全 文 ：高效液相色谱法测定小八角莲中鬼臼毒素含量①
中南大学湘雅三医院(410013)　张杰 ,周春山② ,向大雄③ ,陈皓
摘要　目的:建立小八角莲药材中鬼臼毒素高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法。方法:以 C18为固定相 ,甲醇:0. 1%
磷酸水(60:40)为流动相 , 检测波长为 292nm ,进样量 10μl。结果:鬼臼毒素进样量在 0. 20 ～ 2. 00μg范围内与峰面积线性关
系良好( r=0. 9999, n=5),平均加样回收率为 100. 57%, RSD为 1. 92%(n=6)。结论:该方法简便 、快速 、准确 ,能有效测定小
八角莲药材中鬼臼毒素含量。
关键词　小八角莲;鬼臼毒素;高效液相色谱法
　　鬼臼毒素具有抗肿瘤和抗病毒的重要生物活性 , 广泛
用于治疗肛门生殖器疣和传染性软疣 [ 1] , 其衍生物依托泊
苷 、替尼泊苷等已被成功用于临床治疗各种肿瘤 [ 2 ～ 3] 。有文
献报道 , 小檗科八角莲属植物小八角莲中鬼臼毒素含量
高 [ 4] , 可作为提取鬼臼毒素来源植物 ,具有较高开发利用价
值。为了准确测定小八角莲中鬼臼毒素含量 , 指导小八角
莲开发利用 , 现将小八角莲中鬼臼毒素含量测定研究方法
介绍如下。
1　仪器与试剂
1. 1　仪器　岛津 LC10ATvp型高效液相色谱仪 (日本岛
津);AE200型电子分析天平(M ETTLER)。
1. 2　试剂　小八角莲药材(湖南省产药材 , 采自湖南省张
家界 , 其他省份产药材购自湖南振湘中药材有限公司;经湖
南中医药大学周日宝教授鉴定为小檗科植物小八角莲 Ra-
dix e t Rh izom a Dyso sm a difform is);鬼臼毒素(购于中国药品
生物制品检定所 , 111645 - 200301);甲醇 (美国 Tedia公司 ,
色谱纯);磷酸 (武汉化学试剂厂 , 分析纯 );重蒸馏水 (自
制);其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　供试品溶液制备　(1)药材样品溶液制备。取小八角
莲药材粗粉 0. 5g,精密加入甲醇 50m l, 精密称定 , 超声处理
30m in, 放冷 ,称定质量 , 加甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,
即得。 (2)对照品溶液的配制。精密称取鬼臼毒素对照品
5m g于 50m l量瓶中 ,加甲醇使其溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得。
2. 2　色谱条件　采用 HPLC测定鬼臼毒素含量。 C18柱
(250mm ×4. 6mm , 5μm, K rom asil);柱温:30℃;流动相:甲
醇:0. 1%磷酸水 (60:40);流速:1. 0m l m in- 1;检测波长:
292nm。鬼臼毒素对照品和小八角莲药材色谱图见图 1和
图 2。
2. 3　标准曲线制备　上述鬼臼毒素对照品溶液分别进样
2、4、 8、16、 20μl, 测定 , 以鬼臼毒素含量为横坐标 , 峰面积积
分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 结果回归方程为:Y=56. 81X
- 0. 69667, r=0. 9999, 鬼臼毒素在 0. 20 ～ 2. 00μg范围内线
性关系良好。
2. 4　精密度试验　精密吸取同一份供试品溶液 10μl, 连续
进样 5次 , 测定峰面积积分值 , 结果峰面积积分值 RSD =
0. 56%, 结果精密度良好。
2. 5　稳定性试验　在以上色谱条件下 , 将鬼臼毒素对照品
标准溶液分别于 0、4、8、12、24h进样测定 , 以峰面积为指标 ,
RSD为 0. 79%,样品室温稳定性良好。
2. 6　重现性试验　取小八角莲药材样品 5份 ,精密称定, 分别
测定 ,结果平均含量为 10. 2mg g - 1 , RSD为 1. 02%(n=5)。
图 1　鬼臼毒素对照品色谱图
图 2　小八角莲药材色谱图
2. 7　加样回收率试验　取已知鬼臼毒素含量的小八角莲药
101 　　　　　　第 23卷第 4期2007年 7月 湖南中医杂志HUNAN JOURNAL OF TRADIT IONAL CH INESEM EDIC INEVo l. 23　No. 4Jul　2007
①
②
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本研究系湖南省科技厅资助项目(编号:06SK4063)
通讯作者 , 中南大学化学化工学院 , Tel:(0731)8879797
中南大学湘雅二医院(410005)
材样品 6份 , 精密称定 ,分别加入不同量的鬼臼毒素对照品
溶液 , 分别测定 ,其结果见表 1。
