全 文 ：第 5卷 ’ 第 1期 砚 代 应 用 药 学 9 18 8年 2月
高效液相色谱法分析六角莲中的鬼臼毒素
浙江 医学研究院 李文钧 席玉莲 郑永兴
浙江省洲试中心 庄向平 何 彩英
提要 本文应用高效液相 色谱法 ,对 浙江部分地区的六角莲 〔D , s o s m 。 p xe i a o th。 ( H a n e e ) w 。。 d s〕 中
的鬼臼毒素进行了分离侧定。 实验使用 Z or ab x O D S反相柱 , 甲醇: 水 ( 4苏: 5 5 )为流动相 , 检侧波 长 2 8 o n m .
蛾果 表明鬼 日毒素在 3 4 . 2 8分钟呈单一吸收峰 , 临安、 金华和建德六角莲分别含鬼臼专紊 。 . 18 , 。 . 9 5和 0 . 17 % 。
鬼臼毒素 ( P o d o p h y l l o t o x i n )为鬼臼类植
物的活性成分之一 [` l , 当前主要用于人工合
成鬼臼乙叉试 ( V P 1 6 , 。 t o p o s id e ) 和鬼 臼 唾
吩试 ( V M 2 6 , t e n ip o s id e ) 等抗癌新药 。 因而
有关鬼臼类植物的资源分布和成分分析的研
究 , 具有一定应用价值 。 我们使用高效液相
色谱法 , 对鬼臼毒素的测定方法及其在浙江
部分地区的六角莲中的含量作了初步分析。
一 、 仪铃与样品
1
. 仪器 岛津 L公 4A 型高效液相色谱
仪 , SPD 一 ZA S型分光检测器 , C 一R ZA X 型数
据处理机。
2
. 试剂 提取用乙醇为药用 规 格 , 侧
定用甲醇和水按 H P L C常规精制脱气 。
3
. 植物样品 六角莲 , 俗称八角金盘 ,
分别于 85 年 9 、 10 和 n 月采自浙江临安 、 金
华和建德山区 , 由我院生药室协助采集 , 并
鉴定为小粟科八角莲属六角莲 D y s os m : p le i-
a n t h a ( H a n e e ) W
o o d s
。
4
. 测定样品 取各地六 角 莲 根 茎 2 0
克 , 烘干粉碎 , 95 % 乙醇回流提取至无色 (约
8 小时 ) , 提耶液减压回收 乙醇 , 浓缩 残液
加水后 析出沉淀 , 过滤得黄棕色树脂 , 烘干
称重 , 得六角莲中的树脂含量 。 配制树脂 的
甲醇溶液 , 约 10 m g / m l , 临用前稀释 20 倍 ,
即为测定样品 , 供 H P L C 分析 。 每份样品重
复 3 次。
5
. 标准样品 精制鬼臼毒素 , 中科 院
上海药物所赠给 。 精密称量 , 配成约 Zm g /司
甲醇液 , 临用前稀释 20 倍 , 得 10 0林g /m飞标
准溶液 。
二 、 洲定方法
1
. 色谱 ’条 件 色谱 柱 z ol bax O D s,
5协m , 小4 . 6nu ( i
.
d ) x 25 0nu
, 流动相为 甲
醇 : 水 ( 4 5 : 5 5 ) , 检出浓度 2 8 0n m , 灵敏 度
0
。
0 1 A U F S
, 流速 l m l / m i n , 柱温 3 7℃ , 积分
仪纸速 Zm m /m in , 衰减 l , 进样一般不超过
1 0林l 。
2
. 标准曲线 取上述标准溶 液 , 系 列
稀释 , 使进样浓度约 为 5一 1 0 协g /m l , 相当
于进样量 5 0一 o o n g , 按峰面积 A (协V · S ) 一进样浓度 C (协g / m D绘制标准曲线 。
3
. 含量测定 含量测定用外标法进行 。
根据标准样品迭加和保留时间鉴脱峰形 , 样
品溶液经 H PL C 分离后 , 记录分离图谱和峰
面积 。 根据峰面积而计算树脂测定溶液中的
鬼臼毒素浓度 , 再由六角莲中的树脂含量 ,
便可算得各地六角莲根茎中的鬼 臼 毒 素 含
量 。
三 、 结果与讨论
1
. 标准溶液
标准溶液的 H P L C 分离结果表明 , 精制
DOI : 10. 13748 /j . cnki . i ssn1007 -7693. 1988. 01. 007
鬼臼毒素为单一吸收峰 , 保留时 afl 34 . 28 分
