动物 清洁级昆明种大鼠72只，雌雄各半，体
质量150～200g，由新疆维吾尔自治区实验动物研究
中心提供，动物生产许可证号：SCXK（新）2003-0002。
2 实验方法
2.1 大鼠模型的建立[6]与分组给药 取SD大鼠72
只，随机分为6组，每组12只，雌雄各半，即正常对照
组，模型组，醋酸泼尼松阳性组（6mg/kg），新疆准噶
尔乌头高、中、低剂量组（30.65，15.32，7.66mg/kg）。
除正常对照组外每只大鼠均于右足跖皮内注射
0.1mLFreund’s完全佐剂（20mg/mL）致炎，正常对照
组注射等量生理盐水。致炎当天开始给药，各给
药组每只大鼠每天灌胃相应受试药物，连续给药
23天。
2.2 AA大鼠继发性侧关节肿胀度测定 在致炎前
和致炎后第14、17、21天，分别测定大鼠右后足跖容
积，求出肿胀度（△mL=致炎后容积-致炎前容积），
以观察准噶尔乌头对AA大鼠继发性炎症的影响。
2.3 AA大鼠多发性关节炎指数的测定 致炎后第
14、17、21天观察并记录全身关节病变程度，全身病
变按5级评分法评价[7]。0分：无红肿；1分：趾关节红
肿；2分：趾关节和足跖肿胀；3分：踝关节以下的足
爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。根
据未注射佐剂的其余3个肢体的病变程度累计积
分，计算出多发性关节炎指数（arthritis index，AI），
即3个肢体评分相加。
2.4 血清白细胞介素-1β、皮质醇CORT的测定 给药
治疗23天后将上述各组大鼠分别处死，腹动脉采血
5mL，3000r/min离心15min，取上清-80℃冰箱保存。
采用ELISA法检测IL-1β、CORT。
2.5 统计学处理 所有数据均采用SPSS17.0统计
软件进行分析，组间比较采用配对资料t检验。
3 结果
3.1 新疆准噶尔乌头对AA大鼠继发侧关节肿胀度
的影响 造模后（给药前），模型组和各给药组大鼠
的关节肿胀度明显大于正常对照组，有显著性差异
（P＜0.01），表明造模成功。给药后第7、14天，新疆准
噶尔乌头低剂量组可降低佐剂性关节炎大鼠的关
节肿胀度，与模型组比较，有统计学差异（P＜0.01）；
给药后第21天，阳性组和新疆准噶尔乌头高、中、
低剂量组均可降低佐剂性关节炎大鼠的关节肿胀
程度，与模型组比较，有统计学差异（P＜0.01）。见
表1。
注：与正常组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
表1 新疆准噶尔乌头对AA大鼠继发性侧关节肿胀度的影响（n=12）
组别 剂量（mg/kg）
足跖容积（mL） 给药后足趾肿胀度（△mL）
致炎前 致炎后 第7天 第14天 第21天
正常组 — 1.689±0.159 1.797±0.191 0.108±0.137 0.035±0.094 0.025±0.118
模型组 — 1.671±0.180 2.551±0.281▲▲ 0.879±0.236 0.562±0.243 1.088±0.258
阳性组 6 1.777±0.185 2.509±0.266▲▲ 0.733±0.281 0.520±0.222 0.279±0.170**
高剂量组 30.65 1.814±0.199 2.640±0.103▲▲ 0.826±0.228 0.560±0.233 0.583±0.286**
中剂量组 15.32 1.791±0.212 2.536±0.491▲▲ 0.745±0.413 0.452±0.316 0.493±0.186**
低剂量组 7.66 1.752±0.342 2.302±0.350▲▲ 0.550±0.409** 0.328±0.334** 0.515±0.445**
3.2 新疆准噶尔乌头对AA大鼠关节炎指数的影响
正常组大鼠，关节无红肿，动作敏捷；模型组大鼠，
动作缓慢，致炎侧关节明显肿胀，造模第14天，非致
炎侧足爪关节发生肿胀，关节炎指数随时间推移而
逐渐增高，第21天达到高峰；各治疗组大鼠关节的
肿胀程度14天后明显减轻，新疆准噶尔乌头各剂量
组均明显低于模型组的指数，有显著性意义（P＜0.05
或P＜0.01），提示新疆准噶尔乌头对AA大鼠的继发
病变有一定的抑制作用。见表2。
表2 新疆准噶尔乌头对AA大鼠关节炎指数的影响（n=12）
组别
低剂量组 6.81±0.87** 7.17±1.11**
剂量（mg/kg）
7.66
关节炎指数
3.83±0.39
第14天 第21天第7天
模型组 — 4.00±0.00 7.81±0.40 9.92±1.56
阳性组 6 3.50±0.52** 5.55±0.69** 5.67±0.98**
高剂量组 30.65 4.00±0.00 7.45±0.69 8.67±1.30*
中剂量组 15.32 3.83±0.39 7.00±1.00* 8.09±1.22**
注：与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
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3.3 新疆准噶尔乌头对AA大鼠血清IL-1β和CORT
水平的影响 与正常组相比，模型组AA大鼠血清
IL-1β和CORT水平均升高，差异有显著性意义（P＜
0.01）；与模型组相比，阳性组、各给药组大鼠血清
IL-1β和CORT水平均降低，差异有显著性意义（P＜
0.01或P＜0.05）。见表3。
表3 新疆准噶尔乌头对AA大鼠各实验组血清
IL-1β和CORT的影响（n=12）
低剂量组 95.256±8.127＊＊7.66 293.05±29.21*
组别 CORT（ng/mL）剂量（mg/kg） IL-1β（pg/mL）
正常组 — 154.67±27.41 85.140±6.345
高剂量组 30.65 245.60±23.63** 92.714±14.201＊＊
