全 文 ：V d
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夭然产物研究与开发
NA TIJ R人 LC O l U D R Pl RE E S人 C H RA N D DE E VO L PM N ET一九九四年六月
川产八角莲中鬼臼毒素的分离鉴定及含量测定
董晓萍 曾 莉
(成都中医学院中药系 成都6 10 07 5)
摘 要 为了寻找和开发抗痛药的半合成原料鬼臼毒素 , 我们对川产八角莲的化学成分
进行了研究 . 从川八角莲 ( D y , anI ve i t c h五 ( H e lsn l et w is ) uF . 〕的根茎中分离得到一种单
体成分 , 经薄层对照 ,熔点 , U v , IR , M s 和 H ` 一 N M R 测定 ,证明为鬼臼毒家 ( P“ 卯 b y l -o
t o劝 n) 。 同时 , 作者采用薄层层析一紫外分光光度法 ,对川八角莲和小八角莲 〔D . idf fo mr is
(H . 叮 . 1 et w山 ) T . .H W` 喀〕中的鬼臼毒素进行了含蚤测定 ,分别为 0. 0 57 写和 0 . 15 % . 为
进一步开发利用鬼臼类植物提供了科学依据 。
关挂词 鬼日类植物 ,鬼臼毒家 ,含 t 测定
鬼臼具有广泛药用价值 ,我国历代均有记述 〔` 一 ` , 。
鬼臼类植物广泛分布于四川 、 陕西 、 甘肃 、 青海 、 云南 、西藏等地 , 其根茎具有“ 解热 、消炎 、
镇痛 、破血 、生肌 、能刺激肠蛹动 ” 等作用 ,有 “ 除脏腑胀满 、疗骨蒸劳热 , 跌仆损伤 、腰疼腿痛 、 风
湿瘫痪 、关节炎 、 妇女经血不调 、 去痪生新 ” 等功效 〔5 , 。 据报导 〔幻 , 鬼日树脂 (详劝 oP h yl i )n 对兔细
胞和人类皮肤与秋水仙碱具有相类似的抑制作用 ,而进一步从树脂中分离出的木脂体兰鬼
臼毒素 ,能抑制细胞有丝分裂于 中期 ,对动物肿瘤有明显的抑制作用 , 但对人体的毒性较大 。现
l右床上用其衍生物如鬼臼酸乙麟 ( s P一 I ) , 毒性较小 ,对造血系统没有损伤 ,可用于实体瘤的治
疗或与手术放射疗法合并实用 ,对乳腺癌 、 膀肤癌及皮肤癌有效 。 鬼 臼毒素的节叉衍生物 ( s P
一 G )毒性更小 , 可局部应用于治耳 、鼻 、 咽的肿瘤 。 另一种鬼 臼木脂体的衍生物 v M 一 2 6 , 毒性
也很小 , 不仅能中止核有丝分裂 ,并能阻止细胞进入分裂期 ,导致细胞快速溶解 , 对晚期淋巴网
状细胞肉瘤有效 〔卜 ’ 。 , 。
目前 , 欧美科学家用鬼臼毒素为原料 , 进行结构修饰 ,合成了一 系列衍生物 ( S P G 82 7 , S IP
一 7 7 , vM 一 66
, v P 一 1 6一 2 3 等 ) , 以降低毒性 ,提高疗效 。 因此 ,鬼臼毒素具有一定的国际市场 。
川产鬼臼类植物化学成分研究较少 。 我们从川八角莲中分离得到一种结晶成分 ,经 T L c 、
MP
、
vu
、
IR
、
M s 和 lH 一 N MR 等鉴定 ,与鬼臼毒素一致 .
为开发鬼 臼毒素资源 ,我们采用薄层层析一紫外分光光度法测定了川八角莲和小八角莲
中鬼 臼毒素的含量 ,分别为 0 . 0 57 %和 0 . 15 % ,为进一步开发利用提供了依据 。
收稿 日期 : 1 99 3 年 1 0 月 1 9 日
DOI : 10. 16333 /j . 1001 -6880. 1994. 02. 004
V o l
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实验部分
1
.仪器与试药
熔点用wC 一 1型显微熔点测定仪测定( 温度计未校正) ;紫外光谱用 日本岛津U v 一 21 0 0
型紫外分光光度计 、 日本岛津U V一 20 4型紫外分光光度计 、 日本岛津U v 一 21 0型紫外分光光
度计 、 上海 7 0 2 5型紫外分光光度计 、 上海 7 1 5G型紫外分光光度计测 定 ;红外光谱用美国N i c o -
t e l2S 0XB 型红外光谱仪 测定 ;质谱用 HP 58 98 A气质联用仪测定 ;核磁共振用r Bu kr e A c一
E 0 2 o型核磁共振仪测定 ;层析用硅胶和硅胶 G均为青岛海洋化工厂生产 ;硅胶 G板 :自制 , 含
0
.