(图略 ) 。
每份标准样品重复测定 5 次 , 求平均值
及变异系数 。 所得标准曲线式如图 1 , 结果
娜竿 ’ 招
表明实验 范 围 内线 性 良好 , A = 2 8 4 . 5 十
8 7 7
。
SC
, r = 0
。
9 9 9 9
。
标准溶液测定结果的重现性可 由表 l 所
见 。 以 89 协盯m l 的标准溶液为例 , 其峰面积
为 7 6 9 1 0士 1 7 0 3 , 变异系数 2 . 2 1% ( n 二 5 ) 。
六种浓度的标准溶液 ( 8 . 9一 8 9协g /m D 的 变
异系数在 2 。 21 一3 。 41 %之间。
回收试验以标准溶液与样品溶液等量混
合后进行。 混合溶液中标准与样品的鬼臼毒
素峰形迭加成单一峰 。 1娜 g /m l标准液的净峰
面积为 1 0 15 2士 5 6 7 。 6 , 变异系数 5 . 5 9 % ( n =
6 )
, 实测浓度 1 1 .卫5士 0 。 3 2协g /。 l , 回 收 率
O…叫自闷臼的帕四
一一而 r一一一下:犷一点孺 `
鬼臼毒素的标准曲线ì 。白。 图 1 表 1 标准溶液 的浏定结果
加样浓度 邝 g nz/ 1)
加 样 摄 ( n g )
1 7
.
8 3 5
.
6 5 3
。
4 7 1
.
2 8 9
.
0
1 7吕 3 5 6 5 3 4 7 1 2 8 9 0
峰 面 积 (卜V 一 S )
平 均 位 (天土 S D )
变 异系 数 C V 《% )
7 3 9 6
了9 3 3
7了7 0
7 5 02
78 6 9
7 7 0 4
士 2 4 7 . 5
3
`
0 7
1 62 1 2
1 51 9 7
1 5 3 8 3
1 5 4 0 0
1 63 68
1 57 12
士 5 3 6 . 5
3
, 凌1
3 2 4 5 2
3 3 4 41
30 8 9 7
3 1 7 3 3
3 1 0 0 7
3 1马0 6
土1 0 6 2
3
。
3 3
4 7 78 3
48 4 58
49 1 33
4 6 42 1
名70 90
4 7 7 7 7
土 1 0 7 4
2
。
2 4
6 03 2 5
63 9 1 7
64 6e 9
6 4 3 4 6
e0 5 1 8
6 2 8 5 5
土 2 0 1 4
3
。
2 0
7 8 4 1 5
7 63 9 1
7 4 1 6尽
7 7 7 3 4
7 7 8 4 4
7 6 9 1 0
士 1 7 0 3
2
。
2 1
1 0 2
。
2 7 士 2 。 9 1%
鬼臼毒素含量过低的树脂缺 乏 实 用 价
值 , 故本文未作低浓度 ( < 5陀 /m D 鬼 臼 毒
素的标准曲线 。 但由峰面积与进样量关系的
回归方程式 , 可知本法颇为灵敏 。
2
. 样品溶液
不 同地区的六角莲经乙醇提 取 , 2 0 克
根茎分别可收得树脂 : 临安 , 得量 3 . 38 克 ,
得 率 1 . 69 % , 金 华 , 得 量 13 . 45 克 , 得 率
6
.
7 3% , 建德 , 得量 8 . 71 克 , 得率 4 。 35 % 。
金华六角莲的树脂得率较高。
此三种树脂的 H P L C 分离结果如图 2 。
可测知其中的鬼 臼毒 素 含量 分 别 为 临 安
1 0
.
5 6%
, 金华14 . 14 %和建德 3 . 96 % , 仍以
金华样品较高 。
)回_
匆人 二龙_ _二
一知 、 _ _夕七一一 _
喃 . , . ~ ~ 下 ~ 明 一 , 一 、 .多二 的 匀
刁卜”戮以执,`l清日湘组片氏,J
图 2 六角莲中兔臼毒素的
兀r 如 )
H P LC 分离
一
2 2
根据树脂得率折算 , 可知六角莲根茎内
的鬼臼毒素含量分别为 : 临安 O。 18 % , 金华
。 . 95 % , 建德。 . 17 % 。 即金华六角莲含鬼臼
毒素最高 , 而临安与建德则几乎相等。 部分
结果列于表 1 `
表 1 六角莲中鬼臼毒素的含量 (% )
中皿莲含角六 脂树产 地 树脂中鬼 臼毒 素 含 址 六角莲中鬼臼毒素含妞
1
.