表 1　加样回收率试验结果
序号 取样量(g)
已知量
(m g)
加样量
(mg)
测得量
(m g)
回收率
(%)
1 0. 1389 1. 42 1. 32 1. 33 100. 76
2 0. 1373 1. 40 1. 32 1. 35 102. 27
3 0. 2519 2. 57 2. 64 2. 58 97. 73
4 0. 2506 2. 56 2. 64 2. 69 101. 89
5 0. 5012 5. 11 5. 28 5. 39 102. 08
6 0. 5003 5. 10 5. 28 5. 21 98. 67
　　注:平均值为 100. 57%;RSD为 1. 92%
2. 8　小八角莲药材含量测定　取小八角莲药材 3批 , 每批
各取 3份样品 , 精密称定约 0. 5g, 分别按照上述方法进行含
量测定 , 结果见表 2。
表 2　小八角莲含量测定结果(n=3)
批次 鬼臼毒素含量(mg g - 1) 平均含量(mg g - 1) RSD(%)
1 10. 13　10. 20　10. 29 10. 21 0. 79
2 32. 39　32. 82　32. 96 32. 72 0. 91
3 15. 72　15. 62　15. 51 15. 62 0. 67
2. 9　不同省份产小八角莲鬼臼毒素含量比较　分别取湖
南 、云南 、四川 、贵州 、安徽 、湖北产小八角莲药材 3批 ,每批
各取 3份样品 , 精密称定约 0. 5g, 分别按照上述方法进行含
量测定 , 比较不同省份产小八角莲鬼臼毒素含量 , 结果湖南
省产小八角莲鬼臼毒素含量较高 ,具有产业化开发价值。
3　讨　　论
3. 1　通过以上试验 ,结果表明采用高效液相色谱法测定小
八角莲中鬼臼毒素含量方法准确 、可行 。高效液相色谱法
测小八角莲色谱条件:以 C18为固定相 , 甲醇:0. 1%磷酸水
(60:40)为流动相 , 流速为 1. 0m l m in- 1 , 检测波长为
292nm, 柱温为 30℃,进样量为 10μl。
3. 2　小八角莲作为湖南省山区和丘陵地带广布的特色植
物 ,主要化学成分有木脂素 、黄酮和鞣质。有研究表明 ,小八
角莲中木脂素具有较强的生物活性 , 鬼臼毒素是木脂素中
的主要成分 ,含量高达 1% ～ 3%。因此 ,小八角莲可作为鬼
臼毒素提取新的药用资源。开展药材含量测定研究 ,对药
材质量进行准确控制 ,为药材精深加工研究提供基础 , 具有
重大意义。
3. 3　鬼臼毒素是一种芳基四氢萘内酯类木脂素 , 其内酯环
为反式 ,遇碱易异构化为顺式。 含量测定研究中流动相 pH
值对其色谱行为影响较大 , 加入适量磷酸将流动相调至呈
酸性 , 既可改善峰形 , 消除鬼臼毒素拖尾现象 , 又可使鬼臼
毒素在分析过程中始终保持稳定 , 有利于保证含量测定的
准确性。
参考文献
[ 1] 　M ark os, A. R. The su ccessful treatm en t ofM ollu scum con tag iosum
w ith podophylloto - xin (0. 5%) se lf - app licat ion. In.t J. STD
AIDS 12(2001), 833.
[ 2] 　W rasidlo, W. , S chro d¨er, U. , Bern t, K. , H u b¨ ener, N. ,
Sh abat, D. , G aed icke, G. , Lode, H. Syn th esis, hyd roly tic act i-
vation and cytotox icity of etopos ide p rodrugs. B ioorg. M ed.
Chem. Let.t 12(2002), 557 -560.
[ 3] 　M aqboo l, M. , C ushm an, K. E. , M oraes, R. M. M ayapple:a re-
view of th e li teratu re from a horticu ltu ral perspective. Annual Re-
port of the North M ississippi Research and Extension C enter.
M iss. Agric. For. E xp tS ta. Info. Bu l.l 375(2001), 313 - 319.
[ 4] 　董晓萍 ,曾莉. 川产八角莲中鬼臼毒素的分离鉴定及含量测
定 [ J] .天然产物研究与开发 , 1994, 6(2):17 - 20
(收稿日期:2007 - 04 - 23)
本　刊　稿　约
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102 　　湖南中医杂志　　　　　　　　　　　　　　　　2007年第 23卷第 4期(总第 134期)