5% CM c
,
1 1 5℃ 活化半小时 ; 其他试剂均为 A R 。
2
, 鬼白树脂的提取及鬼日毒素的分离 、 纯化
取川八角莲根茎干燥粉末 5呢 ,用 95 % 乙醇回流提取 ,提尽可溶性成分 , 合并乙醇提取液 ,
减压浓缩至糖浆状 (约 20 m o 。 放冷后 ,缓缓倾入 5 oml 蒸馏水中 ,慢慢搅拌 ,立即有黄色无定形
树指状沉淀折出 ,滤集沉淀 ,得八角莲树脂 1 . 86 9 。
取上述树脂 , 研碎 后用氯仿捏溶 , 将氯仿溶解部分回收氯仿后 , 所得残渣溶于适量苯和
9 5% 乙醇溶液 ( l : 1) 中 ,放置一周 ,析出结晶 。将粗结晶加氯仿一丙铜 (9 . 5 : 0 . 5) 少许使溶解 ,
通过硅胶干柱 , 以氯仿一丙铜 (9 . 万: 0 . 5) 洗脱 ,分份收集 , 每份 2而 ,共收集 40 份 ,合 ;仁第 14 一
1 7 份 ,缓缓挥去部分溶剂 ,得白色针状结晶 I ( 2 1m g ) 。
3
. 鬼白毒素的鉴定
晶 I 约 l m g , 以 l耐 乙醇溶解 , 点于硅胶 G 薄层板上 ,分别 以氯仿一甲醇 ( 9 : 1 ) , 氯仿一丙
铜 ( 8 : 2) 和氯仿一乙酸乙酷 ( 8 ` 2) 展开 , 喷以 20 纬硫酸乙醇溶液 , 置 1 15 ℃加热 5 分钟 ,均 显
单一斑点 。 m p . 1 1 3一 1 1 5℃ ; U v : ) .黑 n m ( 10 5 。 ) , 2 9 2 ( 3 . 6 0 ) ; IR :嘿 e m 一 ` 3 5 0 0 , 1 7 5 0 , 1 6 0 0 , 1 5 1 0 ,
1 4 2 4
,
1 3 3 8
,
1 2 4 0
,
1 1 4 0
,
1 0 4 0
,
1 0 0 0
,
9 4 0 ; M S ( m /
e
)
: 4 1 4 ( M +
,
1 0 0 ) ; H
` 一N M R ( 6 ) : 4 . 7 6 ( I H , d , J
= 8
.
7
,
H一 1 ) , 2 . 8 ~ 2 . 7 ( ZH , m , H一 2 和 H一 3 ) , 4 . 5 9 ( I H , m , H一 4 ) , 4 . 5 9 ( I H , m , H一 1 1 a ) ,
4
.
0 9 ( I H
,
t
,
J 一 9 . 1 , H一 1 1日) , 6 . 5 1 ( I H , S , H一 5 ) , 7 . 1 1 ( I H , S , H一 8 ) , 6 . 3 8 ( ZH , S , 2 ` 一 H , 6 ` 一
H )
,
5
.
9 7 ( ZH
,
d
,
J = 1
.
2
,
o C H Zo )
, 3
.
8 4 ( 3 H
, S , 4` 一 o M e ) , 3 . 7 5 ( 6 H , S , 3 ` , 5 ` 一 ZO M e ) -o 上述数
据均与鬼日毒素 ( p od o ph y l l o t o对 n )文献值川一 ` , 〕一致 。
4
. 鬼白毒素的含 t 测定
鬼 臼毒素的含量测定文献报导多采用变 色酸法 “ ” , 其次有轻胺一三氯化铁法 “ 5 , ,薄层扫
描法 “ ` , ,高压液相色谱法 〔, 7 , 。 本实验采用薄层层析— 紫外分光光度法 , 以标准品溶液的百分消光系数 (E ;二)为对照 ,测定鬼臼素的含量 。
( 1) 样品溶液的制备
准确称取生药 () 11八角莲和小八角莲 )干燥粉末 L初 目 ) 各 g3 , 分别置索 氏提取器中 , 以
95 % 乙醇 1 50 ml 回流提取至近无 色 , 将提取液挥干 , 溶于无水乙醇 中 , 分别转入 25 ml 容量瓶
中 ,加无水乙醇至刻度 , 摇匀 。 精密吸取川八角莲提取液 4即 I ,小八角莲提取液 2 。川 ,分别点于
硅胶 G 薄层板 ( 20 义 20 c m )上 , 以氯仿一 甲醇 (9 . 5 : 0 . 5) 展开 ,用鬼臼毒素纯品对照 ,侯溶剂达
到顶端 ,将薄板取 出 , 于紫外灯 ( 2 5如 m )下划出斑点位置 。 用小刀将斑点上的硅胶小心刮 人塞
有脱脂棉的小漏斗中 ,用无水乙醇 3 0ml 洗脱 。 将洗脱液浓缩 ,移入 5闻 容量瓶中 ,加无水乙醇
至刻度 ,摇匀 ,即得样品溶液 。 同时按上法制得空白溶液 。
V ol
。
6 No
。
1
() 2标准溶液的制备
精密称取鬼臼毒素纯品 Zl g n ,于 50 耐 容量瓶中 ,加无水乙醉溶解并稀释到刻度 ,摇匀 .