6 9
6
。
7 3
4
。
35
1 0
.
5 6
1 4
.
1连
3
。
9 6
0
.
1 8
0
.
9 5
0
.
1 7
安华德临金建
根据 图 2 和表 1 可见 , 临安 、 建德两地
六角莲的 H PL C 色谱峰形较为接近 (图 ZA 、
C )
, 而金华样品与之有一定差 别 (图 Z )B ;
且临安 、 建德两地样品鬼臼毒素含量几乎相
等 ( 0 . 2 5 , 0 . 1 7% , 而金华样品较高 ( 0 . 9 5% )
由于临安 , 建德同为浙西北山区 , 地理环境
相近 , 而金华山区地处浙西南 , 上述结果也
就不足为奇 。
就树脂含量及树脂中鬼臼 毒 素 含 量而
言 , 也以金华样品含量较高。 临安样品树脂
含量低于建德 , 但树脂中鬼臼毒素含量高于
建德 , 以致两地的最终实际含量几乎相等。
临安样品采于秋季 ( 9 月初 ) , 建德样品采于
秋末 ( n 月中 )除了地理原因以外 , 采集季节
是否对树脂含量有所影响 , 尚属未知 。
3
. 鬼臼类植物品种复杂 , 化学成 分不
一 l] , 许多工作尚待深入 。 但若仅从实用价
值考虑 , 当前似应以鬼 臼毒素的研究为主 。 `
以往工作多用柱层层析和薄层折析进行分离
测定 , 近年来已有用高效液相色谱层析法进
行成分定性 分 离脚 l。 用 H PL C 进行鬼臼类
植物中鬼 臼毒素定量测定尤其是六角莲中鬼
臼毒素的分离测定 , 尚未见报导 。
按 C滋 er sn 21I 等的分离条件 , 以 甲脂 : 水
( 4 0
: 6 0 )流径 L i e h r o s o r b R P一8柱 , 鬼 臼毒素
和某些成分如 .日, le at it n 可能部分重 迭 , 形
成双峰 。 我们曾用M C H es s反相柱进行分析 ,
结果出峰较快 (约 2 . 8分钟 ) , 峰面积很小 , 难
于分析 。 本文目前所用的分离条件 , 和 iL m
等的相近 s1[ ; 所得六角莲中的鬼 臼 毒 素 含
量 , 和陈毓享用薄层层析的结果相仿 t’ ]。
如上所述 , 用 H P L C 法分离测定鬼臼毒
素 , 方法简便快速 , 结果准确 , 优于以往常
用的柱层和薄层法。 采自不同地区的浙产六
角莲 , 均可在用乙醇提得鬼臼树脂后 , 直接
进行 H PL C分离和测定 , 求得其中的鬼臼毒
素含量。 由于六角莲分布广泛 , 以往很少加
以利用 , 因而对于六角莲作为鬼臼类植物的
资源调查和开发利用 , 值得进一步研究 。
参 考 文 献
[ 1 〕 陈统亨. 药学学报 1 4 ( 2 ) 1 01 , 1匀7 9
〔 2 3 C a i r e二 。 D A等 : J N a t . P r o d . , ` 4 : s ` , i ,仔工
【3〕 L i m CK等: J . C h r o m a t o g r . , 2 55 : 2 d 7 , 1 0 5 3
. 产 、 沪 . 、 . ,’ . , . 户 . 、 尹 、 .’ 口 . 、 尹一 、 尹 . 、 :. 、 . ` 一、 . 户 、 . 产 、 . 广 ` , .’ 、一 、 二、 . ,’ . 、 尹 · 、 护 一、 一户、 :. 、 .沪 、 . 产 、 . 产 , .- 尹 、 . 产 、… 、 :. 、 . 。 户 、 . 护 , 、 犷 “ 、 尹 一 、 . 户、 J
中国药学会浙江省青田县支会召开年会
青田县药学支会于 1 9 88年 l 月 9 日在鹤
城镇 召开 1 9 8 7年度年会 ,’ 到会会员共 37 名 。
大会由副理事长 、 县医药公司副经理金尔扬
同志主持 , 副理事长 、 县卫生局副局长 、 郭
鲁春同志代表药学会常务理事会作了《关于
青田药学会八七年度工作报告 )o
会议期间 , 与会同志认真研究了 1 9 8 8年
活动计划 。 大家表示在新的一年里 , 在十三
大的精神鼓舞下 , 努力工作 , 艰苦奋斗 , 争
取获得更大的胜利 。 (叶德松 )
.
2 3