中剂量组 15.32 281.02±19.95** 90.000±5.438＊＊
模型组 — 332.31±40.22▲▲ 113.270±10.041▲▲
阳性组 6 202.92±29.53** 96.859±23.730＊＊
注：与正常组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较：*P<0.05，
**P<0.01
4 讨论
RA是累及小关节为主的多发性对称性关节炎，
其显著特点是滑膜慢性炎症和血管增生，在其致病
过程中伴随多种免疫活性细胞的活化及细胞因子、
炎症介质的共同参与。IL-1主要来源于RA关节部位
浸润、活化的单核巨噬细胞和滑膜细胞，通过包括
协助炎症因子迁徙、增强内皮细胞表达黏附因子、
促进滑膜细胞增殖和血管翳形成、产生胶原酶及其
他中性蛋白酶、刺激软骨吸收及骨破坏等途径介导
关节滑膜发生持久性的炎症反应[8]，在RA病理过程
中起着重要作用。RA患者的血清及关节液中检测出
高水平IL-1已得到公认，提示IL-1与RA的发生和发
展关系密切。IL-1β主要由单核/巨噬细胞分泌，在
RA滑膜肥大、白细胞浸润、骨侵蚀和软骨破坏中起
重要作用[9]。还是RA关节软骨破坏过程中最重要的
一种促炎细胞因子。它们在整个病程中始终保持在
较高水平，参与多种病理学过程。皮质醇（Cort）是人
类分泌的主要糖皮质激素，是重要的应激激素。其
免疫作用表现在对抗原的识别和处理能力下降，减
少淋巴细胞增殖。本实验显示，模型组大鼠血清皮
质醇含量显著性升高；与模型组相比，各给药组血
清皮质醇含量有不同程度的降低，可明显抑制血浆
皮质醇升高和调节慢性应激状态。本实验模型表现
为：细胞免疫和体液免疫亢进，血清皮质醇含量也
相应升高，但随着给药的调节，异常增高的指标开
始下降，并逐渐达到正常状态，以达对亢进的HPA轴
功能的调整作用。研究[10]表明：皮质醇可以与细胞因
子相互作用，可降低血清TNF水平，从而减少其对
HPA轴的激活作用，而TNF可以激活HPA轴产生更
多的皮质醇。也有研究[11]表明皮质醇水平与IL-1β水
平呈显著性正相关。本实验显示，给药对血清IL-1β
的调节作用表现为降低，对Cort的调节作用表现也
为降低，与上述相关性相似。
实验结果表明，新疆准噶尔乌头高、中、低剂量
组均能明显抑制继发性足肿胀和多发性关节炎指
数；并且各给药组均能显著降低炎性细胞因子IL-
1β和CORT的产生，使紊乱的体液免疫状态得以恢
复，起到免疫调节作用，达到治疗类风湿关节炎的
目的。
参考文献：
[1] 李玉林，唐建武．病理学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2006：
252.
[2] 路秀英.免疫细胞、细胞因子及其抑制物在类风湿性关节炎发生
发展中的作用[J].国外医学·免疫学分册，1993，16（4）：183.
[3] Krishnaswamy Kannan，RobertA，Ortmann，et al．Animal models of
rheumatoid arthritis and their relevance to human disease [J].
Pathophysiology，2005，12（3）：167-168.
[4] Jacobson PB，Borgan SJ，Wilcox DM，et al.A new spin on an old
model：In vivo evaluation of disease progression by magnetic
resonance inaging with respect to standard inflammtory parameters
and histopathology in the adjuvant arthritis rat.Arthritis Rheum，
1999，42（10）：2060.
[5] 徐新，巴哈尔古丽 .哈萨克药志 [M].北京：人民卫生出版社，
2008：833.
[6] 彭成 .中医药动物实验法放学 [M].北京：人民卫生出版社，
2008：833
[7] Gu WZ，Brandwein SR.Inhibition of type Ⅱ collageninduced
arthritis in rats by triptolide [J]. Int J Immunopharmacol，1998，
20: 389 400.
[8] Isomaki P，Luukkainen R，Toivanen P，et al.The prensence of
interleuk in 1β in rheumatoid synovium and anti -imflammatory
effects on synovial fluid macrophages from patients with
tbeumatoid arthritis.Arthr Rheum，1996，39（10）：1693.
[9] 姚健.复方苦参注射液对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β、TNF-
α的影响[J].中国中医药科技，2007，14（5）：324.
[10] Igaz P，Toth S，FaulsA，Interplay between the immune and
neuroendocrine systems[J]. Med SciMonit，1998，4：728-733.
[11] 胡淑芳,李栓德,杨来启,等.军事应激下军人血清细胞因子与皮
质醇水平含量分析[J].中国心理卫生杂志，2003，17（9）：316.
（收稿日期：2012-04-25；修回：2012-07-24）
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