( 3) 吸收曲线
侧定标准溶液 、样品溶液及空白溶液的紫外吸收曲线 ,如下图 。
。. 。
01 1}一空白溶液
小八角莲人
吸光度
川八角莲甲卜协从认扩刀汉夕
/
.
1以认从
、 . 子 、
、
连与
3 5 0
们日ùl..e0J反J,乙,`.0
( 4) 鬼臼毒素百分消光系数 (E 思 )的测定
取鬼 臼毒素标准 溶 液 (1 % ) , 用五 种不 同 型号 的 紫外 分光光 度计 , 在最大吸 收 波长
( 2 9 2 n m )处测定吸收度 ,如表 z 。
裹 1
1」V 仪 U V 一 2 1 0 0 U V 一 2 4 0 U V 一 2 1 0 7 5 2 0型 7 5 l G 型 A
A 0
,
3 4 9 0
.
36 6 0
.
3 5 2 0 3 6 1 0
.
3 5 6
.
0
.
3 5 7
由公式 : A ~ E c L ,得 E思~ 89 . 3 。
结果与讨论
1
. 从川八角莲的根茎中分离得到的晶 I ,经薄层层析 ,熔点及光谱鉴定为鬼 臼毒素 。
2
. 将川八角莲和小八角莲样品溶液分别置波长为 2 9 2n m 处测定吸收度 A 值 。 测定结果如
表 2 .
表 2
样 品
j一,八角莲
小八角莲
0
.
5 1
0
.
6 8
2
0
.
5 2
0
.
6 1
0
.
4 8
0
.
6 4
0
.
4 7
0
.
6 2
A
0
.
4 9 5
0
.
6 3 7 5
根据 c ~ A E/ L ,得川八角莲中鬼臼毒素的含量为 0 . 05 7% ,小八角莲中为 0 . 15 % 。
20 V
o l
.
6 No
.
1
3
.测定结果表明 ,小八角莲中鬼臼毒素的含量较高 ,具有一定的开发价值 。
4
. 本实验用紫外分光光度法 , 直接用百分吸收系数计算含量 ,避 免每次实验需用标准品并
做标准曲线 ,操作简便 ,快速 , 结果较准确 。
参 考 文 献
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I S O L A T IO N
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D E T E R M E N A T IO N O F P O D O P H Y L L O T O X IN F R O M D Y S O M A
G E N U S P L A N T S G R O丫V I N G IN S I C H U A N
D o n g X i a o Pi n g
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,
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二夕d o OC l le 夕e o f 介 a d ` t o n a l C h i n e o e M e d `e ` ,` e . C he 、 g d u
6 1 0 0 7 5 )
A bs t ar e t I n o r d
e r t o s ea r e h t h e P la n t so u
r e戈 f o r t h e P o et n t i a l a n t i tu m o r a g e n t s , w e h a v e s tu d i e d th e
e h
e
m i e a l e o n s t i t u e n t s f r
o m D y s os m a P l a n st i n S i e h u a n
.
P叱 o Ph y l l o t o x i n , w h i e h h a s b e e n u s e d a s a r a w
m a t e r i ca l
o f s y n t h e it e a n it t u m o r a g e n ts
,
w a s i so l a t e d f r o m th e r h i z o m e o f D y s o s m a v e i t e h il ( H e m s l e t
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) F u
.
I st s t r u e t u r e w a s i d e n t i f ied b y i n t e r P r e at ti o n o f i st 印e e t r a l d a ta ( U V , IR , M S a n d H r N M R )
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m山 d e d b y T L e 一 U V s详 e t r o p h o t o m e t r y . T h e y w e r e 0 . 0 5 7% a o d 0 . 1 5 % , r es p e e ts v e l y . T h e r e f 6 r e t h e
r e s u l st P r o v id e d a 义 ie n t if i e b a e k g r o u n d f o r d e v e l o P m e n t a n d u t i l让 a t i o n o f D y s o s m a P la n t s .
K e y w o r山 D u s os m a P la n ts ; P do o Ph y l l o t o x in ; o u a n tj t a t一v e d e t e r m i n a t i o n